威灵仙药材中有效成分含量的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种威灵仙药材中有效成分含量的测定方法，其主要步骤是：（１）对照品溶液的制备；（２）供试品溶液的制备；（３）分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定，然后获到齐墩果酸、常春藤皂苷元两种有效成分的含量；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水－冰醋酸－三乙胺为流动相，各溶剂间的体积比为８０～９５∶５～２０∶０．０１～０．１∶０．０１～０．１；理论板数按齐墩果酸计算不低于２０００。该方法操作简单，能够准确测出威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及了一种，尤其是涉及一种威灵仙 药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元含量的测定方法。
技术介绍
威灵仙为毛茛科植物威灵仙Clematis chinensis Osbeck、棉团铁线莲Clematis hexapetaaPalI.或东北铁线莲ClematismanshuricaRupr.的干燥根及根茎。味辛咸，性温。 有祛风除湿、通络止痛之功，用于风湿痹痛，肢体麻木，筋脉拘挛，屈伸不利，骨哽咽喉。威灵仙药材中化学成分较为复杂。现代植物化学和药理学研究表明，齐墩果酸及常 春藤皂苷元为其多种药理作用的活性成分它的含量威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量是确定威灵仙药材质量标准的重要参 数，但目前尚未有一种准确地测定威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元含量的测定方 法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种准确测定，该方 法主要是测定齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现 一种威灵仙药材中有效成分含量的测定 方法，主要步骤如下-(1) 对照品溶液的制备(2) 供试品溶液的制备(3) 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用蒸发光散射检 测器进行测定，然后获到齐墩果酸、常春藤皂苷元两种有效成分的含量；色谱条件为-以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动相，各溶剂之间的 体积比为80 95:5 20:0.01 0.1:0.01 0.1;理论板数按齐墩果酸计算不低于2000。所述步骤(3)中的流动相甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的各溶剂间的体积比为 85:15:0.05:0,03。所述步骤(3)中采用外标两点法对数方程计算齐墩果酸、常春藤皂苷元含量。 所述步骤(l)的具体方法为精密称取齐墩果酸对照品、常春藤皂苷元对照品，加甲醇制成齐墩果酸、常春藤皂苷元浓度均为lml/mg的混合溶液，即为对照品溶液。所述步骤(2)的具体方法为精密称定威灵仙药材粉末，按料液重量体积比1:10 50加入甲醇，超声处理20 30分钟，滤过，残渣用甲醇洗涤，合并滤液与洗液，回收溶 剂至干，残渣加水溶解，用饱和正丁醇振摇提取2 4次，每次l(K30ml，合并提取液， 蒸干，残渣加甲醇10 30ml、盐酸l 3ml，加热水解3 5小时，水解物加水稀释，用三 氯甲烷振摇提取2 4次，每次10 30ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解 并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得到供试品溶液。本专利技术公开测定方法操作简单，只需测定威灵仙药材中齐墩果酸、常春藤皂苷元的 特征峰面积后通过外标两点法对数方程计算即可准确得出威灵仙药材中齐墩果酸、常春 藤皂苷元的含量。具体实施方式以下实施例仅用于阐述本专利技术，而本专利技术的保护范围并非仅仅局限于以下实施例。 所述
的普通技术人员依据以上本专利技术公开的内容，均可实现本专利技术的目的。 实施例一(1) 对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品、常春藤皂苷元对照品适量，加甲醇制成齐墩果酸、常春藤皂苷元浓度均为lml/mg的混合溶液，即为对照品溶液；(2) 供试品溶液的制备取威灵仙药材粉末2g，精密称定，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，残渣用 甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加10ml水溶解，用饱和正丁醇 振摇提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇20ml、盐酸2ml，加热水 解4小时，水解物加水10ml，用三氯甲垸振摇提取2次，每次20ml，合并提取液，回 收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取 续滤液，即得到供试品溶液；(3) 精密吸取对照品溶液5^1、 10^1，供试品溶液10pl，注入waters2695-2420高效 液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定得到对照品和供试品溶液中齐墩果酸、常 春藤皂苷元的特征峰面积，并根据外标两点法对数方程计算得出威灵仙样品中齐墩果 酸、常春藤皂苷元的含量，结果见表l。色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动 相，它们之间的体积比为85:15:0.05:0.03，蒸发光散射检测器，理论板数按齐墩果酸计 算不低于2000。回归方程常春藤皂苷元Y=0.0748X+6.6867 齐墩果酸 Y-0.0829X+6.4278表1:<table>table see original document page 5</column></row><table>实施例二与实施例一不同的是步骤(2)供试品溶液的制备取威灵仙药材粉末2g，精密称定，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液， 回收溶剂至干，残渣加10ml水溶解，用饱和正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并提 取液，蒸干，残渣加甲醇10ml、盐酸lml，加热水解4小时，水解物加水10ml，用三 氯甲烷振摇提取3次，每次10ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转 '移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得到供试品溶液；(3)精密吸取对照品溶液5^1、 10pl，供试品溶液10nl，注入waters2695-2420高效 液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定得到对照品和供试品溶液中齐墩果酸、常 春藤皂苷元的特征峰面积，并根据外标两点法对数方程计算得出威灵仙样品中齐墩果 酸、常春藤皂苷元的含量，结果见表2。色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动相，它们之间的体积比为80:20:0.02:0.01，蒸发光散射检测器，理论板数按齐墩果酸计 算不低于2000。回归方程常春藤皂苷元Y=0.0791X+6.7115 齐墩果酸 Y-0.0721X+6.5771表2:<table>table see original document page 6</column></row><table>实施例三-与实施例一不同的是步骤(2)供试品溶液的制备取威灵仙药材粉末2g，精密称 定，加甲醇100ml，超声处理25分钟，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液， 回收溶剂至干，残渣加10ml水溶解，用饱和正丁醇振摇提取4次，每次30ml，合并提 取液，蒸千，残渣加甲醇30ml、盐酸3ml，加热水解4小时，水解物加水10ml，用三 氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转 移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得到供试品溶液；(3)精密吸取对照品溶液5^1、 lOjil，供试品溶液1(^1，注入waters2695-2420高效 液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定得到对照品和供试品溶液中齐墩果酸、常 春藤皂苷元的特征峰面积，并根据外标两点法对数方程计算得出威灵仙样品中齐墩果 酸、常春藤皂苷元的含量，结果见表3。色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺为流动 相，它们之间的体积比为90:10:0.07:0.05，蒸发光散射检测器，理论板数按齐墩果酸计算不低于200本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种威灵仙药材中有效成分含量的测定方法，其特征是，其主要步骤是：　　　　（１）对照品溶液的制备；　　　　（２）供试品溶液的制备；　　　　（３）分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用蒸发光散射检测器进行测定，然后获到齐墩果酸、常春藤皂苷元两种有效成分的含量；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水－冰醋酸－三乙胺为流动相，各溶剂间的体积比为８０～９５∶５～２０∶０．０１～０．１∶０．０１～０．１；理论板数按齐墩果酸计算不低于２０００。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李卫民，
申请(专利权)人：广州中医药大学科技产业园有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]