GADD45β蛋白及其相关细胞因子在类风湿关节炎中的应用制造技术

本发明专利技术涉及ＧＡＤＤ４５β蛋白及其相关细胞因子在类风湿关节炎中的应用，尤其是涉及ＧＡＤＤ４５β蛋白及其相关细胞因子在生物检测和诊断方法的用途，具体地说，本发明专利技术涉及一种在类风湿关节炎的发病过程中起重要作用的蛋白－ＧＡＤＤ４５β蛋白及其相关的细胞因子、下游的激酶和抑制剂在诊断或治疗类风湿关节炎上的用途。本发明专利技术还提供了相应的诊断试剂盒。一种ＧＡＤＤ４５β蛋白及其相关细胞因子在类风湿关节炎中的用途，用于制备检测或辅助检测类风湿关节炎的试剂，其中，所述的试剂包括ＧＡＤＤ４５β蛋白和细胞因子、ＧＡＤＤ４５β蛋白下游激酶中的一种或其组合，所述相关细胞因子包括：上调ＧＡＤＤ４５β表达的作用ＩＦＮγ、ＴＮＦα和ＧＡＤＤ４５β表达的有效诱导剂ＩＬ－１２，ＩＬ－１８。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及GADD45β蛋白及其相关细胞因子在类风湿关节炎中的应用，尤其是涉及GADD45β蛋白及其相关细胞因子在生物检测和诊断方法的用途，具体地说，本专利技术涉及一种在类风湿关节炎的发病过程中起重要作用的蛋白-GADD45β蛋白及其相关的细胞因子、下游的激酶和抑制剂在诊断或治疗类风湿关节炎上的用途。本专利技术还提供了相应的诊断试剂盒。
技术介绍
虽然类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)病因和发病机制尚不明确，如II型胶原和热休克蛋白是类风关发病的自身抗原，虽然这些自身抗原在疾病病理过程中的作用并不十分清楚。但已公认T细胞介导的炎症在类风关滑膜病变过程中起了很重要的作用，特别是Th1细胞，和炎症有关的炎症细胞因子和趋化因子介导了RA组织的损伤。已报导TNF-α拮抗剂和其受体治疗RA有效。但类风关滑膜炎症T细胞的启动和持续存在的分子机制尚不清楚。GADD45β属于GADD45(growth arrest and DNA damage-inducible生长阻断和诱导DNA损伤因子)家族，有三个成员GADD45α、GADD45β和GADD45γ，在进化上十分保守，产物也十分相似，但在体内功能各不相同。GADD45蛋白在转录水平受到调节，在一些重要的生理过程中发挥作用，包括G2/M期细胞周期检查点及DNA修复。现在的研究表明GADD45家族蛋白具有抗增殖活性，能直接与细胞周期蛋白如PCNA，cdc2，cyclinB和p21相互作用来诱导细胞凋亡。尽管过程与GADD45α类似，GADD45β显示了不同的生理活性。而GADD45β还有调节T细胞活化和分化的功能。有报导表明GADD45β通过丝裂原活化蛋白激酶家族(mitogen-activated proteinkinases，MAPKs)介导Th1细胞的分化。MAPKs是将胞外信号传导到细胞核内的重要蛋白细胞外各种应激条件，如高渗透压、热休克、紫外线以及细胞因子、病原微生物成分-脂多糖(LPS)等都能通过该途径来调节细胞功能、诱导分化及凋亡等生物效应，是细胞执行功能的重要机制。已知GADD45β蛋白作为早期T淋巴细胞启动剂，并与一系列与炎症过程有关的前炎症细胞因子的产生有关。GADD45β蛋白是一种具有多种功能的细胞内蛋白。GADD45β蛋白属于调节T细胞生长、活化与分化的蛋白质，因为GADD45β蛋白具有促进Th1细胞分泌IFN-γ的作用。GADD45β蛋白可以通过活化胞内许多重要的激酶来介导细胞的功能，其中最主要的包括MAPK途径的ERK，和P-38。GADD45β蛋白可以与这些激酶相互作用并导致后者发生磷酸化，而促进T细胞向Th1型分化并分泌多种细胞因子，如IFN-γ等发挥其作用。同时，GADD45β蛋白还是抗细胞凋亡的主要分子。GADD45β蛋白的表达上调可以通过抑制JNK的活化而抑制细胞的凋亡，这点已经在一些肿瘤发生和进展的研究中得到证实。GADD45β蛋白与T细胞的活化，向Th1方向的分化及发挥其功能等方面的研究刚刚开始展开。关于GADD45β蛋白和类风关的关系至今表达尚未见报道。尤其，在本专利技术之前，类风关滑膜浸润T细胞和外周血中T细胞中GADD45β蛋白过表达和其在类风关中的功能关系尚未阐明。由于类风湿关节炎的发病机理，尤其是类风关致病性CD4+T细胞的启动和持续性存在的分子机制尚不清楚，因此极大地阻碍了类风湿关节炎的诊断和治疗。因此，本领域长期以来一直迫切希望找到与RA的发病有关的物质，以便开发出具有辅助诊断类风湿关节炎及其它自身免疫疾病如红斑狼疮、多发性硬化症等的有效试剂盒或检测手段。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种GADD45β蛋白及其相关细胞因子在类风湿关节炎中的应用。本专利技术目的是提供一种有效的辅助检测或辅助检测类风湿关节炎的方法和试剂盒。本专利技术提供了一种GADD45β蛋白及其相关细胞因子和细胞凋亡的用途，用于制备检测或辅助检测类风湿关节炎的试剂，其中，所述的试剂包括GADD45β蛋白核酸和细胞因子、GADD45β蛋白下游激酶中的一种或其组合，所述相关细胞因子包括IFNr，TNFa，IL-12，18。本专利技术提供了一种检测类风湿关节炎的试剂盒，它含有容器和位于容器内的检测GADD45β核酸或蛋白含量的试剂。优选的，所述检测GADD45β核酸和蛋白含量的试剂是特异性扩增GADD45β蛋白的寡核苷酸引物或特异性抗GADD45β蛋白的抗体，所述的引物见序列表，为SEQ ID NO.1、SEQID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4，其中，SEQID NO.1、SEQID NO.2分别为GAPDH的上游和下游引物；SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4为GADD45β的上游和下游引物，用于扩增GADD45β基因序列。在一优选例中，所述的试剂盒还含有检测下游激酶状态的试剂，其中所述的激酶选自激酶包括MAPKs的ERK、P-38和JNK。而所述的检测下游激酶状态的试剂是特异性抗磷酸化激酶的抗体。在另一优选例中，所述的试剂盒还含有检测TNF-α或IFN-γ含量的试剂。在另一优选例中，所述的试剂盒还含有检测IL-12，IL-18的试剂。本专利技术机理及研究图1RA病人滑膜组织与正常人滑膜组织中基因U133A基因芯片表达谱。本研究利用Afmetrix公司的人类全基因组基因芯片U133A对类风关组织的基因表达谱进行了全面分析，为本研究中类风关疾病的易感基因发展机制提供有意义的基因谱。病变滑膜组织来自膝关节置换手术。正常人滑膜组织来自于关节镜手术。将滑膜组织无菌取自手术台，置于无血清1640培养液中，尽快送至实验室。于超净台内剪成小块后立即进行mRNA并逆转录为cDNA并进行标记，然后与基因芯片杂交。由于在基因芯片的筛选研究中，杂交信号经计算机处理、分析，即可得到样本中的基因表达谱信息和样本之间的基因表达差异。鉴于基因芯片以上优点，该技术自建立以来，立即引起了学者们的广泛关注，并已成为当今生命科学研究中最受欢迎的技术之。图1显示了用转录组学-基因表达-单色基因芯片技术对RA病人的滑膜组织约38000个基因的表达谱进行检测。并与正常人相同组织基因表达谱做对照。下图中，每个点代表一种基因红色点代表两者共同表达的基因，蓝色点代表有一种基因表达有差异，黄色点代表两者均无此基因的表达。结果提示RA患者与正常人相比有很多有显著差异表达的基因，但表达增高4倍以上的基因仅为30个左右(左侧纵坐标的log2-10区域内的蓝点所示)。分析后发现有约30个基因在RA中表达增高4倍以上，其中GADD45β表达明显增高。图2.基因芯片检测RA滑膜组织中GADD45β的表达情况将基因芯片中所检测的RA患者滑膜组织中的GADD45β的表达量与正常人的滑膜组织相比，可见RA的GADD45β的表达量增高，是正常人的9.6倍。图3.不同来源的单个核细胞GADD45β的表达。从60例RA患者外周血、关节液和滑膜组织来源的单个核细胞抽提RNA，定量PCR分析。对照单个核细胞来自20个健康志愿者。GADD45β表达量用同一样本GAPDH的表达量标准化。相对量表达用ΔΔCT表示。GADD45β基因的相对含量用2-ΔΔCT计算。结果表明，在R本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＧＡＤＤ４５β蛋白及其相关细胞因子在类风湿关节炎中的用途，用于制备检测或辅助检测类风湿关节炎的试剂，其中，所述的试剂包括ＧＡＤＤ４５β蛋白和细胞因子、ＧＡＤＤ４５β蛋白下游激酶中的一种或其组合，所述相关细胞因子包括：上调ＧＡＤＤ４５β表达的作用ＩＦＮγ、ＴＮＦα和ＧＡＤＤ４５β表达的有效诱导剂ＩＬ－１２，ＩＬ－１８。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：李宁丽，张冬青，王利，何东仪，沈佰华，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]