一种检测血液样品中循环癌细胞上Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ蛋白的表达的方法，该方法包括从所述血液样品中分离所述癌细胞，然后在所分离的癌细胞上进行能检测癌细胞相关Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ的免疫测定，其中阳性免疫测定结果表明所述癌细胞上存在Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ； 其中所述免疫测定具有下述限定的灵敏度： ａ）能以每毫升所述血液样品０．１皮克～２０皮克的Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ的水平检测癌细胞相关Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ；或 ｂ）能从以每毫升血液少于或等于１００个ＳＫ－ＢＲ－３细胞的浓度掺入血液中时的ＳＫ－ＢＲ－３乳癌细胞检测Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
目前只有25％-30％的乳癌患者基于在其原发性肿瘤的活组织检查中发现Her-2/neu(也叫做Her2/neu；HER2；c-erbB-2和erbB2)蛋白或基因的增加水平而接受赫赛汀(HERCEPTIN)治疗。文献数据指出，在原发性肿瘤活组织检查中为Her2/neu阴性结果的相当多数量的妇女(测试的26个中的11个)继续发展为其循环癌细胞上的Her2/neu阳性(Hayes DF等，Int J Oncol 211111-7；Meng S等，2004 Proc Natl Acad Sci USA1019393-98)。而且，相当多的患有乳癌的妇女不具有容易获得的活组织检查材料以用于测试Her-2-neu的状况。在Hayes等和Meng等的论文中使用的方法繁琐且耗时，需要一种快速的更加方便的检验，特别是可在医生诊所中实施的检验。Hayes等的方法需要流式细胞计数分析，Meng等的方法需要荧光原位杂交(FISH)，其比本专利技术所提到的Her-2/neu蛋白的直接检测(例如通过ECL)更加复杂和耗时。Her2/neu和赫赛汀治疗在来自患乳癌妇女的大约25％的活组织检查样品中观察到了Her2/neu癌基因的过量表达并且Her2/neu癌基因的过量表达与不良预后有关。群司珠单抗(Trastuzumab)(赫赛汀)是人源化的单克隆抗体，其抗Her2/neu受体的胞外结构域(ECD)和抑制过量表达该受体的人乳癌细胞的增殖(见Esteve FJ 2004，The Oncologist 9(附刊3)第4-9页，最近综述)。乳癌细胞上Her-2/neu的蛋白质表达可容易地达到每个细胞500,000个分子或更多的水平，如Her-2/neu过量表达的称为SK-BR-3的人乳癌细胞系的情况。目前Her2/neu的检验依靠检验患者活组织检查的组织切片的蛋白质过量表达或基因扩增。在那些具有基因扩增或蛋白质的至少2+免疫染色的妇女中，用单个试剂群司珠单抗或用与诸如紫杉醇等化学治疗剂组合的群司珠单抗已经证明有显著应答。能靶向Her-2/neu的其它试剂正在开发中且具有与本专利技术的赫赛汀相似的适用性。这些试剂包括但不限于正由Genentech开发的OMNITARG(pertuzumab)；正由GlaxoSmithKline开发的GW-572016(Xia等，2004，Oncogene 23646-653)；正由Pfizer开发的CP-654577(Barbacci等，2003，Cancer Res 634450-4459)；正由Wyeth开发的HKI-272(Rabindran等，2004，Cancer Res 2004，643958-65)。在其特异性中包括Her-2/neu的其它抗癌剂描述在Janmaat和Giaccone，2003(The Oncologist 8576-86)中。除了乳癌之外，Her-2/neu在包括卵巢癌等其它癌细胞中也是过量表达的。ECL电化学发光是一种使用设计成电化学刺激时发光的标记的过程(关于ECL的综述见Yang等，1994，Biotechnology 12193-194；也可见Blackburn等，1991，Clin Chem 371534-1539)。这些标记与合适的装置(如由BioVeris开发的)一起供检测诸如蛋白质、mRNA和DNA等各种生物分子的具有高度灵敏度的方法之用。Martin等(2003，美国专利号6,524,865)描述了基于ECL的酶免疫测定；然而没有描述检测血液中循环癌细胞上的蛋白质如Her-2/neu的应用。ECL和整个真核细胞使用整个真核细胞的ECL方法已由Chinn等公开(美国专利6,300,143 B1)。然而Chinn等的方法是用于测量细胞表面抗体的结合亲和力而不是测定细胞表面上受体分子的相对数量。且Chinn的方法起始于大量细胞(167,000细胞每ml)的纯化细胞群，与首先从全血中发现的不纯混合物中分离数量可以是很少(典型地为1至200细胞每ml；Hayes等，2002)的所选细胞群相反。Her-2/neu或相关分子的测定目前美国食品和药品管理局(FDA)批准的筛选用赫赛汀(群司珠单抗)治疗的患者的测定是(1)Her-2/neu蛋白过量表达的免疫组织化学法(DAKO的HERCEPTEST)和(2)用于Her-2/neu基因扩增的FISH(荧光原位杂交)测定(VYSIS的PATHVISION试剂盒)。这些检验已显示了患者对于赫赛汀的应答和受益的预见性(Fornier M等，2002.HER2testing and correlation with efficacy of trastuzumab therapy.Oncology161340-58)。然而，这两种测定都具有以下四个限制 1)这些测定需要活组织检查样品组织。不是所有的患者都有这样存档的容易获得的用于检测的材料。在这种情况下，唯一的选择是获得肿瘤活组织检查样品。血液样品的测定会更加方便、容易实施，且具有更快提供答案的潜力。2)非常普遍的是，首次诊断乳癌时采集的活组织检查样品在数年后当患者疾病复发时才使用。因此，使用测试旧组织材料的测定，能在作出关于是否用赫赛汀治疗患者的临床决定之前在可能为许多年的时间点上确定患者关于Her-2/neu的肿瘤状况。文献数据提出在原发性肿瘤活组织检查中具有Her2/neu阴性结果的相当多数量的妇女(26个测试中的11个)继续发展为其循环癌细胞上的Her2/neu阳性(Hayes DF等，Int JOncol 211111-7；Meng S等，2004 Proc Natl Acad Sci USA 1019393-98)，因此是用赫赛汀治疗的候选者。关于来自血液样品的循环乳癌细胞的Her-2/neu状况的测定，会提供其目前Her-2/neu状况的更加实用且快速的测定。3)由于这些测定中评分的主观性，地方实验室与中央实验室对于两种类型的测定最近已显示出显著量的相异，在一些地方实验室发现可产生高达25％的假阳性率(Fornier等，2002)。使用更加常见的免疫组织化学测定，相对于FISH估计有14％～17％的假阴性率(Seidman等，2001，J Clin Oncol 192587-95；Fornier等，2002)。使用免疫组织化学产生的14％～17％的假阴性率显示了在美国每年有数千名这样的妇女将补充为赫赛汀治疗的候选者。4)最后，这些方法是缓慢的，需要(a)待从采集位置的存储处重新获得的组织块，(b)待切割的切片，(c)大量的处理和其次很经常性的，(d)耗时和受训人员的主观性评分。这些手工分析是不方便的，其一般用于通过免疫组织化学法显示细胞染色的程度或用于显示对样品进行评分所需的阳性FISH位置的数量。对于治疗医生来说，希望提供更迅速反馈的更快测定。此外，FISH是很昂贵的且不能普遍地获得(Fornier等，2002)。Koski，1998(美国专利5,783,404)描述了乳癌细胞和乳癌组织中Her-2/neu蛋白的免疫组织化学测定，其使用能识别Her-2/neu蛋白特定部分的变性表位的单克隆抗体。然而这些测定是在纯的乳癌细胞群或如在乳癌组织中很高百本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：罗伯特·M·洛朗斯，鲁明，
申请(专利权)人：威尔斯达特生物制剂公司，
类型：发明
国别省市：
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