本发明专利技术涉及一种对人样品进行蛋白分组（ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ）的方法，尤其是对来自显微切割的人样品，其中将所述样品分成两个或两个以上的组，所述各组展现至少一种如下蛋白，该蛋白是每组的成员所共有的，同时能够显示组间差异。此外，本发明专利技术提供了其丰度在癌细胞、尤其是乳癌细胞、更优选是激素结合受体阳性或阴性的乳癌细胞中上调的蛋白。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种进行蛋白分组(proteomics)的方法，尤其是对人显微切割样品，以及不同的蛋白在作为乳癌诊断和/或治疗标记中的应用，和试剂在调节辅助蛋白中的应用。乳癌是在女性中所发现的最为普遍的癌症的一种。预计最新病例的数目接近215,990(32％)，同时2005年度在美国预计将有超过40,000的死亡病例。因此需要更好地去了解上述癌症潜在的分子学机制，以便改进诊断和治疗方法。为了达到上述目的，经常采用模型体系，如细胞培养模型。然而，在判断从上述体系中得到怎样的结果才能真实反映人类疾病(尤其癌症)所对应的生物学机制方面，存在诸多疑问。因此，非常有必要检测来自初始临床组织的细胞。对于上述手段，通常使用基因阵列研究方法，因为已有合适的标准研究方案。但是，性状蛋白，如已经周转或经过翻译后修饰的蛋白，则不能被基因阵列检测到。蛋白分组是对存在于复杂生物系统中的蛋白的研究。然而与该科学领域相关的并在现有技术中已知的，适用于分析大部分人类初始组织样品的方法非常少，因为通常情况下所采集到的样品材料的量非常有限。此外，相应的疾病细胞通常与组织中许多其它类型细胞相混，因此需要进一步的技术，尤其是显微切割技术来解决上述问题，但这又进一步加剧了样品量少的问题。毫无疑问，有限的蛋白量关系到对蛋白丰度的估测。因此需要作多个重复试验才能获得统计学意义上的结果，这又再次回到了样品量稀少的问题上。此外现有的筛选方法还在检测早期和较小阶段肿瘤方面存在难题。因此，本专利技术的目的是提供用于诊断和/或治疗癌症的方法、标记、治疗靶标和合适的试剂。上述方法将是有益的，能够使从利用显微切割技术得到的人样品中所获得的蛋白风度的估测更加可靠。为了达到上述目的，本专利技术首先提出了一种具有权利要求1所限定特征的方法。本专利技术方法的进一步实施方式描述在从属权利要求2-10中。另外，本专利技术包含所述方法在进行蛋白分组中的应用，和几种蛋白作为诊断标记和/或治疗靶标中的应用，上述应用是权利要求11-20所要求保护的。此外，本专利技术还涉及至少一种调节权利要求21和24所要求保护的至少一种蛋白的表达和/或活性的试剂。所有权利要求的相关描述全文引入本说明书。达到根据本专利技术的第一个目的是通过如下方法实现的，即对人样品进行蛋白分组的方法，尤其是人类显微切割样品，其中将所述样品基于预期参数分成两个或更多个组，所述组具有至少一种如下蛋白，是各组所共有的，但是在各组之间存在差异显示的蛋白。在此所用的术语“显示”等同于“丰度”，上述两个术语是指用现有方法能够检测的蛋白的表达水平，尤其是使用二维，本申请人称之为ProteoTope的分析方法。在此所用的术语“肿瘤”是指增殖细胞或组织，包括所有形式，良性或恶性或有此趋向。根据本专利技术，术语“蛋白”包括完整的或部分序列的蛋白，其中所述部分序列具有蛋白的活性。此外，术语“蛋白”包含其同工型。虽然通常人们认为分组方案在其它领域存在优势和劣势，尤其是在分析信使RNA时(Kendziorski CM，Zhang Y，Lan H，Attie AD，2003，The efficiency of pooling mRNA in microarray experiments.Biostatistics.4465-77)，但是本专利技术人首次提出并试验了对性状蛋白进行分组的方案，特别是为了诊断和/或治疗癌症的目的，尤其是乳癌。在本专利技术的一个实施方式中，基于对至少一种蛋白表现出的阳性或阴性，将人样品进行分组，特别是对至少一种受体，优选对至少一种激素结合受体，或其mRNA。优选的，上述受体是雌激素受体(ER)和/或孕酮受体(PR)。雌激素受体(ER)包含两种特异于核受体的类型，已知是雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)。分子学分析已经证实ERα，类似于其它核受体，由独立的区域组成，分别负责DNA结合(DNA结合区，DBD)，激素结合(激素结合区，HBD)和转录活化区。纯化受体的N-末端活化功能(AF-1)是构成性活化，位于C-末端部分的活化功能(AF-2)需要激素的激活。发现ERα存在于50-80％的乳房肿瘤中，同时在决定用抗-雌激素进行内分泌治疗前，考察ERα的状况是必须的，其中所述抗-雌激素是内源雌激素的竞争性抑制剂，能够抑制雌激素在乳癌中的促有丝分裂活性。在分子学基础上，它们触发ERα的失活，从而使之不能活化转录(Shiau AK，Barstad D，Loria PM，Cheng L，Kushiner PJ，Agard DA，Greene GL.1998.The structural basis of estrogenreceptor/coactivator recognition and the antagonism of this interactionby tamoxifen.Cell.95927-37.)。抗雌激素它莫西芬被用于治疗激素依赖型乳癌，经过5年的治疗后，它能降低疾病的复发，同时提高不同年龄的患者的存活年限以及改善节结状况(Come SE，Buzdar AU，Arteaga CL，Brodie AM，Davidson NE，Dowsett M，Ingle JN，JohnstonSR，Lee AV，Osborne CK，Pritchard KI，Vogel VG，Winer EP，Hart CS.2003.Second international conference on recent advances andfuture directions in endocrine manipulation or breast cancersummary consensus statement.Clin Cancer Res 9443-446.)。对于肿瘤转移的患者(该患者表现为ER肿瘤阳性)，它莫西芬的有效率大约为50％(Fisher B，Jeong J，Dignam J，Anderson S，Mamounas E，Wickerham DL，和Wolmark N.2002.Findings from recent NationalSurgical Adjuvant Breast and Bowel Project adjuvant studies in stageI breast cancer.J Natl Cancer Inst Monogr 3062-66.)。在本专利技术一个优选实施方式中，将雌激素受体作为预期参数，基于对雌激素受体所表现出的阳性或阴性进行分组(ER+和ER-组)。例如，表1显示了一种合适的分组方案。雌激素在乳癌中的促有丝分裂活性非常容易确定，同时有证据表明雌激素受体调节着保护性抗侵入作用。临床上，ER阳性(ER+)预示情况良好，包括具有较低的细胞增殖速度，并且预示肿瘤分化的组织学分析结果也会令人满意。相反，ER阴性(ER-)则对应于基本上治疗希望和总体存活可能性较差的患者。ER状况也被用于预测大体的肿瘤转移扩展位置。雌激素受体丰度高的肿瘤(ER+肿瘤)，在临床上更容易转移到骨、软组织或生殖和生殖道，而雌激素受体丰度低的肿瘤(ER-肿瘤)则更容易转移到脑和肝脏。几项研究显示ERα表达水平与Matrigel侵本文档来自技高网...
【技术保护点】
进行蛋白分组的方法，尤其是对人显微切割样品进行蛋白分组的方法，其特征在于，基于预期参数将样品分成两个或两个以上的组，所述各组展现至少一种如下蛋白，该蛋白是每组的成员所共有的，同时能够显示组间差异。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：M卡希尔，A施拉坦霍滋，R库雷克，D瓦尔维纳，H纽鲍尔，S克莱尔，
申请(专利权)人：蛋白质系统股份公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]
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