一种盐酸曲马多杂质E的HPLC检测方法技术

本发明专利技术提供了一种盐酸曲马多杂质E的HPLC检测方法，采用液相色谱法检测盐酸曲马多中杂质E，既能定性分析杂质E的有无，又能定量分析杂质E的准确含量，相比于现有的TLC薄层层析法实验操作更加简捷；色谱峰无干扰，灵敏度高，方法学验证结果均符合要求；说明本检测方法专属性好，灵敏度高，定量准确，受检测环境影响较小；本发明专利技术提供的液相色谱检测方法更加适用于规模化生产和质控过程中产品质量的控制。

【技术实现步骤摘要】
一种盐酸曲马多杂质E的HPLC检测方法
本专利技术属于药物分析领域，具体而言，涉及一种盐酸曲马多有关物质检测的方法。
技术介绍
盐酸曲马多(Tramadol)，其化学名为(±)-反-1-(间-甲氧基苯基)-2-(二甲基氨)-甲基)-环己醇的盐酸盐，分子式：C16H26ClNO2，分子量：299.84。其结构式为：曲马多(Tramadol)为非吗啡类强效镇痛药。主要作用于中枢神经系统与疼痛相关的特异受体。无致平滑肌痉挛和明显呼吸抑制作用，口服后10～20分钟起效，镇痛作用可维持4～6小时。可延长巴比妥类药物麻醉持续时间。与安定类药物同用可增强镇痛作用。(2RS)-2-二甲氨基甲基环己酮((2RS)-2-[(dimethylamino)-methyl]cyclohexanone)，为盐酸曲马多可能存在的工艺杂质，为EP药典列为杂质E。目前盐酸曲马多EP药典中杂质E测定方法为薄层层析色谱法(限度法)，具体如下：标准溶液：0.1mg/mL的杂质E甲醇溶液；样品溶液：50mg/mL盐酸曲马多甲醇溶液；吸附剂：0.25mm色谱硅胶混合物；显影溶剂体系：甲苯、异丙醇、25％氨水(80:19:1)；亚硝酸钠溶液：50mg/mL亚硝酸钠水溶液。分析操作过程：将板放置在由强氨水的氨蒸汽饱和的色谱室中，静置20分钟。分别向板上涂抹大约10微升的样品溶液和标准溶液，并展开板，直到溶剂前沿高于起始展开线至少10厘米。取下平板，用Dragendorff试剂喷雾，风干5分钟。用亚硝酸钠溶液喷雾干燥平板，直到标准溶液中曲马多杂质E的斑点可见。与曲马多杂质E对应的样品溶液中的点不比标准溶液中的相应点强。经研究发现，在实际操作过程中，上述方法存在以下不足：(1)显影溶剂体系复杂，应用到易制毒试剂甲苯及异丙醇、氨水，吸入对身体毒性大，气味大，对环境污染严重；(2)亚硝酸钠溶液、Dragendorff试剂配制复杂，操作繁琐；(3)肉眼观测，主观误差大；层析结果只能定性分析样品中是否含有杂质E，不能准确定量反应杂质E的含量；(4)薄层层析法实验结果难以保存，数据不能存储，调取困难；应用于规模生产过程中质量控制时存在数据不可控风险。目前盐酸曲马多EP药典中杂质E应用液相色谱等仪器分析方法的主要限制为紫外吸收较弱，表现为在液相色谱中信号响应不高，灵敏度低；杂质E保留能力差，出峰快，导致峰面积可能包含其他杂峰，定量不准确，引起分析误差。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测方法，以克服现有技术存在的不足，本专利技术公开了一种良好分离盐酸曲马多与EP药典中杂质E的高效液相色谱方法，并提供了完整验证方案，操作简单，精密度高，稳定性好，重现性好。本专利技术提供了盐酸曲马多有关物质的HPLC检测方法，其特征在于：包括如下操作步骤：(1)溶液配制：a)空白溶剂：流动相。b)杂质E对照品贮备液：精密称取杂质E对照品适量，用流动相溶解并稀释制成浓度约为200μg/ml的溶液，作为杂质E对照品贮备液。c)杂质E对照品溶液：精密量取杂质E对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。d)供试品溶液：精密称取盐酸曲马多约200mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。e)加标供试品溶液：精密称取盐酸曲马多约200mg，置10ml量瓶中，精密量入杂质E对照品贮备液1.0ml，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为加标供试品溶液。(2)色谱条件：(2)仪器及色谱条件：仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT；色谱柱：AgilentZORBAXSB-Phenyl4.6×250mm5μm；流动相：0.2％三氟乙酸-乙腈(83:17)为流动相；波长：270nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min；进样体积：20ul。(3)测定法：精密量取供试品溶液及对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录液相色谱图，按外标法以峰面积计算。所述的盐酸曲马多有关物质是(2RS)-2-二甲氨基甲基环己酮。所述的盐酸曲马多有关物质的HPLC检测方法，其特征在于：步骤(2)中所述的色谱柱填料为苯基键合硅胶。所述的盐酸曲马多有关物质的HPLC检测方法，其特征在于：步骤(2)中流动相的流速为0.9～1.1ml/min。所述的盐酸曲马多有关物质的HPLC检测方法，其特征在于：步骤(2)中柱温的范围为38～42℃。所述的盐酸曲马多有关物质的HPLC检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相中乙腈的体积比例范围为10％～15％。所述的盐酸曲马多有关物质的HPLC检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相中三氟乙酸溶液的质量比例范围为0.1％～0.5％，优选地，三氟乙酸溶液的质量比例为0.2％。所述的盐酸曲马多有关物质的HPLC检测方法，其特征在于：步骤(2)中的流动相中0.2％三氟乙酸的体积比例范围为85％～90％。所述的盐酸曲马多有关物质的HPLC检测方法，其特征在于：步骤(2)中的检测波长较优的范围为265nm-280nm，优选地，检测波长为270nm或271nm。特别地，此检测方法的流动相体系及色谱条件为在本专利技术时间、地点、环境及操作者限制下最优，而不限于此流动相体系及色谱条件，对此流动相体系的比例、浓度及色谱条件做适当修改、调整与等同替换，并不脱离本专利技术的技术思想和保护范围。本法的优点在于：本专利技术方法使杂质E可以在液相色谱中与盐酸曲马多达到良好分离，不干扰，响应高，便于规模化生产过程中产品质量的控制，并对方法进行了充分的方法学验证，具有简单易行，准确性及精密度高、稳定性及重现性好的优点。附图说明图1为实施例1中盐酸曲马多及杂质E色谱峰定位图；图2为对比例1参考EP及USP药典中盐酸曲马多杂质E的薄层层析检测图片，其中，点样1点为样品加对照溶液；点样2点为对照溶液；点样3点为样品溶液；图3为对比例2参考EP及USP药典中盐酸曲马多有关物质液相方法检测色谱图。具体实施方式根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术技术思想的前提下，还可以做出其他多种形式的修改，替换和变更。以下通过实施例形式对上述内容作进一步补充说明，但不应该理解为本专利技术范围仅限于以下实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。实施例1(1)仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT；色谱柱：AgilentZORBAXSB-Phenyl4.6×250mm5μm；流动相：0.2％三氟乙酸-乙腈(83:17)为流动相；波长：270nm；柱温：40℃；流速：1.0ml/min；进样体积：20ul。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种盐酸曲马多杂质E的HPLC检测方法，其特征在于：包括如下操作步骤：/n(1)溶液配制：/na)空白溶剂：流动相；/nb)杂质E对照品贮备液：精密称取杂质E对照品适量，用流动相溶解并稀释制成浓度约为200μg/ml的溶液，作为杂质E对照品贮备液；/nc)杂质E对照品溶液：精密量取杂质E对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得；/nd)供试品溶液：精密称取盐酸曲马多约200mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；/ne)加标供试品溶液：精密称取盐酸曲马多约200mg，置10ml量瓶中，精密量入杂质E对照品贮备液1.0ml，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为加标供试品溶液；/n(2)仪器及色谱条件：/n仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT；/n色谱柱：Agilent ZORBAX SB-Phenyl 4.6×250mm 5μm；/n流动相：三氟乙酸水溶液-乙腈溶液(83:17)为流动相；/n波长：270nm；/n柱温：40℃；/n流速：1.0ml/min；/n进样体积：20ul；/n(3)测定法：/n精密量取供试品溶液及对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录液相色谱图，按外标法以峰面积计算。/n...

【技术特征摘要】
1.一种盐酸曲马多杂质E的HPLC检测方法，其特征在于：包括如下操作步骤：
(1)溶液配制：
a)空白溶剂：流动相；
b)杂质E对照品贮备液：精密称取杂质E对照品适量，用流动相溶解并稀释制成浓度约为200μg/ml的溶液，作为杂质E对照品贮备液；
c)杂质E对照品溶液：精密量取杂质E对照品贮备液1.0ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得；
d)供试品溶液：精密称取盐酸曲马多约200mg，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
e)加标供试品溶液：精密称取盐酸曲马多约200mg，置10ml量瓶中，精密量入杂质E对照品贮备液1.0ml，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为加标供试品溶液；
(2)仪器及色谱条件：
仪器：岛津液相色谱仪LC-20AT；
色谱柱：AgilentZORBAXSB-Phenyl4.6×250mm5μm；
流动相：三氟乙酸水溶液-乙腈溶液(83:17)为流动相；
波长：270nm；
柱温：40℃；
流速：1.0ml/min；
进样体积：20ul；
(3)测定法：
精密量取供试品溶液及对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录液相色谱图，按外标法以峰面积计算。


2.根据权利要求1所述的一种盐酸曲马多杂质E的HPLC检测方法，其特征是所述高效液相色谱法的条件包括：采用紫外检测器...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丹，吴辉，王付荣，
申请(专利权)人：山东新华制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37