本发明专利技术的目的是根据ＨＮ信号途径的信息研究受体，通过发现Ｈｕｍａｎｉｎ受体或Ｈｕｍａｎｉｎ样多肽受体（ＨＮＲ），可以了解促进或抑制发挥ＨＮ的神经保护作用等活性的胞内信号传递机理，确定与此相关的化合物，从而建立ＨＮＲ激动剂和ＨＮＲ拮抗剂的筛选方法，使筛选的化合物在神经退行性疾病、特别是阿尔茨海默病的治疗药开发中发挥作用，提供阿尔茨海默病神经细胞死亡测定系统，以及提供ＨＮＲ基因强制表达方法或细胞内基因敲除法等。因此，本发明专利技术涉及含有选自ｇｐ１３０或其部分多肽、ＣＮＴＦ－Ｒ和ＷＳＸ－１的至少两种蛋白质的Ｈｕｍａｎｉｎ受体或Ｈｕｍａｎｉｎ样多肽受体（ＨＮＲ）。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及Humanin受体或Humanin样多肽受体(以下可总称标记为 "HNR")、强制表达该受体的转化细胞、与该受体结合的化合物的筛选方 法、含有该化合物的药物组合物等。本申请是基于2005年4月22日提出 的曰本专利申请2005-124394和2005年9月5日提出的日本专利申请2005-255972,主张其优先权，其内容均引用到本说明书中，视为该公开内容 的一部分。
技术介绍
神经脱落被认为与阿尔茨海默病(AD)的主要神经学征兆或症状表 达直接相关，其病理学机理尚未了解，但是是AD治疗的最重要的耙。 各种AD相关的伤害、即家族性AD (FAD)基因突变体的过量表达或者来 自淀粉样蛋白(3前体(APP)的毒性(3淀粉样蛋白(Aps)的增加和添加等通过 各种途径体外诱导神经细胞死亡。人们发现家族性AD(FAD)中，三个基因一APP、早老素1(PS1)、 早老素2(PS2)中的错义突变是病因(Shastry和Ginlin, 1999)。这些突变基 因在FAD脑中是如何体内导致神经脱落的，这点尚不明确，但是多个研 究小组证明在培养细胞中(Yamatsuji等人.，1996a,b; Wolozin等人.，1996; Zhao等人.，1997; Nishimura等人.，1998; Luo等人.，1999; Hashimoto等人., 2000)或在初代培养皮质神经(PCN)中(Niikura等人.，2004), FAD相关的 APP和PS基因突变体的表达引起了神经细胞死亡。并且，被认为与AD病理密切相关(Hardy和Selkoe, 2002)的p淀粉样蛋 白的增加是生理上的浓度过高，在体外显示诱发神经细胞死亡(Loo等人., 1994; Hashimoto等人.，2001; Hashimoto等人.，2004)。本专利技术人使用由AD患者死亡后解剖脑的枕叶制作的cDNA文库，通 过对防止细胞死亡的化合物不施加偏倚的功能性筛选方法"f、7卜， y义夕ij一二》夕、、法"，鉴定出编码被命名为Humanin(HN)的24个氨基 酸肽MAPRGFSCLLLLTSEIDLPVKRRA的cDNA (专利文献l)。 HN显示对 各种FAD基因或抗APP抗体、以及P淀粉样肽(A(3)等全部的由AD相关伤害引起的神经细胞死亡显示拮抗作用(Hashimoto等人.，2001a和b., Nishimoto等人.，20(M)。以IO )aM的HN即显示完全的拮抗作用。并且， 后续的研究中，HN显示对某种神经细胞或非神经细胞死亡、例如无血 清培养基中PC12 (Kariya等人.，2002)或淋巴细胞(Kariya等人.，2003)的细 胞死亡、或者AD导致的人脑血管性平滑肌细胞毒性(Jung等人.，2003)、 以及来自朊病毒的肽导致的神经毒性(Sponne等人.，2004)也具有拮抗作 用。我们报导了HN由细胞内分泌，经细胞表面的受体介导，由细胞外 对AD相关伤害引起的神经细胞死亡发挥拮抗作用。最近，Ying等人(2004年)报导在PC12细胞林中，HN是以PTX感受 性G蛋白结合受体一人甲酰肽受体样-1(FPRL-1)作为受体结合，拮抗A卩 (l-42)导致的神经细胞死亡。Ying等人的报导中显示，HN对A(3诱导的神 经毒性显示拮抗作用，这是由于其竟争性地阻止AP与FPRL-1结合。但 是，在调查FPRL-1是否参与了HN对AD相关伤害的神经保护作用时，发 现在F11神经杂交细胞抹或初代培养皮质神经(PCN)中，FPRL-1并未参与 HN的神经保护作用，并指出在该体系中存在FPRL-1以外的受体，HN 经该受体介导发挥神经保护作用。我们的研究显示，STAT3和某种酪氨酸激酶参与了HN的神经保护 作用，这显示在该信号途径中存在细胞因子受体样的受体。gpl30在白细胞介素6 (IL-6)受体家族中是共有的细胞因子受体亚单 元。含有gpl30的受体受到包括IL-6、 IL-ll、 LIF、 CNTF、制癌蛋白(OSM)、 心肌营养素-l或IL-27的Thl型细胞因子刺激。这些细胞因子与受体的结 合诱导了gpl30的均聚二聚体化或gpl30与相关受体、例如LIF受体、OSM 受体、WSX-1 (IL27受体)的杂合二聚体化，将细胞因子的信号传递至经 JAK/STAT或RAS/MAPK信号途径介导的胞内信号途径(Raga等人.，1997; Boulay等人.，2003; Boulanger等人.，2004)。最近的研究显示属于IL-6/IL-12细胞因子家族的IL-27 (IL-27p28/EBV诱导基因3)与WSX-l/gp130 (Pflanz等人.，2004)结合，显示控制Thl和Th2免疫反应(Yoshida等人., 2004)。还得知CNTF-R是不具有细胞内信号结构域的gpl30相关受体。专利文献l:日本特再WO01/021787抑制神经细胞死亡的多肽、 Humanin专利文献2: WO03/097687 Neuroprotective Polypeptides and Methodsof Use
技术实现思路
因此，本专利技术的目的是根据HN信号途径的信息探索其受体，发 现Humamn受体和Humamn样多肽受体(HNR),由此了解促进或抑制HN 发挥神经保护作用等活性的细胞内信号传递的机理，确定与其相关的化 合物，建立HNR激动剂和HNR拮抗剂的筛选方法；使筛选的化合物在神 经退行性疾病、特别是阿尔茨海默病的治疗药开发中发挥作用；提供阿 尔茨海默病神经细胞死亡的测定系统；以及提供HNR基因强制表达方法 或细胞内基因敲除法等。即，本专利技术涉及以下各种方式。 Humanm受体或Humanin样多肽受体(HNR),该受体含有选自 gpl30或其部分多肽、CNTF受体a链(CNTF-R)和WSX-l的至少两种蛋白质。 Humanm受体或Humanm样多肽受体，该受体由gpl30或其部分多 肽，CNTF-R和WSX-1构成。 Humanin受体或Humamn样多肽受体，该受体由gpl30或其部分多 肽和WSX-1构成。上述-中任一项的Humanin受体或Humamn样多肽受体，其 中，gpl30的部分多肽至少具有胞内结构域的第l-133位氨基酸序列。 Humanm受体或Humanin样多肽受体，该受体由CNTF-R和WSX-l构成。上述-中任一项的Humanin受体或Humanin样多肽受体，其 中，gpl30、 CNTF-R和WSX-1是来自人的蛋白质。化合物的筛选方法，该化合物与上述-中任一项的Humanin 受体或Humanin样多肽受体结合。上述的筛选方法，其中，与Humanin受体或Humanin样多肽受 体结合的化合物是与该受体的胞外结构域结合。上述的筛选方法，其中，与Humanin受体或Humanin样多肽受 体结合的化合物是与该受体的胞内结构域结合。上述的筛选方法，其中，与Humanin受体或Humanin样多肽该受体结合的化合物是该受体的拮抗剂。上述-中任一项的筛选方法，该方法包含以下步骤(a) 使试验试样与Humanin受体或Humanin样多肽受体或构成该受体 的至少 一种蛋白质接触的步骤；(b) 本文档来自技高网...
【技术保护点】
Ｈｕｍａｎｉｎ受体或Ｈｕｍａｎｉｎ样多肽受体（ＨＮＲ），该受体含有选自ｇｐ１３０或其部分多肽、ＣＮＴＦ受体α链（ＣＮＴＦ－Ｒ）和ＷＳＸ－１的至少两种蛋白质。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：松冈正明，西本征央，相矶贞和，
申请(专利权)人：独立行政法人科学技术振兴机构，学校法人庆应义塾，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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