一种氨基葡萄糖的分析方法技术

本发明专利技术属于分析化学领域，具体的涉及一种氨基葡萄糖的高效液相色谱分析方法。通过本发明专利技术的实施，完整地建立了氨基葡萄糖的高效，快速，准确和精确的定量分析方法，为氨基葡萄糖在食品、保健食品和药品的应用和检测奠定了良好的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分析化学领域，具体的涉及氨基葡萄糖的分析方法。技术背景软骨是由一小部分软骨细胞和大部分软骨基质组成的，软骨基质是由蛋白多 糖、胶原纤维和水等组成的。蛋白多糖集聚体是由蛋白多糖聚合而成，其最主要的 作用是组成细胞间的基质，包括关节软骨中的基质，是支撑、维系各细胞间关系的 结构性物质，充斥于人们身体的每一部分。它也是关节软骨的重要组成成分，并吸 引大量水分子形成凝胶状，它与胶原纤维共同组成软骨基质的固体、网络形态，承 受关节运动时的负荷。每一个蛋白多糖集聚体就像一个小弹簧，具有良好的弹性和 膨胀能力，对关节起机械性保护作用。蛋白多糖与其它基质大分子相连，有助于稳定软骨基质。由于蛋白多糖中的羧 基、硫酸根均带有负电荷，彼此相斥，所以蛋白多糖集聚体在溶液内呈瓶刷状。在 正常的组织修复，以及软骨退变过程中，关节软骨中的蛋白多糖不断地被分解，并 从软骨中排出。被分解的片段可以在关节滑液中找到，并可以通过滑膜进入淋巴系 统。而氨基葡萄糖(Glucosamine)是人体内天然存在的氨基单糖，是软骨细胞 Chondrocytes进行生物合成与代谢必不可少的底物。在正常情况下，氨基葡萄糖是通过体内葡萄糖的氨基化来合成的，具有与葡萄 糖Glucose完全不同的生理活性。氨基葡萄糖是组成聚氨基葡萄糖 (Glucosaminoglycan， GAG)的最小单位之一，它和糖醛酸组成了聚氨基葡萄糖，以 前叫"粘多糖Mucopolysaccharide"。聚氨基葡萄糖主要有硫酸软骨素 Chondroitin Sulfate 、硫酸角质素Keratan Sulfate 、硫酸皮肤素De歷tan Sulfate、透明质酸Hyaluronic Acid等。一种或多种聚氨基葡萄糖GAG以共价键与核心蛋白(Core Protein)结合，称为 蛋白多糖(Proteoglycans蛋白多糖，也叫蛋白聚糖，全称为蛋白质核心多糖， 由聚氨基葡萄糖共价连接于核心蛋白形成，它是一种复杂的大分子。蛋白多糖通 过连接蛋白(Link Protein),在透明质酸长链两侧的特殊位点上结合，形成非常大的聚合体，即蛋白多糖集聚体(Proteoglycan Aggrecan)，重量约为2 X 103 kDa。 氨基葡萄糖是一种从天然甲壳质中提取的氨基己糖，是人体及动物体内关节组 织中糖蛋白的天然成分，其化学结构式为随着年龄的增长，人体内氨基葡萄糖合成能力减弱，从而使蛋白多糖合成不足， 进一步引发退行性关节疾病和骨关节炎。氨基葡萄糖可以刺激软骨细胞产生有正常 多聚体结构的蛋白多糖，抑制损伤软骨的酶如胶原酶和磷脂酶A2，并可防止损伤细 胞的超氧化自由基的产生，从而延缓骨关节炎的病理过程和疾病的进展，改善关节 活动，缓解疼痛，近年来国外已成功的将其盐酸盐引入到全身骨关节炎的治疗和预 防。氨基葡萄糖的含量测定方法通常采用比色法测定，将样品显色后在525nm处测 定，但操作较为繁 琐、费时，且重现性较差。陈金东，李蔚在<〈中国卫生检验杂志》2002年02期采用滴定分析方法和分光 光度法,定量测定保健食品中的D-盐酸氨基葡萄糖.滴定分析法精密度(『6)为94. 0 % ±0. 4%,相对标准偏差(RSD)为0. 4%回收率为97. 1% 99. 7%.分光光度法精密 度(『6)为93.9X土1.0X，相对标准偏差(RSD)1. 1%,回收率为97. 4% 103. 0%. 对两种实验方法比对实验的结果进行t检验，t=0. 243<t (0. 05, 18)=2. 101， P>0. 05: 两种分析方法所得实验的结果无明显差异.两种方法操作简便,精密度、准确度均较 高,适合于保健食品中D-盐酸氨基葡萄糖的测定，滴定分析法更适合D-盐酸氨基葡 萄糖含量较高的保健食品及原料纯度进行测定。但这些方法仍然有不够准确和简便，而且专属性不强，随着氨基葡萄糖在食品， 保健食品和药品中的广泛应用，需要建立一套比较快速、简便和精确的分析方法用于氨基葡萄糖的定量分析。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种准确、简便、专属性强的氨基葡葡糖的分析方法。 具体而言，本专利技术的色谱分析技术方案如下a. 分析仪器采用采用高效液相色谱仪，反相色谱柱和紫外检测器；b. 流动相为pH值为2. 0-4. 0的磷酸盐缓冲液和有机溶剂配制而成，其体积比为磷 酸盐缓冲液有机溶剂=10:90-90:10;c. 稳定高效液相色谱仪后，对色谱体系进样，流速为0.5-1. 5ml/min，d. 采用外标法测定样品含量。优选的，上述反相色谱柱为氨基色谱柱；优选的，上述反相色谱柱的长度为10-30cm，直径为3-10mm;优选的，上述的流速为0. 6ml/min;优选的，上述的色谱分析时间为10-45rain;更优选30mir,; 优选的，上述的进样量为5y1-10yl; 优选的，上述的流动相中有机溶剂为甲醇和乙腈； 优选的，上述磷酸盐缓冲液的pH值为3. 0。本专利技术与现有技术相比具有如下优点分析结果误差小，准确、可靠；分析过 程快速，操作简便。本专利技术与比色法、滴定分析方法和分光光度法相比具有准确、 简便、专属性强的特点。具体实施方式: 下面用实验例进一步描述本专利技术，有利于对本专利技术及其优点、效果更好的了解， 但所述实验例仅用于说明本专利技术而不是限制本专利技术。实验例l一高效液相色谱条件的选择 仪器与试剂采用日本岛津LC-10A型高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱分离系统的控制和记录由威玛龙色谱工作站完成。盐酸氨基葡萄糖对照品购自中国药品生物制品检定所；盐酸氨基葡萄糖样品购自浙江诚意药业有限公司；乙腈为色谱 纯(美国Fisher公司，北京屹东博杰科技有限公司提供)，流动相用水为超纯水， 其它试剂均为分析纯。色谱柱Welch Materials公司Ultimate XB-NH2， 5, 4. 6X250mm;柱温30。C。检测波长盐酸氨基葡萄糖无特征吸收峰，紫外吸收在末端紫外区，故选择195nm作为检测波长。流动相磷酸盐缓冲液(pH3.0)为水相时，效果比较好，峰形比较尖锐，分离 度较好，故流动相可以为磷酸盐缓冲液(pH3.0):乙腈=65:35。进样量lO)ll。盐酸氨基葡萄糖结构中含有多个羟基，极性强，在反相色谱柱上保留能力弱， 并有拖尾现象经过试验，当流动相选择以磷酸盐缓冲液(pH3.0)为水相时，效果比 较好，峰形比较尖锐，分离度较好，故流动相可以为磷酸盐缓冲液(pH3.0):乙腈二 65:35，在该流动相系统下，各杂质峰与主成分峰均能达到有效分离。实验例2 —高效液相色谱条件的选择仪器与试剂采用日本岛津LC-10A型高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱分 离系统的控制和记录由威玛龙色谱工作站完成。盐酸氨基葡萄糖对照品购自中国药 品生物制品检定所；盐酸氨基葡萄糖样品购自浙江诚意药业有限公司；乙腈为色谱 纯(美国Fisher公司，北京屹东博杰科技有限公司提供)，流动相用水为超纯水，其它试剂均为分析纯。色谱柱Welch Materials公司Ultimate XB-NH2， 5pm, 4. 6X250mra;柱温-3CTC。检测波长盐酸氨基葡萄糖无特征吸收峰，紫外吸收在末端紫外区，故选择195nm本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氨基葡萄糖的分析方法，其特征在于采用以下方法定量分析：　　　　ａ．氨基葡萄糖包括盐酸氨基葡萄糖及硫酸氨基葡萄糖；　　　　ｂ．分析仪器采用采用高效液相色谱仪，反相色谱柱和紫外检测器；　　　　ｃ．流动相为ｐＨ值为２．０－４．０的磷酸盐缓冲液和乙腈配制而成，其体积比为磷酸盐缓冲液∶乙腈＝２０∶８０－８０∶２０；优选６５∶３５。　　　　ｄ．稳定高效液相色谱仪后，对色谱体系进样，流速为０．２－２ｍｌ／ｍｉｎ。　　　　ｄ．采用外标法测定样品含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：司成桃，
申请(专利权)人：北京诚创康韵医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]