本发明专利技术公开了一种能够提高以胶体金属（胶体金、胶体硒等）或乳胶颗粒作为标记物制做的快速检测试剂灵敏度的方法。本方法适用的范围是以双抗体夹心为原理，以胶体金属（胶体金、胶体硒等）或乳胶颗粒作为标记物制作的免疫层析检测试纸或渗滤试剂。其特点在于将标记有抗体并干燥后的胶体金属或乳胶颗粒不贴在样品垫和硝酸纤维素膜中间，将其干燥在另外的容器或者支持物上，检测时首先将标记有抗体并干燥后的胶体金属或乳胶颗粒和待检测样品混合。在试纸条上只粘贴样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，样品垫用来加待检测的样品，硝酸纤维素膜上固定有抗体作为检测线，检测线可以是一条或者多条，硝酸纤维素膜上还固定有对照线。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种能够提高以胶体金属(胶体金、胶体硒等)或乳胶颗粒作 为标记物制作的快速检测试剂灵敏度的方法，本方法适用的范围是以双抗体夹 心法为原理，以胶体金属(胶体金、胶体硒等)或乳胶颗粒作为标记物制做的 免疫层析检测试纸或渗滤试剂。
技术介绍
1971年Faulk和Taytor将胶体金引入免疫化学领域，此后免疫胶体金技术 作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。目前在 医学检验中的应用主要是免疫层析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗 滤法(Dot-inmiuogold filtration assay DIGFA)，用于检测HBsAg、 HCG和细菌、 病毒等病原体，具有简单、快速、准确和无污染等优点。 (一)免疫胶体金技术的基本原理氯金酸(HAuCLO在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成疏水胶 体溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过 程。其吸咐原理一般认为是由于金颗粒表面的负电荷与蛋白质的正电荷基团之 间的静电作用——非共价键的范德华引力而相互吸收，而且这种静电引力较小 而一般不影响蛋白质的活性。用化学还原法可以方便地制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗 粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与单克隆抗体、多克隆 抗体、葡萄球菌A蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床检测中成为非常有用的工具。免疫胶体金技术与放射免疫(RIA)和酶联免疫(EIA)相比有着许多优越 性。首先，它不需要酶联免疫法中所要求的底物(显色剂)，因而可省去一些操 作步骤，如洗涤、终止等，使操作简单化；其次，胶体金法无污染，不会危害 操作者、以及污染环境，而这些问题在酶免法与放免法中常遇到；再次胶体金 检测试剂通常室温储存相当稳定，即该类制品储存条件温和，效期远长于酶免 法和放免法；此外胶体金技术还具有检测迅速、不需要复杂仪器设备、产物显 色永久等优点。(二)胶体金属在免疫层析快速诊断技术中的应用免疫层析法(immunochromatography)是近几年来国外兴起的一种快速诊断 技术，其原理和通常的组分如附附图说明图1所示。附图l说明(1)吸水纸(2) 硝酸纤维素膜(3) 胶体金属结合物垫(4) 样品垫(加样位置)(5) 对照线(6) 检测线(7) 支持物(如塑料背衬)(8) 加样后的样品流动方向附图l所示(3)胶体金属结合物垫实物为胶体金属，在胶体金属上标记有 抗体，附图1所示(6)检测线位置固定有另外抗体。附图1所示(4)加样孔 位置为滴加样品的位置。附图l所示(5)对照线位置固定有第二抗体。在检测过程中，将检测样品加在(4)加样孔位置，样品由于虹吸作用按照示意图中箭头所示的方向流动。当样品到达(3)胶体金属结合物垫时，样品中的抗原和标记有抗体的胶体金属由于抗原抗体反应会结合，形成的结合物继续向前流动，到达(6)检测线位置时，检测线位置固定有另外的抗体，刚刚形成的结合物中由于结合有抗原，而这个抗原又会和(6)检测线位置的抗体反应而停留在检测线位置，所以会在检测线位置显示胶体金属的颜色。 免疫层析法检测试剂检测速度快， 一般IO分钟左右可出结果。传统的用胶体金、乳胶或胶体硒作为标记物所制作的检测试纸其主要特征为(1) 在同一支持物上粘贴样品垫、标记物垫、硝酸纤维素膜、吸水垫。(2) 样品垫用来加待检测的样品，标记物垫上干燥有己结合抗体的以上三种标 记物的其中一种或多种，硝酸纤维素膜上固定有抗体作为检测线，检测线可以 是一条或者多条(只图示一条)，硝酸纤维素膜上还固定有对照线。(3)标记物垫位于样品垫和硝酸纤维素膜中间。(三) 胶体金在快速斑点渗滤技术中的应用ELISA法在临床实验室已得到普遍的应用，特别是用于各型肝炎标志物的 检测。但ELISA法由于操作程序复杂，时间较长，给实验室带来不便。ELISA 法需时较长的主要原因，是由于液相中的抗原(或抗体)需经扩散才能与固相 上的抗原或抗体反应不适当地縮短反应时间，将使灵敏度降至临床要求以下。 为满足临床快速检测的需要，近年来发展了多种简便、快速的免疫学检测方法， 快速斑点滲滤法即为其中一种，其标记物质用胶体金即称为快速斑点免疫金渗 滤》去Dot-irainminogold filtration assay)，又称滴金免疫f去。快速斑点渗滤法的基本原理仍是间接法或夹心法。双抗体夹心法测抗原 固定于膜上的多克隆抗体+标本中待测抗原+金标记的特异性单克隆抗体显 色。结果判断快速斑点免疫金渗滤法在操作完成后即可直接观察结果。根据 测定模式的不同可有以下不同的判定结果。快速斑点免疫金渗滤法检测速度快，结果观察一目了然，己应用于多种临 床检測项目。(四) 免疫胶体金属技术随着胶体金技术的广泛应用和发展，人们将其他金属也引入免疫快速检测 领域，出现了胶体硒、胶体银、胶体铁等技术，统称为胶体金属技术。(五) 免疫胶体金属技术所面临的问题 用胶体金属或乳胶颗粒作为标记物所制作的检测试纸或渗滤试剂盒最大的优点是检测快速，在10分钟左右可知道结果，但有出现假阴性结果等的弊端。， 也正是因为检测快速，抗原和抗体反应的时间短，造成检测灵敏度低。尤其是应用于临床检验领域时，由于患者病变部位的抗原(如病毒、细菌 等)含量少，很多用胶体金属或乳胶颗粒作为标记物所制作的检测试纸或渗滤 试剂盒不能准确检出病原体的存在而影响了这些试剂的应用。如何提高这些试剂的检测灵敏度成为关键的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能提高以胶体金属(胶体金、胶体硒等)或乳胶 颗粒作为标记物的检测试剂灵敏度的方法。 为了上述目的，本专利技术采取的方案如下将标记有抗体并干燥后的胶体金属或乳胶颗粒不贴在样品垫和硝酸纤维素 膜中间，将其干燥在另外的容器或者支持物上，检测时首先将标记有抗体并干 燥后的胶体金属或乳胶颗粒和待检测样品混合。在试纸条上只粘贴样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，样品垫用来加待检测 的样品，硝酸纤维素膜上固定有抗体作为检测线，检测线可以是一条或者多条 (只图示一条)，硝酸纤维素膜上还固定有对照线。采用本专利技术后的检测试纸模式图见附图2。 附图2说明(1)吸水纸(2)硝酸纤维素膜(4) 样品垫(加样位置)(5) 对照线(6) 检测线(7) 支持物(如塑料背衬) 检测时首先将待检测样品和标记有抗体并干燥后的胶体金属或乳胶颗粒混合，这样有利于抗原抗体充分反应，然后将以上混合物加入样品垫上或者将样 品垫部分侵入以上混合物中进行检测。 本专利技术的优点是(1) 能够明显增加检测的灵敏度。(2) 能够消除用胶体金、乳胶还是用胶体硒作为标记物所制作的检测试纸 常见的假阳性反应，提高检测试剂的特异性。(3) 检测仍然快速，在10分钟内即可知道检测结果。 为了进一步理解本专利技术的实质，下面结合具体实施方式对本专利技术做进一步的说明。具体实施方式实施例l:呼吸道合胞病毒乳胶法检测试剂盒(1) 购买颗粒大小合适的乳胶颗粒。(2) 乳胶颗粒的标记按照乳胶颗粒使用说明书的步骤进行标记，将抗呼吸道合胞病毒单克隆抗 体标记到乳胶颗粒上。以合本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种能够提高以胶体金属（胶体金、胶体硒等）或乳胶颗粒作为标记物制做的快速检测试剂灵敏度的方法。其特点在于将标记有抗体并干燥后的胶体金属或乳胶颗粒不贴在样品垫和硝酸纤维素膜中间，将其干燥在另外的容器或者支持物上，检测时首先将标记有抗体并干燥后的胶体金属或乳胶颗粒和待检测样品混合。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：储宁，
申请(专利权)人：储宁，
类型：发明
国别省市：11[]
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