糖－氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法技术

本发明专利技术公开了糖－氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法。该方法采用高效凝胶过滤色谱法测定，采用普适校正法绘制标准曲线，绘制相对标准曲线所使用的分子量标准物质是多糖分子量标准品，普适标准曲线是根据糖－氢氧化铁复合物和多糖分子量标准品的Ｋ、α值校正而得到的；或者采用高效凝胶过滤色谱法测定，绘制分子量标准曲线的标准物质采用若干个不同分子量的与待测糖－氢氧化铁复合物属同种物质的糖－氢氧化铁复合物标准品，不需要通过Ｋ、α值进行校正。该方法误差较小，精确度较高，采用糖－氢氧化铁复合物标准品还可避免繁琐的校正工作。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子量测量领域，涉及糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，具体地说是以蔗糖铁(蔗糖-氢氧化铁复合物)为代表的糖-氢氧化铁复合物的分子量及其分布的测定方法。
技术介绍
糖-氢氧化铁复合物是目前广泛应用的抗缺铁性贫血的补铁剂，特别是应用于肾脏疾病血液透析所导致的缺铁性贫血。该类复合物的分子量及分子量分布是评价其质量的重要指标之一，研究发现糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布与药物的药理作用、临床疗效和铁的生物利用率存在着密切的关系，因此准确测定糖-氢氧化铁复合物的分子量和分子量分布对于控制和提高产品质量有着十分重要的意义。糖-氢氧化铁复合物的结构核心是多核氢氧化铁(III)，核心的表面被大量非共价结合的糖分子所占据，从而形成平均分子量从几千到几百万道尔顿(da)的大分子复合物。如上所述蔗糖铁的分子量及分子量分布范围是评价该产品质量的重要指标，准确测定糖-氢氧化铁复合物的分子量和分子量分布对于控制和提高产品质量有着十分重要的作用。而传统的测定大分子多糖分子量的方法多采用高效凝胶过滤色谱法，这是一种测定分子量及分布的相对方法，测量的准确性往往依赖于对分子量标准品的选取。若所选用的标准物质与被测物质的化学结构有较大差异，就会导致测试结果与被测物的实际分子量有较大的差异。目前，一般采用的多糖分子量标准品多为线性分子结构，如葡聚糖、聚麦芽三糖和右旋糖苷等。而糖-氢氧化铁复合物却有特殊的结构，它是糖通过其活泼羟基取代多核氢氧化铁胶体母核表面的水分子与之结合所形成的同心球结构。由蔗糖铁原子力显微镜图(见图1)可见蔗糖铁分子为球状分子且表面面不光滑，其表面凸出结构是蔗糖络合形成的，据此推断蔗糖铁分子为蔗糖分子通过络合并包被三价铁母核形成的同心球状结构。这与多糖的线性结构有很大的不同，如果直接使用一般的多糖分子量标准品测定糖-氢氧化铁复合物的分子量及分布显然会带来很大的误差，不利于该类产品的质量控制。鉴于此，为了更准确、更方便的测定这类复合物的分子量，在使用一般多糖分子量标准品绘制分子量标准曲线时，须采用适当的方法对分子量标准曲线进行校正。而另一个方面，选取合适的糖-氢氧化铁复合物标准品绘制分子量标准曲线，也同样可以达到准确测定的目的，还可以避免繁琐的普适校正工作。
技术实现思路
本专利技术的目的是建立一种普适校正法测定糖-氢氧化铁复合物分子量及其分布的高效凝胶过滤色谱法方法。本专利技术的另一个目的是建立一种无需校正的测定糖-氢氧化铁复合物分子量及其分布的高效凝胶过滤色谱法方法。本专利技术的普适校正法的原理为Mark-Houwink经验公式η＝KMα。公式中η为特性粘数，M为分子量，K、α为系数，普适校正法标准曲线的方程式推导如下标准物1以lgM-V0订定相对标准曲线，得一次方程为V0＝a-blgM1(式1)标准物2由式K1M11+α1=K2M21+α2]]>得lgM2-1+α11+α2lgM1=11+α2lgK1K2]]>lgM1=(1+α2)*(lgM2-11+α2lgK1K2)1+α1]]>(式2)将式2代入式1得V0=a+b1+α1lgK1K2-b(1+α2)1+α1lgM2]]>(式3)式3即为普适校正法标准曲线的方程式。一种测定糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布的方法，该方法为采用高效凝胶过滤色谱法测定，采用普适校正法绘制标准曲线，绘制相对标准曲线所使用的分子量标准物质是多糖分子量标准品，普适标准曲线是根据糖-氢氧化铁复合物和多糖分子量标准品的K、α值校正而得到的；或者采用高效凝胶过滤色谱法测定，绘制分子量标准曲线的标准物质采用若干个不同分子量的与待测糖-氢氧化铁复合物属同种物质的糖-氢氧化铁复合物标准品，不需要通过K、α值进行校正。所述的糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中糖-氢氧化铁复合物的糖配体是下列双糖中的一种蔗糖、麦芽糖、乳糖、纤维二糖；或者是下列单糖中的一种葡萄糖、果糖、半乳糖、阿拉伯糖；或者是下列多糖或寡糖中的一种右旋糖苷、淀粉、聚麦芽糖、糊精纤维素。所述的糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中高效凝胶过滤色谱法的测定条件为流动相是超纯水、0.02～5M硝酸钠、pH 6.0～10.0之间的0.02～5M醋酸钠、或者0.02～5M磷酸盐缓冲溶液；分析柱用一根或多根分离范围在1,000～2,000,000da之间的多糖分子量分析柱组合而成；分析柱的柱温在15～55℃之间；流速为0.02ml/min～5.0ml/min。所述的糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中流动相选用0.1mol/L的醋酸钠或0.1mol/L磷酸盐缓冲液，缓冲液的pH值是6.0～8.0；分析柱用两根填料为聚羟甲基-甲基丙烯酸树酯凝胶，填料孔径分别为120和1000的多糖凝胶柱串联；柱温为45℃，流速为0.5ml/min。所述的糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中用于绘制普适标准曲线的多糖分子量标准品重均分子量在1000da到2,000,000da之间；绘制相对标准曲线所使用的分子量标准物质是Polymaltotriose或者Dextran，优选Dextran。所述的糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中普适的标准曲线中需要K，α进行校正；K值为0.1278～0.0043，α值为0.3897～0.9263。所述的糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中当糖-氢氧化铁复合物的糖配体为蔗糖时，K值为0.1029～0.0050，α值为0.4115～0.9027。所述的糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中当糖-氢氧化铁复合物的糖配体为蔗糖时，温度为15-55℃，K值为0.0570～0.0121，α值为0.4913～0.7545。所述的糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中当糖-氢氧化铁复合物的糖配体为蔗糖时，温度为45℃，K值为0.0453～0.0461，α值为0.6000～0.7000。所述的糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中当糖-氢氧化铁复合物的糖配体为蔗糖时，温度为45℃，K值为0.0457，α值为0.614。所述的测定糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布的方法，其中当糖-氢氧化铁复合物的糖配体为蔗糖时，采用高效凝胶过滤色谱法测定，绘制分子量标准曲线的标准物质为若干个不同分子量的蔗糖-氢氧化铁复合物标准品，不需要通过K、α值进行校正。所述的测定糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布的方法，其中所采用的蔗糖-氢氧化铁复合物标准品分子量分布(D值)在1.05～1.4之间。所述的测定糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布的方法，其中所采用的蔗糖-氢氧化铁复合物标准品的重均分子量采用激光散射法测定，其重均分子量在1,000-2,000，000Da之间。所述的测定糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，其中蔗糖-氢氧化铁复合物标准品是通过以下步骤制造的采用FeCl本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定糖－氢氧化铁复合物分子量及分子量分布的方法，其特征在于：采用高效凝胶过滤色谱法测定，采用普适校正法绘制标准曲线，绘制相对标准曲线所使用的分子量标准物质是多糖分子量标准品，普适标准曲线是根据糖－氢氧化铁复合物和多糖分子量标准品的Ｋ、α值校正而得到的；或者采用高效凝胶过滤色谱法测定，绘制分子量标准曲线的标准物质采用若干个不同分子量的与待测糖－氢氧化铁复合物属同种物质的糖－氢氧化铁复合物标准品，不需要通过Ｋ、α值进行校正。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：田远年，方文，熊守军，花传政，
申请(专利权)人：南京生命能科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]