本发明专利技术公开了一种乳腺癌诊断试剂盒及其制备方法。本发明专利技术在同一条检测试纸上联合检测了常用于乳腺癌诊断的ＣＡ１５－３、ＣＥＡ、ＣＡ１９－９、ＣＡ１２－５、ＳＦ等五种肿瘤标志物，利用免疫层析技术，将抗ＣＡ１５－３、ＣＥＡ、ＣＡ１９－９、ＣＡ１２－５、ＳＦ的单克隆抗体固定在硝酸纤维素膜上，同时，用不同大小的金颗粒标记五种单克隆抗体，将上述金标抗体混合后制备成金结合物垫，再辅以样品处理垫，组合成为试纸条。本发明专利技术试剂盒采用双抗体夹心法原理，快速检测人全血或血清、血浆中的五种抗原，克服了以前分开检测方法的很多弊端，一滴血就可以检测五种肿瘤标志物，检测结果更加直观，其检测的灵敏度及特异性都有了显著的提高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种诊断肿瘤的试剂盒，尤其涉及一种乳腺癌胶体金五联检 诊断试剂盒，本专利技术还涉及该试剂盒的制备方法以及该试剂盒在诊断乳腺癌 中的应用，属于生物医学领域。
技术介绍
乳腺癌是世界上最常见的上皮细胞肿瘤，对人类的健康和生存构成重大 威胁，是世界各国面临的最重要的社会问题之一。时至今日，乳腺癌占全身 恶性肿瘤的7%-10%，其发病率逐年上升，自1980年以来每年以3%的速度增 长。特别是北美、西欧等发达国家，尤为明显。全世界每年约有120万妇女发 生乳腺癌，有50万妇女死于乳腺癌。2006美国癌症协会；国际癌症学会； 国际乳腺癌联合体有关乳腺癌的统计资料显示在女性人口中，8位中就有1位将遭受乳腺癌的威胁。平均每2分半钟 即有1位女性被诊断为乳腺癌患者。在2006年，平均每13分钟就有1位女 性死于乳腺癌。仅在2006年，有212，920位女性受到乳腺癌的侵袭，大约有 40，970位患者将面临死亡。在目前乳癌发病机理不清楚的情况下，最好办法就是早期发现、早期诊 断与早期治疗，这是提高乳腺癌疗效的关键。肿瘤标志物是由肿瘤组织和细胞产生的异常表达的生物活性物质，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。多数乳腺癌患者血清中都会出现针 对某些肿瘤标志物的抗体，且与疾病的相关性已得到认可，所以肿瘤标志物 检査对乳腺癌的诊断和疗效评价方面都具有重要的意义。乳腺癌血清学诊断 中肿瘤标志物通常涉及以下三类的检査(1) 癌胚抗原(CEA): —种分子量为22KD的多醣蛋白复合物，罹患由内 胚层细胞分化而来的其它恶性肿瘤时，CEA会呈阳性反应。CEA是监测病人病 情发展的标志物，可对病人外科手术前进行CEA检测有助于评价病人的病理 状况和确定。但是其为非特异性抗原，在许多肿瘤及非肿瘤疾病中都有升高， 无鉴别诊断价值，可手术的乳腺癌术前检査约20% 30%血中CEA含量升高， 而晚期及转移性癌中则有50% 70%出现CEA高值。(2) 血清铁蛋白(SF):血清铁蛋白反映体内铁的储存状态，血清中含量 很微，其量的多少是判断体内缺铁还是铁负荷过量的指标。在很多恶性肿瘤 如白血病、胰腺癌、胃肠道肿瘤、乳腺癌中有铁蛋白的升高。但其他非恶性 肿瘤患者如经常大量饮酒引起肝脏损害、脂肪肝、慢性肝病、原发性含铁血 黄素沉积症、重型地中海贫血、铁负荷过多和肾透析等都可以引起血清铁蛋 白浓度增高，所以血清铁蛋白测定是恶性肿瘤的一项非特异性诊断指标。(3) 糖类抗原常用于乳腺癌诊断的如CA15-3 、 CA19-9、 CA12-5等。 糖类抗原15-3(CA15-3)的水平和病人的临床状态以及肿瘤治疗的应答有关， 可用于乳腺癌病人治疗过程中病情的进程和消退的监测，但对乳腺癌诊断符 合率只能达到为33. 3。％ 57%。糖类抗原12-5 (CA12-5)可区别诊断绝经 后妇女的初发和恶性肿块、决定原发性癌症的治疗和预测，并对于有乳腺癌 和卵巢癌家族史人群的检测很有帮助。但是用CA12-5进行筛查的主要问题是 对于早期疾病缺乏灵敏度(仅有509()的I期病人CA12-5升高)和特异性。并且CA12-5不是卵巢癌的特异性标志物，输卵管腺癌、子宫内膜癌、宫颈癌、 胰腺癌、肠癌、乳腺癌和肺癌患者CA12-5的水平也会升高。糖类抗原19-9 (CA19-9)主要被用来作为筛检乳腺癌、胰脏癌、胆囊癌、结肠癌和胃癌的 相关抗原。正常人体组织中含量甚微。然而单独检测上述某一肿瘤标志物指标，并不能提供更多的信息，检测 灵敏度和特异性都比较低，很难检测出早期或复发乳腺癌患者，容易出现误 诊或漏诊。如同时使用CA15-3、 CEA、 CA19-9、 CA12-5及SF联合诊断乳腺癌 即可提高临床检测的灵敏度及特异性。免疫层析法(Immunochromatography)是九十年代在美国兴起的一种基 于免疫胶体金技术的快速诊断技术，临床上应用的产品主要采用双抗体夹心 的设计，此技术与以往的任何一项检测技术相比的突出优点，快速(全部检 测过程仅需3-20分钟)、准确、简便、价格低廉、人为操作误差小、稳定性 好等特点外，由于该层析法为通过硝酸纤维素膜进行横向流动，允许并联多 个试剂条进行多项指标联合检测，从而达到联检的目的。
技术实现思路
本专利技术目的在于应用免疫层析法研制出一种可靠的临床联合检测诊断 试剂，其主要检测CA15-3、 CEA、 CA19-9、 CA12-5、 SF五种肿瘤标志物，从 而大大提高乳腺癌检测的速度和效率，相对于单检试剂具有灵敏度高及特异 性强等特点。同时，每种肿瘤标志物的显色颜色不同，结果判断更加直观。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的一种乳腺癌胶体金五联检诊断试剂盒，包括反应卡，吸滴管、血清加样 杯和一次性注射器，所述的反应卡自下而上依次由样品垫、胶体金标记的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫(各自的边缘)连接在一起后固定于背衬上而组成；其中，所述的胶体金标记的结合垫按照以下方法制备得到将CA15-3 单克隆抗体、CEA单克隆抗体、CA19-9单克隆抗体、CA12-5单克隆抗体和SF 单克隆抗体分别用金溶胶粒标记后，将其混合，包被于玻璃纤维上，即得；所述的硝酸纤维素膜上含有由CA15-3单克隆抗体、CEA单克隆抗体、 CA19-9单克隆抗体、CA12-5单克隆抗体和SF单克隆抗体所分别包被而成的5 条检测线和1条由羊抗鼠IgG包被而成的对照线。优选的，所述的胶体金标记的结合垫按照以下方法制备得到将CA15-3 单抗用粒径为15nm的金溶胶粒标记，CEA单抗用粒径为24. 5 nm的金溶胶粒 标记，CA19-9单抗用粒径为41nm的金溶胶粒标记，CA12-5单抗用粒径为71 nm的金溶胶粒标记，SF单抗用粒径为97.5 mn的金溶胶粒标记，将金溶胶粒 标记的5种单抗混合后(优选为等比例混合)，包被于玻璃纤维上，即得。优选的，所述的硝酸纤维素膜上的5条检测线和1条对照线按照以下 次序排列而成从靠近吸水纸一端到靠近胶体金结合垫一端依次为羊抗鼠IgG 对照线、抗CA15-3单克隆抗体检测线、抗CEA单克隆抗体检测线、抗CA19-9 单克隆抗体检测线、抗CA12-5单克隆抗体检测线、抗SF单克隆抗体检测线。其中，所述的硝酸纤维素膜可以由尼龙膜等代替。所述的背衬可以是各种硬质的支持物，只要具有一定的硬度具有附载或 支持的功能都可用于本专利技术，例如可以是塑料板(PVC)、硬纸板等，优选为 PVC。本专利技术首先制备抗CA15-3、 CEA、 CA19-9、 CA12-5、 SF单克隆抗体，分 别对上述单克隆抗体做特异性的鉴定、识别抗原表位的鉴定、亲合力的鉴定及配对试验，分别筛选出了效果最好的一对细胞株。再用不同大小的金颗粒分别标记抗CA15-3、 CEA、 CA19-9、 CA12-5、 SF单克隆抗体，按一定比例混 合，制备成金结合物垫；通过试验发现，抗CA15-3、 CEA、 CA19-9、 CA12-5、 SF单克隆抗体在试纸条上的不同分布关系到检测结果的准确性和特异性，本 专利技术通过一系列的试验，最终确定了抗CA15-3、 CEA、 CA19-9、 CA12-5、 SF 单克隆抗体在硝酸纤维素膜上的最佳排列位置，从而最大限度的提高了对乳 腺癌诊断的检本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种乳腺癌诊断试剂盒，包括反应卡，吸滴管、血清加样杯和一次性注射器，其特征在于：所述的反应卡自下而上依次由样品垫、胶体金标记的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫连接在一起后固定于背衬上而组成；其中，所述的硝酸纤维素膜上含有由抗ＣＡ１５－３单克隆抗体、抗ＣＥＡ单克隆抗体、抗ＣＡ１９－９单克隆抗体、抗ＣＡ１２－５单克隆抗体和抗ＳＦ单克隆抗体所分别包被而成的５条检测线和１条由羊抗鼠ＩｇＧ包被而成的对照线。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金鑫，戴路，
申请(专利权)人：黑龙江美康汇融生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]
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