本发明专利技术涉及了一种分离ＩｇＡ肾病糖链异常ＩｇＡ的预装离心柱。该离心柱由上部分离管和下部收集管组成。上部分离管装有偶联蜗牛凝集素（ＨＡＡ）的亲合介质，上部分离管底部是一个滤布，下部收集管中装有缓冲溶液。蜗牛凝集素（ＨＡＡ）能与糖链异常ＩｇＡ相结合。经过离心洗脱，获得与蜗牛凝集素ＨＡＡ相结合的糖链异常ＩｇＡ。本发明专利技术还涉及了一种含有该预装离心柱的化学发光检测试剂盒和一种含有该预装离心柱的酶联免疫定量检测试剂盒及其制备、使用方法。应用该试剂盒可快速、简便的测定糖链异常ＩｇＡ的含量，准确的对ＩｇＡ肾病进行早期诊断，为ＩｇＡ肾病的预防、诊断、治疗提供支持。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及了一种分离IgA肾病糖链异常IgA的预装离心柱及应用此装置的试剂盒，属于生物
，用于对IgA肾病发生进行诊断。
技术介绍
IgA肾病(IgAN)是一组多病因引起的具有相同免疫病理学特征的慢性肾小球疾病。临床上约40％-45％的患者表现为肉眼或显微镜下血尿，35％-40％的患者表现为显微镜下血尿伴蛋白尿，其余表现为肾病综合征和肾功能衰竭。IgA肾病是世界范围内一种常见的肾小球疾病，它的流行在不同洲、不同国家或在一个国家不同地区的差异很大，如亚洲的日本、新加坡，IgA肾病的发病率占原发性肾小球疾病的50％，而美国西部的印第安人低发区只占2％。一般而言，白人、黄种人明显高于黑人的发病率。我国IgA肾病的发病率占原发性肾小球疾病的26％～34％。男女之比大约是2∶1。以血尿为主的IgA肾病目前尚无特效的治疗。目前诊断依据1.肉眼血尿或显微镜下血尿或无症状性蛋白尿(尤其男性青年)；2.血尿为肾小球性(畸形红细胞为主)，蛋白尿为高、中分子或混合性蛋白尿，血清IgA可能升高；3.肾活检免疫病理检查肾小球系膜区可见到颗粒状IgA为主的免疫荧光；4.除外链球菌感染后急性肾小球肾炎、非IgA系膜增生性肾炎、薄基底膜肾病、狼疮性肾炎、紫癜性肾炎、肝硬化及酒精性肝病的肾损害等。本病诊断依靠肾活检标本的免疫病理学检查，临床缺乏简便的免疫学检测方法。IgA分IgA1和IgA2两个亚型。正常人血清中IgA1约占80％～90％。IgA1与IgA2亚型的重要区别之一就是IgA1分子的绞链上有O-连接寡糖链，其结构式为Ser(Thr)-GalNAc-Gal-NA，而IgA2及其它免疫球蛋白则无此糖链结构。因此通常所说的糖链异常IgA既指糖链异常IgA1。蛋白质糖基化的方式有两种N-连接方式和O-连接方式。N-连接糖基与肽链上的天冬酰胺残基相连，其糖基链较长且结构复杂；O-连接糖基与肽链上的丝氨酸或苏氨酸残基相连，其糖基链较短且结构简单。大多数的血清糖蛋白仅含有N-连接糖基而无O-连接糖基，膜上的糖蛋白的糖基则多为O-连接糖基。所有的免疫球蛋白均为糖蛋白，其中IgA糖基化程度很高，分子中含有8％的糖，而且它为少见的几种既含N-连接糖基又含O-连接糖基的血清蛋白之一，其分子每侧重链中含有2个或多于2个的N-连接糖基和3-5个O-连接糖基。目前已知的含有O-连接糖基的血清蛋白有IgD、C1抑制物、纤溶酶原、白介素-2、白介素-6、载脂蛋白CIII、载脂蛋白E和促红细胞生成素，但这些糖蛋白在血清中的含量远小于IgA1。IgA1分子O-连接糖基最基本的结构是N一乙酰乳糖胺(GalNAc)以O-连接方式与肽骨架上的丝氨酸或苏氨酸残基相连。在此基础上N一乙酰半乳糖胺可通过β1、3半乳糖基转移酶在其末端连上半乳糖基。目前研究表明，IgA肾病与IgA糖链上半乳糖状态相关。IgA肾病其典型的病理改变为肾小球基底膜上IgA1单体及聚合IgA1复合物的大量沉积。研究发现该沉淀实际上是包含IgA1的免疫复合物，而导致此免疫复合物的产生原因是IgA1由于异常糖链变化即半乳糖缺失而产生自身抗原性。IgA1的寡糖链半乳糖基缺失，导致其末端糖基N一乙酰乳糖胺GalNAc处于暴露状态。病人IgA1较正常IgA1与凝集素HAA(Helix aspersa agglutin)，结合率明显增加。IgA1半乳糖基化缺失的致病原因与肝细胞对其代谢性清除减少有关。肝细胞膜上含有非唾液酸糖蛋白受体，该受体通过IgA1寡糖链上的半乳糖Gal与IgA1特异识别，而去半乳糖型IgA1失去与此受体结合能力，因此，导致循环中去半乳糖基IgA1含量增加，并沉积到基底膜上。此外，去半乳糖基IgA1还易与IgG形成较大复合物，也阻碍了肝细胞对其摄取和处理的效能。IgA1寡糖链的末端半乳糖是由β1，3-半乳糖苷转移酶(β1，3-GTase)催化的，IgAN病人也伴有此酶的活性降低。用去半乳糖处理后的绞链区IgA1与T细胞、B细胞和单核细胞共培养，以观察受体细胞对其重新半乳糖基化的转化能力实验表明；病人与正常人T细胞和单核细胞的转化率无差别，而B细胞转化率在病人则明显降低，提示B细胞中β1，3-Gtase酶量及活性的变化。因此IgA肾病中IgA1糖链异常变化后会影响其与相应受体或其它蛋白的相互作用，从而更易于与系膜基质成份结合和形成免疫复合物，沉积于肾小球，这是导致IgA肾病的分子机理。因此，检测血清中糖链异常IgA1是早期诊断IgA肾病的关键。目前国内外尚缺乏对灵敏、特异诊断的实验室检查方法，金标准只能依靠肾活检穿刺术取肾组织，通过免疫荧光等病理分析来确诊。由于肾活检是一种创伤性手术，有一定的危险性，可引起血尿等并发症，同时手术费用昂贵，所以常不被病人所接受。临床需要一种能够快速高效检测糖链异常IgA的试剂盒，但是一直没有进展。造成此困难的原因是正常IgA与糖链异常IgA1的差异只存在于糖链，既其只有质的细微改变而无明显量的变化，以往手段无法进行二者的有效区分。凝集素是一类广泛存在于自然界的一大类非免疫来源的蛋白质或糖蛋白，它能与糖专一性地、非共价地可逆结合，并且有凝集血细胞的作用，故称为凝集素。Sumner和Howell于1936年首先从刀豆(jackbean，Canavalia ensiformis)种子纯化了伴刀豆凝集素-ConA。ConA能凝集溶液中的糖元和淀粉，ConA的血凝作用可被蔗糖抑制，因而推测ConA的血凝作用是与细胞表面糖作用的结果。目前已有近千种植物被测得具有凝集素活性。植物中，不只种子中存在凝集素，根、茎、叶、皮、果实汁中也发现有凝集素。除植物外，其它生物，如各种真菌、某些病毒、无脊椎动物、脊椎动物及至人体的各种组织和器官中都存在凝集素。凝集素可与糖专一性地结合。目前按结合糖的类型，凝集素可分为六类D-甘露糖或D-葡萄糖；N-乙酰氨基葡萄糖；N-乙酰氨基半乳糖；D-半乳糖；L-岩藻糖；唾液酸。凝集素HAA(Helix aspersa agglutin)来源于欧洲花园蜗牛，能特异与缺失半乳糖的GalNAc结合，类似的凝集素还有目前蜗牛凝集素HPA(Helix pomatia agglutin)，野生长绒毛豌豆凝集素VVA(Vicia villosa agglutin)，花生凝集素PNA(Peamut agglutinin)。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术提供一种分离IgA肾病糖链异常IgA的预装离心柱及含有该预装柱的诊断试剂盒。通过该试剂盒可以真实地检测出血清或尿液中糖链异常IgA的含量水平，准确地诊断出IgA肾病，具有极高的灵敏度，方法快速简便。一种分离IgA肾病糖链异常IgA的预装离心柱，该预装离心柱由上部分离管和下部收集管组成，所述上部分离心管装有偶联凝集素的亲合介质，所述下部收集管中装有缓冲溶液，所述分离管底部有一滤布，使得琼脂糖颗粒无法穿过的滤布。该装置通过离心收集纯化的组分。所述凝集素包括欧洲花园蜗牛凝集素HAA(Helix aspersa agglutin)、蜗牛凝集素HPA(Helix pomatia agglutin)，野生长绒毛豌豆凝集素VV(Vicia villosa)，花生凝集素PNA(Peamut agglut本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离ＩｇＡ肾病糖链异常ＩｇＡ的预装离心柱，其特征在于其由上部分离管和下部收集管组成，所述上部离管装有偶联凝集素的亲合介质，上部的分离管底部有一滤布，所述下部收集管中装有缓冲溶液。为纯化亲和吸附的蛋白，并配套清洗液和洗脱液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林长青，
申请(专利权)人：北京热景生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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