一种ＨＰＣＥ指纹图谱鉴别葛根药材的方法技术

本发明专利技术提供了一种ＨＰＣＥ指纹图谱鉴别葛根药材的方法，该方法为：取过３号筛的待检药材粉末，加入４００～６００倍３０％乙醇，称重，８０℃超声３０ｍｉｎ，放冷后再称重，用３０％乙醇补足减失的重量，摇匀，粗滤，滤液用０．４５μｍ微孔滤膜过滤，取滤液作为进样液，按以下步骤进行高效毛细管电泳：在压力为１３７．９ｋｐａ的条件下５秒钟时间内完成进样；接着在温度为２０℃的条件下于由体积比为５∶１的４０ｍｍｏｌ／Ｌ硼砂与甲醇组成的电泳缓冲液中分离２５ｍｉｎ，并以波长为２４０ｎｍ的紫外光检测分离物，得到所测药材的ＨＰＣＥ指纹图谱，其中前５ｍｉｎ的分离电压是２５ｋｖ，后２０ｍｉｎ的分离电压是２２ｋｖ；当所得到的指纹图谱具有如摘要附图所示的１６个特征峰时，即被检药材为葛根药材。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药材的鉴别方法，具体是采用HPCE法建立葛根(/^mW。/ofetofWmd.)Ohwi) 指纹图谱的鉴别方法。技术背景葛根是豆科植物野葛(户wera^ fo6atofWUld.)Ohwi)的干燥根径，始载于我国汉代《神 农本草经》，列为中品，是常用的传统中药，具解肌退热，生津，透疹，升阳止泻之功效，临 床常用于外感发热头痛、项背强痛，口渴，消渴，麻疹不透，热痢> 泄泻，以及高血压颈项强痛等 症状。葛根在我国分布较广泛，资源很丰富。2005年以前，我国药典收载的葛根为豆科植物野 葛Pue度ia lobata(Wild.) Ohwi或甘葛藤P匿aria thomsonill Benth.的干燥根。2005年 版中国药典开始将野葛和粉葛分开,并规定含量，野葛中葛根素含量不得少于2. 4%;粉葛中葛 根素的含量不得少于0.30%。药典中鉴定葛根的方法是外形观察和采用薄层色谱法定性检测 药材中的葛根素，用高效液相色谱法检测药材中葛根素的含量。中药色谱指纹图谱方法是近年来研究较多的一种中药鉴别和质量控制方法，该方法在实 现物质群体整体控制方面具有明显的优势，并得到了国际社会的认可。英国草药典、印度草 药典、德国药用植物学会、加拿大药用及芳香植物学会均接受并收集了指纹图谱的质控方法。 用"中药色谱指纹图谱方法"鉴别中药的真伪，控制其质量更能客观地反映中药物质基础的 整体观，是更为科学、有效的质控方法。蔡光先等报道了5批不同地区的商品葛根30M乙醇超声提取物的HPLC指纹图谱，色谱条 件是色谱柱为大连依利特公司Hypersil BDS C18柱(4. 6咖X200 mm， 5ym);流动相A (乙 腈)％ B (水)％: 0-7min' 2-98%;7-60min， 26-74%。柱温为25。C ;流速为l. 0 mL min-1;检测 被长为250nm，得到的指纹图谱共有峰共ll个。该方法用于鉴别葛根虽然具有供试品制备简单、 精密度和重复性好等优点，但存在分析时间长、流动相有机溶剂用量比例大、出峰信息量少 等不足(蔡光先，李顺祥，蒋炜.葛根超微饮片的HPLC指纹图谱研究，中南药学，2005: 3 (2): 67-70.)。陈斌等等报道了 10批不同地区的葛根30%乙醇热回流提取物的HPLC指纹图谱，色谱条件 色谱柱为Agilent ZORBAX 80A Extend-C18分析柱(250画X4 6國，5 u m):流动相为759&水溶 液与25%甲醇洗脱；流速l.O ral min-1;柱温25。C;检测波长250 nm;参比波长360 nra;分 析时间30 min;供试品及参照物进样量各20y 1，得到6个共有峰。该方法用于鉴别葛根虽然 具有分析时间短、精密度和重复性好等优点，但存在流动相有机溶剂用量比例大、出峰信息 量非常少等不足(陈斌，刘训红，蔡宝昌.葛根高效液相色谱指纹图谱的研究.时珍国医国药，2005， 16 (5): 384-385)。陈士林等采用HPLC法研究报道了13批不同地区(IO批为安徽霍山葛根基地产品)的葛根 30%乙醇热回流提取物的指纹图谱，色谱条件色谱柱为Zorbax XDB-C18(4. 6ramX250 mra， 5 um);流动相为甲醇-水，梯度洗脱O-lO min甲醇由25。/。升为30呢，20-50 min甲醇由30呢升为 80%， 50-60 min甲醇由8(W升为10(W;流速为O. 5 mL/min;检测波长为250咖;进样量为20y L， 得到15个共有峰。该方法用于鉴别葛根虽然具有出峰信息量多、精密度和重复性好等优点， 但存在流动相有机溶剂用量比例大、分析时间长等不足(陈士林，陈四保，杨大坚等.葛根 高效液相指纹图谱的研究.中草药，2003, 34 (7): 661-663)。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种鉴别葛根(A^ran'fl/o6atofWilld.)Ohwi)药材的方法。 本发祖实现上述目的的技术方案是一种HPCE指纹图谱鉴别葛根药材的方法，该方法由以下步骤组成 取过3号筛的待检药材粉末，加入400-600倍30%乙醇，称重，8(TC超声30min，放冷 后再称重，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，粗滤，滤液用0.45pm微孔滤膜过滤，取滤液 作为进样液，按以下步骤进行高效毛细管电泳分析在压力为137.9kpa的条件下5秒钟时间 内完成进样；接着在温度为2(TC的条件下于由体积比为5 : 1的40mmol/L硼砂与甲醇组成的 电泳缓冲液中分离25min，并以波长为240nra的紫外光检测分离物，得到所测药材的HPCE 指纹图谱，其中前5min的分离电压是25kv，后20min的分离电压是22kv;当所得到的指纹图谱具有以下特征峰时，即被检药材为葛根药材峰l:迁移时间为9. 84min±0. 22min，相对峰面积为3. 59%±0. 80%;峰2:迁移时间为 10, 12min±0.28niin，相对峰面积为0. 47%±0. 14%;峰3:迁移时间为10. 26min±0. 29min， 相对峰面积为4. 32%±1.24%;峰4:迁移时间为10.43rain士0.31min，相对峰面积为0.51% ±0.13%;峰5:迁移时间为13.04min土0.39min，相对峰面积为2. 16%±0. 62%;峰6:迁移 时间为13.25min士0.43rain，相对峰面积为7. 01%± 1. 78%;峰7:迁移时间为13. 73min，相 对峰面积为O. 77%±0. 23;峰8:迁移时间为14. 22min土0. 51min，相对峰面积为2. 63%±0. 58%; 峰9:迁移时间为14. 39min士0.55min,相对峰面积为2. 47%±0. 66%;峰10:迁移时间14. 94min 士0.59min;相对峰面积为55. 88%± 14. 58%:峰11:迁移时间为15. 07min±0. 62min，相对 峰面积为3. 00%±0. 77%;峰12:迁移时间为15. 75min±0. 66min，相对峰面积为3. 59%±0. 73%; 峰13:迁移时间为17.93min土0.79min，相对峰面积为2. 73%±0. 62%;峰14:迁移时间为 18. 84min±0. 86min，相对峰面积为5. 8%± 1. 04%;峰15:迁移时间为19. 04min±0. 91min， 相对峰面积为3.63%±0. 74%;峰16:迁移时间为21.69min土1.06min，相对峰面积为1.45%±0. 42%，其中峰10和峰13分别为葛根素和大豆苷元的特征峰。本专利技术方法所述的指纹图谱中的16个特征峰是将11批分别来自山东、河南、安徽(2 批)、吉林、湖北、湖南、广东、广西、江西、四川各个产区的葛根按照相同条件提取和高效 毛细管电泳分离所获得的指纹图谱中共有的特征峰，能较全面反映葛根的成分组成特点，可 用于鉴别葛根。本专利技术人还发现在所述的指纹图谱中，葛根的重要的有效成分葛根素和大豆 苷元分别占总峰面积的55.88%±14.58%和2. 73%±0.62%，因此，本领域的技术人员可以根据 这一特本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＨＰＣＥ指纹图谱鉴别葛根药材的方法，该方法由以下步骤组成：取过３号筛的待检药材粉末，加入４００～６００倍３０％乙醇，称重，８０℃超声３０ｍｉｎ，放冷后再称重，用３０％乙醇补足减失的重量，摇匀，粗滤，滤液用０．４５μｍ微孔滤膜过滤，取滤液作为进样液，按以下步骤进行高效毛细管电泳：在压力为１３７．９ｋｐａ的条件下５秒钟时间内完成进样；接着在温度为２０℃的条件下于由体积比为５∶１的４０ｍｍｏｌ／Ｌ硼砂与甲醇组成的电泳缓冲液中分离２５ｍｉｎ，并以波长为２４０ｎｍ的紫外光检测分离物，得到所测药材的ＨＰＣＥ指纹图谱，其中前５ｍｉｎ的分离电压是２５ｋｖ，后２０ｍｉｎ的分离电压是２２ｋｖ；当所得到的ＨＰＣＥ指纹图谱具有以下特征峰时，即被检药材为葛根药材：峰１：迁移时间为９．８４ｍｉｎ±０．２２ｍｉｎ，相对峰面积为３．５９％±０．８０％；峰２：迁移时间为１０．１２ｍｉｎ±０．２８ｍｉｎ，相对峰面积为０．４７％±０．１４％；峰３：迁移时间为１０．２６ｍｉｎ±０．２９ｍｉｎ，相对峰面积为４．３２％±１．２４％；峰４：迁移时间为１０．４３ｍｉｎ±０．３１ｍｉｎ，相对峰面积为０．５１％±０．１３％；峰５：迁移时间为１３．０４ｍｉｎ±０．３９ｍｉｎ，相对峰面积为２．１６％±０．６２％；峰６：迁移时间为１３．２５ｍｉｎ±０．４３ｍｉｎ，相对峰面积为７．０１％±１．７８％；峰７：迁移时间为１３．７３ｍｉｎ，相对峰面积为０．７７％±０．２３；峰８：迁移时间为１４．２２ｍｉｎ±０．５１ｍｉｎ，相对峰面积为２．６３％±０．５８％；峰９：迁移时间为１４．３９ｍｉｎ±０．５５ｍｉｎ，相对峰面积为２．４７％±０．６６％；峰１０：迁移时间１４．９４ｍｉｎ±０．５９ｍｉｎ，相对峰面积为５５．８８％±１４．５８％；峰１１：迁移时间为１５．０７ｍｉｎ±０．６２ｍｉｎ，相对峰面积为３．００％±０．７７％；峰１２：迁移时间为１５．７５ｍｉｎ±０．６６ｍｉｎ，相对峰面积为３．５９％±０．７３％；峰１３：迁移时间为１７．９３ｍｉｎ±０．７９ｍｉｎ，相对峰面积为２．７３％±０．６２％；峰１４：迁移时间为１８．８４ｍｉｎ±０．８６ｍｉｎ，相对峰面积为５．８％±１．０４％；峰１５：迁移时间为１９．０４ｍｉｎ±０．９１ｍｉｎ，相对峰面积为３．６３％±０．７４％；峰１６：迁移时间为２１．６９ｍｉｎ±１．０６ｍｉｎ，相对峰面积为１．４５％±０．４２％，其中峰１０和峰１３分别为葛...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：魏凤环，罗庆群，孙学刚，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]