本发明专利技术提供在癌细胞中抑制抗凋亡过程促进肿瘤细胞死亡的细胞透过性肽和肽剂，以及提供治疗性癌症治疗的方法。组合物可以与常规化学治疗剂组合递送，以提供显著增加所述化学治疗剂破坏癌细胞的功效的协同作用。本发明专利技术还提供用于癌症治疗的试剂盒或系统，其包括至少一种抑制ＮＦ－κＢ抗凋亡作用的肽剂，和至少一种刺激细胞凋亡途径的化学治疗剂。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及细胞透过性肽以及这些肽运载功能性货物(cargo)从组织进入细胞的应用。本专利技术还涉及抑制NF-κB活化的因子。关于国家权利的陈述本专利技术部分由美国政府提供的资金(授予号CA99340，由国立卫生研究所，国立癌症研究所资助)而进行的。因此，美国政府可以拥有本专利技术中的某些权利。
技术介绍
前列腺癌(PCA)是美国癌症相关的死亡的第二主要起因。由于在雄激素-依赖性前列腺癌细胞中刺激程序性细胞死亡，雄激素切除术通常用作治疗法。PCA细胞通常是雄激素-不依赖性的，并且有一些随着时间变成雄激素-不依赖性的。在雄激素切除术治疗过程中最终剩下了雄激素-不依赖性细胞，并且向雄激素-不依赖性状态的进展是患有前列腺癌的男性死亡的主要起因。雄激素-不依赖性肿瘤细胞更难被消灭，已经表明其对许多抗癌药物和肿瘤坏死因子α(TNF-α)治疗法不敏感。雄激素-不依赖性RCA细胞与高剂量的化学治疗药物诸如顺铂和依托泊苷反应，但是这些药物本身具有不理想的系统性毒性水平。倘若水平足够高足以影响显著数目的肿瘤细胞，那么可能对患者构成不可接受的威胁。已经证明雄激素-不依赖性前列腺癌细胞(例如PC-3和DU145)对TNF-α不敏感，而雄激素-敏感性前列腺癌细胞(例如LNCaP)是TNF-α敏感性的。在许多癌细胞中，对TNF-α和许多已知的化学治疗剂的促凋亡作用的抗性与NF-κB的组成型活化相关。Muenchen等.，(Clin.Cancer Res.2000，61969-1977)证明用IκBα“超级抑制剂”(p6R-IκBS32A+S36A)抑制NF-κB使得先前对TNF-α作用不敏感的前列腺癌细胞变得敏感。在大多数细胞类型中，NF-κB以潜在的、没有活性的形式组成型地存在于细胞质中，它通过与IκB蛋白相互作用而保留在细胞质中，所述IκB蛋白与NF-κB结合并且掩饰其核定位序列(NLS)。在一些细胞类型中，NF-κB被组成型地活化。NF-κB在细胞中的活化包括IκB的遍在蛋白化作用，以致它被26S蛋白酶体降解。去除IκB暴露了NLS，并且导致NF-κB向细胞核的移动，在这里它起作用保护细胞免受程序性细胞死亡。NF-κB的组成型活化已经在各种组织中得到报道，包括，例如，胸腺、胰腺、肝脏、膀胱、肺、肾和卵巢。成神经细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、急性淋巴母细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞白血病、伯基特淋巴瘤和多发性骨髓瘤是与NF-κB的组成型活化相关的癌症。还已经证明对NF-κB核移动的抑制在使得多发性骨髓瘤对多柔比星的促凋亡作用敏感中具有某种作用(Mitsiades等，Blood，(June 2002)994079-4086)。因此，NF-κB活化成为提高癌症治疗的靶点。对于癌症治疗，优选地应用靶点特异性药剂，并且开发增加癌细胞的破坏而对正常细胞没有类似影响的药剂。特别需要的是用于对目前的治疗模式表现出抗性并且因而具有增加的死亡率的那些癌症的新型药剂。专利技术概述本专利技术涉及包括大约6-大约50个残基的细胞透过性(cell-permeable)肽的多肽，所述细胞透过性肽包括至少SEQ ID NO1的6个连续的残基和NF-κB核定位序列。本专利技术还涉及包括大约11-大约50个残基的细胞透过性肽的多肽，所述细胞透过性肽包括SEQ ID NO2的至少11个连续的残基和NF-κB核定位序列。NF-κB的核定位序列(NLS)可以包括，例如，p50、p65或它们的功能等价物。本专利技术还提供在细胞中抑制NF-κB核易位的方法，其包括给细胞施用有效量的包括SEQ ID NO3、SEQ ID NO4或其组合的肽。所述方法可以治疗性地用于各种疾病状态或代谢异常，其中特别是NF-κB核易位和NF-κB的组成型活化起显著作用。本专利技术还提供约6-约50个氨基酸的包括SEQ ID NO1的细胞透过性肽，和约11-约50个氨基酸的包括SEQ ID NO2的细胞透过性肽。所述细胞透过性肽可以合成，在细胞的或没有细胞的DNA和RNA表达系统中产生，或者化学附着以便它与货物分子功能性缔合。例如，所述货物分子可以是内部细胞活性的调节子、细胞-细胞信号传导的诱导子、激素、寡核苷酸或其它活性剂。本专利技术还提供用于与组成型NF-κB活化相关的癌症的化学治疗系统，所述系统包括治疗有效量的包括SEQ ID NO3、SEQ ID NO4或其组合的肽、以及在肿瘤细胞中诱导程序性细胞死亡的化学治疗剂或放射性治疗剂。化学治疗剂可以包括，例如，TNFα、依托泊苷或顺铂。本专利技术还提供治疗雄激素-不依赖性前列腺癌的方法，所述方法包括给需要其的受试者施用治疗有效量的至少一种抑制癌细胞中NF-κB组成型活化的肽，与化学治疗剂组合施用。所述至少一种肽可以包括，例如，SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SN50或其组合。附图简述附图说明图1示例CB5005的设计和氨基酸序列(单字母氨基酸密码)(SEQ IDNO4)，其为一种抑制NF-κB活化、诱导人前列腺癌细胞程序性细胞死亡并且使得肿瘤细胞对抗癌药物诸如顺铂和依托泊苷的破坏肿瘤细胞作用敏感的肽剂。CB5005(SEQ ID NO4)包含NF-κB p50蛋白的核定位序列(NLS)(斜体)以及新型的11-mer细胞透过性序列(CPS)(SEQ ID NO2)(下划线)。CB5003(SEQ ID NO3)是只具有部分CPS(也用下划线)的类似物肽。CB5002(SEQ ID NO5)包含突变的CPS并且因此不是细胞透过性的和功能性的。CB5007(SEQ ID NO6)是除了NF-κB p50 NLS中2个碱性残基突变(KR-NG)外与CB5005对应的对照肽。图2通过荧光显微镜分析示例CB5005(SEQ ID NO4)在DU145，PC3，LNCaP和N2a细胞中的细胞输入。将在8孔腔式载玻片上的细胞用30μMCB5005(SEQ ID NO4)在37℃处理1小时。通过使用抗-肽抗体和FITC-标记的抗兔抗体的直接免疫荧光检测而检测胞内肽，并且通过荧光显微镜分析。图3a示例雄激素-不依赖性DU145细胞核提取物中的NF-κB p50蛋白的蛋白质印迹分析。将DU145细胞用CB5005(SEQ ID NO4)(30μM)，CB5003(SEQ ID NO3)(90μM)，CB5007(SEQ ID NO6)(30μM)或稀释剂处理30min，之后用TNF-α(10ng/ml)或稀释剂再处理1h。将等量的核提取物通过SDS-PAGE分离，并且将蛋白转移到硝化纤维素膜上。使用抗-p50兔抗体和增强的化学发光检测NF-κB p50蛋白。图3b示例雄激素-不依赖性DU145细胞的核提取物中NF-κB p50蛋白的蛋白质印迹分析。将DU145细胞用CB5005(SEQ ID NO4)(30μM)，CB5007(SEQ ID NO6)(30μM)或稀释剂处理16h。不加入TNF-α。图4示例用膜联蛋白V/PI染色的凋亡DU145细胞。在4孔腔式载玻片上的DU145细胞用CB5005(SEQ ID NO4)(30μM)或稀释剂处理30min，然后用顺铂(5μg/ml)再处理5h。然后，将细胞用膜联蛋白V/PI试剂盒按照制造者流程(BD-Pharming本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多肽，其包括： ａ）大约６－大约５０个残基的细胞透过性肽，其包括至少ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１的６个连续残基，和 ｂ）ＮＦ－κＢ核定位序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：林耀忠，克劳迪亚布杜，
申请(专利权)人：切尔泰克生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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