纤维蛋白原的亲和吸附剂制造技术

为分开、除去、分离、纯化、表征、鉴别或量化纤维蛋白原或作为纤维蛋白原类似物的蛋白，使用亲和吸附剂，其是式Ⅱ的化合物，其中一个Ｘ是Ｎ，另一个是Ｎ、Ｃ－Ｃｌ或Ｃ－ＣＮ；Ｙ是Ｏ、Ｓ或ＮＲ↓［２］；Ｚ是Ｏ、Ｓ或ＮＲ↓［３］；Ｒ↓［２］和Ｒ↓［３］各自是Ｈ、烷基、羟烷基、苄基或β－苯乙基；ｎ是０～６；Ａ是载体基体，任选地通过间隔基连接到三嗪环；Ｒ↓［７］是在中性ｐＨ下带有正电荷的基团；Ｗ是任选的连接基；Ｖ是芳基；Ｒ↓［８］和Ｒ↓［９］各自是Ｈ、ＯＨ、烷基、烷氧基、氨基、ＮＨ↓［２］、酰氧基、酰基氨基、ＣＯ↓［２］Ｈ、磺酸、氨基甲酰基、氨基磺酰基、烷基磺酰基或卤素或环状结构比如吗啉基，或Ｒ↓［８］和Ｒ↓［９］连接以形成这种环状结构。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及化合物和它们用作亲和配体的用途。
技术介绍
纤维蛋白原是二聚的蛋白，每一半由称为Aa、 Bp和Y的二硫键合 的多肽链组成。在肝中，Aa-和Bp-链的基因分别地将610和461氨基酸残基的单一产物编码。相比之下，，链基因的转录的替代剪接产生长 度稍有不同的"链变体(411和427残基)，其中较短的构成最终产品 的~卯％。纤维蛋白原的主要形式以~340 kDa的分子量分泌到循环中。 在其从肝中分泌之后，所述蛋白不但存在于血浆中，而且存在于淋巴和 組织间隙液中。在健康的个体中，纤维蛋白原在血浆中的浓度为4~ l(HiM。重要地，在生理应激反应期间，其浓度可以增加至多400%。通过凝血酶(胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶)将纤维蛋白原转化为纤维 蛋白。凝血酶水解纤维蛋白原内至少两个特定的Arg-Gly键。该过程初 始引起纤维蛋白原纤丝的形成，其可以横向地结合，形成更厚的纤维， 所述纤维又可以结合以形成甚至更厚的并支化的纤维蛋白束。通过在位 于相邻纤维蛋白分子的a链内的Lys和Gln残基之间形成交联，进一步 稳定这种束，以形成能防止或限制血流的三维网络。该交联过程由酶因 子XIIIa催化。存在两种纤维蛋白原的先天性异常无纤维蛋白原血症和异常纤维 蛋白原血症。无纤维蛋白原血症是量上的缺乏，导致出血素质。术语低 纤维蛋白原血症指较不严重的纤维蛋白原缺乏症。异常纤维蛋白原血症 的标志是纤维蛋白原的功能异常，其会导致出血或者血栓形成。患者可 以用纤维蛋白原浓缩物或冷沉淀物进行处理。纤维蛋白原也一般在外科 手术期间使用，作为纤维蛋白密封剂形式的止血辅助。这些通常是在适 当的药物组合物中的双組分体系，所述双组分体系包含纤维蛋白原(例 如以纤维蛋白原浓缩物的形式)和凝血酶。这些部分净化形式的纤维蛋白原的施用中的问题是存在蛋白污染。 因此分离纤维蛋白原的基于亲和性的纯化方法会是有用的。如果能从未贫化血浆中，以特殊的方式，分离纤维蛋白原，使得所有的其它的蛋白 组分完整用于进一步操作，那么纯化方法将是特别有用的。WO97/10887公开了用作亲和吸附剂的式I的基于三溱的化合物I其中R是H、烷基、羟烷基、环己基、NH2、苯基、萘基、1-苯基 吡唑、吲唑、苯并噻唑、苯并口恶唑或苯并咪唑，任意的所述芳基可以被 烷基、烷氧基、酰氧基、酰氨基、氨基、NH2、 OH、 C02H、磺酰基、 氨基甲酰基、氨基磺酰基、烷基磺酰基和卣素中的一个或多个取代；一个X是N，另一个是N、 C-C1或C曙CN;Y是O、 S或NR2;Z是O、 S或跳；R2和R3各自是H、烷基、羟烷基、千基或p-苯乙基；Q是苯、萘、苯并蓉唑、苯并口恶唑、l-苯基吡唑、吲唑或苯并咪唑；R4、 Rs和R6各自是H、 OH、烷基、烷氧基、氨基、NH2、酰氧基、 酰氨基、C02H、磺酸、氨基甲酰基、氨基磺酰基、烷基磺酰基或卣素；p是0 20;和A是载体基体，任选地通过间隔基连接到三溱环。式I的化合物公开为对于蛋白比如免疫球蛋白、胰岛素、因子VII 或人生长激素具有亲和性。相关结构的化合物^>开在WO00/67900和WO03/097112中。它们 对于内毒素具有亲和性。
技术实现思路
意外地，已经发现某些化合物可用于纤维蛋白原基于亲和性的分离，这些化合物中有许多是新的。这些化合物具有式II,<formula>formula see original document page 6</formula>其中X、 Y、 Z、 n和A如上式I所定义； R7是在中性pH下带有正电荷的基团； W是任选的连接基；V是如上对于Q所述的，但是作为替代方案可以为节结构；以及 Rs和R9如对于R4、 Rs和R6所定义，但另外包括环结构，或Rs和R9连接以形成这种环结构。另外，本专利技术的化合物包括相应的配体，其中A被官能团代替，直 接地或间接地连接到三溱环，其可以固定在载体基体上。下文中，术语 "配体"和"吸附剂"可互换地使用。具体实施例方式WO97/10887、 WO00/67900和WO03/097112的说明书公开了如何 可以在固体载体上建立配体的组合库。它们的/>开内容，包括实施方案 的实施例和与本专利技术相同的步骤，通过参考引入本专利技术中。在用作为原 料的人血浆池筛选这些组合库组期间，许多配体确定为能够选择性地结 合和洗脱人纤维蛋白原。可以通过本领域技术人员已知的方法制备用于本专利技术的式II的化 合物。这种方法记载于上述3个PCT公开中；它们可以容易地适用于 新化合物的制备。WO97/10887给出了 A的实例，包括间隔基或连接基L，通过其三 唤环可连接到固体载体M。如WO97/10887所述，这种载体包括琼脂糖， 二氧化硅，纤维素，右旋糖酐，淀粉，藻酸盐，角叉菜聚糖，合成聚合 物，玻璃和金属氧化物。在反应以形成本专利技术的吸附剂以前可以活化这种材料。L例如可以为-T-(-V、V2)nr，其中T是O、 S或-NR、 m是0或1;V1是任选地取代的2 20个C原子的烃基；和V2是O、 S、 -COO-、 -CONH-、 -NHCO-、 -P03H-、 -NH-亚芳基 -S02-CH2-CH24-NR8-;和R7和R8各自独立地为H或d.6烷基。在本专利技术的化合物中，R7是在中性pH下带有正电荷的基团。这种 基团的例子是胍基、脒基等或源于氨基酸比如丙氨酸或苯丙氨酸。W (如果存在的话)是任选的连接基，其可为烷基、环烷基、氧基 烷基或芳环结构，任选地取代(例如，如在精氨酸中被羧酸取代等)。V如上文对于Q所述的，但是作为替代方案可以为节结构。这种结 构的例子包括简单的叔胺或次甲基官能团，以允许形成例如吗啉基团。Rs和R9如对于R4、 Rs和R6所定义的，但另外包含环结构，或R8 和R9连接以形成这种环结构。这种环状结构的例子包括碳环和杂环， 饱和、不饱和的或芳香族的环状结构，通常含有4~8个环原子，其中1、 2或3个环原子分别地选自N (或NH)、 O或S;—个例子是吗啉。在本专利技术的一个优选实施方案中，结合纤维蛋白原的配体或吸附剂 具有式III (其在生理pH下会质子化)。<formula>formula see original document page 7</formula>在本专利技术的另一个优选实施方案中，结合纤维蛋白原的配体或吸附 剂具有式IV。<formula>formula see original document page 8</formula>在本专利技术的又一个优选实施方案中，通过如下所示的结构V表示结 合纤维蛋白原的配体或吸附剂。<formula>formula see original document page 8</formula>在本专利技术的更优选的实施方案中，通过如下所示的结构VI表示结 合纤维蛋白原的配体或吸附剂。在本专利技术的最优选实施方案中，通过如下所示的结构VII表示结合 纤维蛋白原的配体或吸附剂。本专利技术中记栽的结合纤维蛋白原的配体和吸附剂用于从复杂混合 物纯化纤维蛋白原，所述复杂混合物包括但不限于人血浆和重组发酵上清液。该应用在下文实施例7中说明，其使用人血浆池通过色语实验本文档来自技高网...

【技术保护点】
亲和吸附剂用于分开、除去、分离、纯化、表征、鉴别或量化纤维蛋白原或作为纤维蛋白原类似物的蛋白的用途，其中所述亲和吸附剂是式Ⅱ的化合物＊＊＊Ⅱ其中一个Ｘ是Ｎ，另一个是Ｎ、Ｃ－Ｃｌ或Ｃ－ＣＮ；Ｙ是Ｏ、Ｓ或ＮＲ↓［２］；Ｚ是Ｏ、Ｓ或ＮＲ↓［３］；Ｒ↓［２］和Ｒ↓［３］各自是Ｈ、烷基、羟烷基、苄基或β－苯乙基；ｎ是０～６；Ａ是载体基体，任选地通过间隔基连接到所述三嗪环；Ｒ↓［７］是在中性ｐＨ下带有正电荷的基团；Ｗ是任选的连接基；Ｖ是芳基；和Ｒ↓［８］和Ｒ↓［９］各自是Ｈ、ＯＨ、烷基、烷氧基、氨基、ＮＨ↓［２］、酰基氧基、酰基氨基、ＣＯ↓［２］Ｈ、磺酸、氨基甲酰基、氨基磺酰基、烷基磺酰基或卤素或环状结构比如吗啉基，或Ｒ↓［８］和Ｒ↓［９］连接以形成这种环状结构。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹森理查德贝特利，詹姆士克里斯托弗皮尔森，本马丁贝亚科姆，塔德乌什安东尼波德戈尔斯基，罗伯特威廉潘内尔，
申请(专利权)人：普罗米蒂克生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]