本发明专利技术涉及癌症的诊断和治疗，特别涉及肿瘤细胞的细胞毒性的介导；最特别涉及任选与一种或多种化疗剂联合使用的癌症调节抗体（ＣＤＭＡＢ）的用途，作为启动细胞毒性反应的方法。本发明专利技术进一步涉及使用本发明专利技术ＣＤＭＡＢ的结合测定。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及癌症的诊断和治疗，特别涉及肿瘤细胞的细胞毒性 的介导；最特别涉及癌症调节抗体(CDMAB)(任选与一种或多种化 疗剂联合使用)的用途，作为启动细胞毒性反应的方法。本专利技术进 一步涉及使用本专利技术CDMAB的结合测定。
技术介绍
癌症中的CD63: CD63是四次跨膜蛋白超家族(tetraspanin) 的III型膜蛋白，所述四次跨膜蛋白超家族的20个现有成员的特点 是具有四个跨膜片段。几个工作组使用针对活化的血小板、粒细胞 和黑素瘤细胞的全细胞制品产生的抗体，各自独立鉴定了CD63。其 同族糖蛋白抗原的各自cDNA的克隆，发现所述不同抗原为同一种分 子。随后，第六届国际白细胞分型研讨会(The Sixth International Workshop on Leukocyte Typing, 1996)将这些抗体分类为CD63抗 体。在1996年的研讨会之前，已知CD63有多个名称(黑素瘤1抗 原、眼黑素瘤相关抗原、黑素瘤相关抗原ME491、溶酶体相关膜糖蛋 白3、 granul叩hysin、黑色素相关抗原MLA1)，这些命名往往与导 致其部分表征和鉴定的抗体有关。因此，CD63也被命名为ME491抗 原(MAbME491)、神经腺(neuroglandular)抗原(MAb LS59、 LS62、 LS76、 LSI 13、 LS140和LS152X Pltgp40 (MAb H5C6、 H4F8和H5D2)、 人类髓质基质细胞抗原(MAb 12F12)、骨祖细胞特异性标志物(MAb HOP-26)和整联蛋白相关蛋白(MAb6Hl)。发现与人体CD63交叉反 应的其他抗体有8-lH、 8-2A (与ME491交叉反应)、NKI/C-3和 NKI/black-13 (Vannegoor和Rumke， 1986; Demetrick等，1992;Wang等，1992)。首先使用MAbME491 (针对人体黑素瘤细胞产生的许多抗体的一 种)从黑素瘤cDNA文库克隆了 CD63。人体黑素瘤活组织检查研究中 表明MAbME491的反应性表现出与黑素瘤进程反相相关。ME491抗 体的反应性在正常黑色素细胞中是低的，在黑素瘤进程早期(包括 发育不良痣和辐射状生长期(RGP)肿瘤)较高，并在更晚期的黑素 瘤肿瘤(例如在垂直生长期(VGP)和转移性肿瘤中的那些)中降低或 甚至没有。使用MAb2. 28 (针对活化血小板产生)在人血小板中发现并部分 表征了 CD63， MAb2. 28检测到了活化依赖性的血小板膜53kDa糖蛋 白。该分子还与未活化血小板内部颗粒的膜相关联。同一研究中， MAb2. 28还标记了巨核细胞和内皮细胞的内部颗粒，在所述细胞中， MAb2.28与抗体共定位至蛋白酶D (己知的溶酶体区室标志物)。使 用抗体群集和克隆表达继续研究，鉴定了被该抗体识别为CD63的抗 原，并进一步证实了其在溶酶体区室中的存在，在那里其与区室特 异性标志物LAMP1和LAMP2被共定位。该分子的克隆将其鉴定为 CD63，并使其包括于四次跨膜蛋白超家族。在许多不同组织和细胞类型中检测到了 CD63的表达。在细胞水 平上，发现其与质膜相关联，并且还与细胞内晚期内体的囊状结构 有关。某些情况下，细胞活化导致经由细胞内储备CD63的动员而增 加的表面表达。还发现CD63与MHC-II类分子共定位(且生理上相 关联)于B淋巴细胞中，特别是内体中、参与外运MHC-n类复合体 至表面的外体中和分泌的小泡中。发现CD63在许多细胞类型(包括 B和T淋巴细胞、中性粒细胞、乳腺癌和黑素瘤细胞)中与四次跨膜 蛋白超家族的其他成员相互作甩所述其他成员例如CDa CD81、 CD11 (整联蛋白链aw, L, x)、 CD18 (整联蛋白链卩2)、 CD49c (VLA-3或整 联蛋白链a3)、 CD49d (整联蛋白链《4)、 CD49f (VLA-6或整联蛋白 链as)和CD29 (整联蛋白链卩,)。还不清楚CD63在肿瘤性疾病中的作用。尽管几个相互独立的工作组最初发现CD63参与各种事件，例如血小板和中性粒细胞活化、MHC-II类抗原呈递、整联蛋白依赖性细胞粘附和游动性以及某些类型癌症中的肿瘤进程，但其功能还有待完全阐明。虽然目前证据支持CD63在多种细胞生理事件中的作用，但还不清楚这些功能是否相 互独立，或者是否存在涉及CD63的潜在的共同细胞学机制。几个工作组已经考察了 CD63和某些类型肿瘤(特别是黑素瘤) 进程之间的关联。除Mab ME491之外，还研发了许多其他的抗CD63 单克隆抗体(以下简称单克隆抗体)，用于来自不同进程阶段肿瘤患 者的肿瘤样品的免疫组织化学(IHC)染色。发现被作者解释为最 可能反映减少的CD63表达的减少的染色与晚期进程和肿瘤的转移特 征相关联。更近期的研究也描述了几个四次跨膜蛋白超家族成员(包 括CD63)明显下降的表达水平(mRNA定量之后)与几种乳腺癌衍生 细胞系体外侵袭之间的显著关联。另一研究通过差异展示在经受了 雌激素消除的培养乳腺癌细胞中鉴定了 CD63。这表明CD63表达可 以受激素水平的调节，而且改变的CD63丰度和/或功能也可能与乳 腺肿瘤进程有关。相反，使用抗CD63单克隆抗体MAb FC-5.01的研究揭示其反 应性表位变异表达于不同的正常组织。尽管发现该抗体识别了 CD63，但其没有区分早期和包括转移性黑素瘤的更晚期黑色素(不 同于MAbME491)，这表明CD63抗原存在于这些更晚期的肿瘤，但其 表位有一些可能在不同时期的肿瘤细胞中已经被掩蔽了。可能归因 于CD63核心多肽的改变的翻译后修饰，或者归因于CD63与其他分 子的相互作用，其可能已经影响了用于抗体识别和结合的特异性表 位的可用性。这些研究结果支持了 Si和Hersey (1993)所报道的发 现，即使用抗CD63单克隆抗体NKI-C3的染色没有区分来自不同进 程时期(例如初期、辐射状生长期、垂直生长期和转移性黑素瘤) 的黑素瘤的组织切片。在其他研究中(Adachi等，1998; Huang等， 1998)，尽管通过PCR定量对来自乳腺和非小细胞性肺癌的mRNA的 分析揭示了两个四次跨膜分子超家族成员(CD9和CD82)的表达水平和肿瘤进程和患者预后之间存在显著关联，但没有发现CD63的这 种关联，因为其在所有样品中的表达是相似的。这些明显矛盾的结果表明，缺乏有力和一致的数据能够明确证明CD63与癌症之间的关联。到目前为止，近乎没有体内研究尝试建立CD63与该分子最终的 肿瘤抑制剂功能之间的联系。其中一项研究中，当与亲本非CD63过 表达细胞相比较，经皮下和腹腔注射入无胸腺小鼠的人CD63过表达 的H-ras转化的NIH-3T3细胞显示了降低的恶性/肿瘤原性表型，如 减小的肿瘤大小和转移潜力以及增加的存活时间所表明的。这表明 人CD63在转化细胞中的存在可能抑制其恶性行为。更近期地，使用 表达人CD63并被开发以诱导针对CD63耐受性的转基因小鼠模型的 研究表明在用融合至痘苗病毒的人CD63免疫后，可以抑制注射的 人CD63-MHC-1类分子(H-2Kh)共转染的小鼠黑素瘤细胞系的肿瘤生 长，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种能够特异性结合至人类ＣＤ６３的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体与可获自杂交瘤细胞系Ｈ４６０－２２－１的单克隆抗体相同的人类ＣＤ６３表位反应，所述杂交瘤细胞系Ｈ４６０－２２－１的ＡＴＣＣ保藏号为ＰＴＡ－４６２２。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：大卫SF杨，苏姗E哈恩，海伦P芬德利，路易斯AG达克鲁兹，
申请(专利权)人：阿里乌斯研究公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]
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