来源于C型肝炎病毒的肽制造技术

本发明专利技术涉及一种来源于Ｃ型肝炎病毒的肽，其特征为序列中含有ＨＬＡ结合基序（ｂｉｎｄｉｎｇ－ｍｏｔｉｆ），且由从Ｃ型肝炎病毒（ＨＣＶ）患者体内检测出的抗体来识别。本发明专利技术的肽可用于Ｃ型肝炎病毒的诊断及Ｃ型肝炎的治疗、及预后的预测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及可用于C型肝炎病毒感染的诊断及C型肝炎的治疗的C型肝炎病毒(HCV)肽。 更详细地说，本专利技术涉及HCV肽、含有HCV肽的多肽、编码HCV肽或前述多肽的核苷酸、或识别上述物质的抗体或类似抗体活性物质、含有前述核苷酸的载体、使用HCV肽或前述多肽诱导细胞毒性T细胞的方法、或使用HCV肽、前述多肽、前述核苷酸或前述抗体·类似抗体活性物质的C型肝炎病毒检测方法、C型肝炎的诊断、预防或治疗方法、及预后的预测方法，以及含有上述物质的C型肝炎治疗用药物组合物。
技术介绍
病毒性肝炎主要为病毒经口感染的A型肝炎与通过血液感染的B型肝炎，除此以外，也有主要通过输血等感染的C型肝炎等。该C型肝炎是慢性化后转移为肝硬化或肝癌的机率非常高的疾病之一。 C型肝炎病毒(HCV)是属于黄病毒科的单链RNA病毒，日本有200万人以上、世界中有1亿7000万人为C型肝炎病毒感染者。 对该C型肝炎实施干扰素与利巴韦林(Ribavirin)并用治疗方法，但仅对3～4成的患者有效，对于大多数患者而言目前并无有效的治疗方法。因此，尽快开发出安全有效且简单的低成本诊断、及治疗方法成为强烈的社会需求。 有证据显示(WO89/04669)细胞性及体液性免疫应答两者在抑制HCV感染方面发挥主要作用。在过去的十多年间，众多研究发现高免疫原性的HCV肽，发现多种可诱导细胞性或体液性免疫应答的HCV肽(Hunziker et al.Mol Immunol.2001 Dec；38(6)475-84)。然而，这些肽并非都具有临床效果，实际上无论为预防还是为治疗，至今仍然皆没有有效的免疫治疗手段。认为主要原因在于上述肽的免疫原性较弱。 另外，本专利技术人等已提出数个由细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别出的抗原肽具有在活体内或活体外皆可导出细胞性免疫应答及体液性免疫应答双方的能力(Gohara et al.J Immunother.2002 Sep-Oct；25(5)439-44，Mine et al.Clin Cancer Res.2001 Dec；7(12)3950-62，Tanaka et al.J Immunother.2003 Jul-Aug；26(4)357-66，Mine et al.Cancer Sci.2003 Jun；94(6)548-56)。 而且，由细胞性及体液性免疫应答两者识别的HCV肽具有高于仅由细胞性免疫应答识别的肽的免疫原性。 作为顺应社会需求的新对策之一，因已累积可诱导细胞性免疫应答及体液性免疫应答两者的HCV肽与仅具有体液性免疫应答的肽相比，具有更高的免疫原性一连串认知，所以可举出特别指定上述肽的对策。 在确认上述肽的同时，调查其是否可作为抑制HCV感染的新型治疗方法及诊断手段的候补物质是有益的。 因此，本专利技术人等针对与被HLA-A2及HLA-A24限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别的肽具有反应性的IgG是否可从HCV感染者的血清中检测出进行调查，结果发现对几个CTL表位具有特异性的IgG与不同的HLA class I型或不同的HCV基因型无关，可由大多数HCV感染患者中检出。并且，由该结果得知，上述肽可提供以肽为基础的预防及治疗用新型方法，从而完成本专利技术。 因此，本专利技术的目的为提供一种HCV肽，其特征为，该HCV肽由细胞性免疫应答及体液性免疫应答识别、且具有高免疫原性。
技术实现思路
为了解决上述课题，本专利技术提供一种来源于C型肝炎病毒的肽，其特征为序列中含有HLA结合基序(binding-motif)，且由C型肝炎病毒患者的血中抗体来识别。 本专利技术的优选方案为提供一种具有序列表的序列号1～8、16、20及38中任一种表示的氨基酸序列的来源于C型肝炎病毒的肽、具有与该肽的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列的来源于C型肝炎病毒的肽、及还具有由HLA-A2或HLA-A24限制性细胞毒性T细胞产生的识别性的来源于C型肝炎病毒的肽。 本专利技术的其它方案为提供含有该来源于C型肝炎病毒的肽的多肽。作为该方案专利技术的优选方案，提供一种具有与该多肽的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列的多肽、及还具有由HLA-A2或HLA-A24限制性细胞毒性T细胞产生的识别性的多肽。 另外，本专利技术的另一方案为提供一种核苷酸，其为编码该来源于C型肝炎病毒的肽、或该多肽的核苷酸。 本专利技术的另一方案为提供一种抗体或类似抗体活性物质，其可以免疫学的方式识别该来源于C型肝炎病毒的肽、或该多肽。 作为本专利技术的另一方案，提供一种含有上述核苷酸的载体。 另外，本专利技术的另一方案为提供一种细胞毒性T细胞的诱导方法，其特征为使用编码该来源于C型肝炎病毒的肽、或该多肽的该核苷酸来诱导细胞毒性T细胞。 作为本专利技术的另一方案，提供一种C型肝炎病毒的检测方法，其使用该来源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗体、或类似抗体活性物质。 另外，作为本专利技术的另一方案，提供一种C型肝炎等HCV感染相关疾病的诊断方法，其使用上述来源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗体、或类似抗体活性物质。 而且，另一方案为提供一种C型肝炎等HCV感染相关疾病的治疗方法，其使用上述来源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗体、或类似抗体活性物质。 本专利技术的另一方案为提供一种药物组合物，其含有上述来源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗体、或类似抗体活性物质作为有效成分。另外，作为优选方案，提供一种药物组合物，该药物组合物为C型肝炎病毒疫苗。 作为本专利技术的另一方案，提供一种C型肝炎等HCV感染相关疾病的预后预测方法，其使用上述来源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗体、或类似抗体活性物质。 本专利技术的另一方案为提供一种诊断C型肝炎或预后预测的试剂盒，其含有上述来源于C型肝炎病毒的肽、多肽、核苷酸、或抗体、或类似抗体活性物质。 附图说明 图1是表示本专利技术中以ELISA法得到的HCV感染患者血中的IgG测定结果的图。 图2是表示本专利技术中以ELISA法得到的HCV感染患者血中的IgG测定结果的图。 图3是表示本专利技术中在图1所示患者血清中的C-35肽反应性抗体的代表例的吸收·溶出实验结果的图。 图4是表示本专利技术中的6种来自HCV的HLA-A24结合肽(No.3、12、13、25、32、38)的CTL诱导结果的图。 图5是表示本专利技术中的来自HCV的HLA-A2结合性肽(No.40至No.57)的CTL诱导结果的图。 图6是表示本专利技术中由51Cr游离试验得到的肽刺激PBMC的细胞毒活性的代表性结果的图。 图7是表示本专利技术中由51Cr游离试验得到的肽刺激PBMC的细胞毒活性的代表性结果的图。 图8是表示本专利技术中由使用抗CD8单克隆抗体的抑制试验确认肽刺激PBMC的细胞毒性的HLA class I限制性的图。 图9是表示HCV感染患者血清中抗肽IgG的检测图。 图10是表示HCV感染患者血清中抗肽IgG的检测图。 图11是表示对HCV感染患者血清中的抗肽IgG的特异性进行调查的吸附试验结果的图。 图12是表示对HCV感染患者血清中的抗肽IgG的特异性进行调查的溶出试验结果的图。 图13是表示由肽刺激PBMC导致IFN-γ产生的图。 图14是表示由肽刺激PBMC导致IFN-γ产本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种来源于Ｃ型肝炎病毒的肽，所述肽在序列中含有ＨＬＡ结合基序，且被从Ｃ型肝炎病毒患者中检测出的抗体识别，其特征为，该肽具有序列号２～８、１６、２０及３８中任一种表示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：伊东恭悟，山田亮，佐田通夫，
申请(专利权)人：株式会社绿多肽，
类型：发明
国别省市：JP[日本]