本发明专利技术公开了一种乳腺癌诊断试剂盒及其制备方法。本发明专利技术试剂盒包括反应卡，吸滴管、血清加样杯和一次性注射器；所述的反应卡依次由样品垫、胶体金标记的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫连接组成。本发明专利技术分别将抗ＣＡ２７．２９、ＴＰＳ、ＣＹＦＲＡ２１－１的３种单克隆抗体固定在硝酸纤维素膜的不同位置上；同时，用不同大小的金颗粒标记上述三种单克隆抗体，将上述金标抗体混合后制备成金结合物垫，再加上样品垫和吸水垫，组合成为反应卡。本发明专利技术试剂盒可以快速、准确的检测出早期或复发乳腺癌患者，具有灵敏度高、特异性强等优点，仅需３－２０分钟即可完成全部检测过程。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种诊断肿瘤的试剂盒，尤其涉及一种乳腺癌胶体金三联检 诊断试剂盒，本专利技术还涉及该试剂盒的制备方法以及该试剂盒在诊断乳腺癌中 的应用，属于生物医学领域。
技术介绍
乳腺癌是世界上最常见的上皮细胞肿瘤，对人类的健康和生存构成重大 威胁，是世界各国面临的最重要的社会问题之一。时至今日，乳腺癌占全身恶 性肿瘤的7%-10%，其发病率呈逐年上升趋势，自1980年以来每年以3%的速度 增长，特别是北美、西欧等发达国家，表现的尤为明显。全世界每年约有120 万妇女发生乳腺癌，其中，有50万妇女死于乳腺癌。2006美国癌症协会，国 际癌症学会和国际乳腺癌联合体有关乳腺癌的统计资料显示在女性人口中， 每8位就有1位将遭受乳腺癌的威胁。平均每2分半钟就有1位女性被诊断为 乳腺癌患者。在2006年，平均每13分钟就有1位女性死于乳腺癌。仅在2006 年，有212， 920位女性受到乳腺癌的侵袭，大约有40， 970位患者将面临死亡。 在目前乳癌发病机理不清楚的情况下，最好办法就是早期发现、早期诊 断与早期治疗，这是提高乳腺癌疗效的关键。肿瘤标志物是由肿瘤组织和细胞产生的异常表达的生物活性物质，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。多数乳腺癌患者血清中都会出现针 对某些肿瘤标志物的抗体，且与疾病的相关性已得到认可，所以肿瘤标志物 检査对乳腺癌的诊断和疗效评价方面都具有重要的意义。CA27.29是一种与肿瘤相关的粘蛋白抗原，其分子是O"连接的低聚糖 蛋白，分子量很大。目前，已知由人类MUC-l基因编码的与乳腺癌相关的抗原 分别有MAM6、乳汁粘蛋白、CA27.29和CA15-3。用这些抗原制备的单克隆抗体，能够不同程度地定量检査患n期或m期乳腺癌妇女的癌症复发情况。据有关资料报道，肿瘤相关抗原CA27.29对预测II期或III期乳腺癌病人复发情 况具有较高的特异性(达99%)和准确率(88%)。美国食品和药品管理局(FDA) 近期已批准使用RIA CA27.29。临床上，通常用40U/ml (RIA)作为正常值的 上限。对乳腺癌和卵巢癌转移的病人，特别是经治疗后临床上无疾病症状的 病人，在定期进行血清CA27. 29检查时发现，测定值大于40U/ml的病人比 测定值小于40U/ml或等于40U/ml的病人，其存活率要低得多。组织多肽特异抗原(TPS)是细胞角蛋白片段18上的M3抗原决定簇， 血清中组织多肽特异抗原含量的高低是衡量肿瘤细胞分裂和增殖活性的一个 较为特异的指标。研究表明，组织多肽特异抗原在肿瘤的早期诊断、预测复 发和转移、评价预后方面有独特的价值。与传统的肿瘤标志物如甲胎蛋白、 癌胚抗原等不同的是，组织多肽特异抗原是"肿瘤活性依赖型"的，它在血 清中含量的高低与正在分裂、增殖的肿瘤细胞的数目有关，即与肿瘤的活性 有关；而甲胎蛋白、癌胚抗原等则是"肿瘤容量依赖型"的，与肿瘤的瘤体 负荷即肿瘤细胞的数目有关。因此，在肿瘤的早期，在出现肉眼复发或转移 之前，由于肿瘤细胞数目较少，那些反映肿瘤容量的标志物的血清水平往往 是很低的，而此时肿瘤细胞分裂、增殖活跃，因而组织多肽特异抗原含量可以很高，从而有利于早期发现、早期诊断和防治。CYFRA21-1是细胞角蛋白19片段抗原21-l(cytokeratin 19 fragment antigen 21-1)的英文縮写，1992年BODENMULER等采用杂交瘤技术制备出 BM19. 21和KS19. 1两株单克隆抗体，经配对组成免疫测定方法，可特异性的 识别细胞角蛋白19的片段抗原。在正常情况下细胞角蛋白19在外周血、骨 髓、淋巴结中无表达或低表达，而在恶性上皮癌中，激活的蛋白酶加速了细 胞的降解，使得大量可溶性的CYFRA21-1被释放，造成血液中CYFRA21-1浓 度升高。CYFRA21-1作为一种新的上皮来源性质的肿瘤标志物，近几年来在肿 瘤临床的应用越来越广泛，在许多上皮性癌如肺癌、鼻咽癌等都有不同程度 的检出率；文献报道乳腺癌患者血清CYFRA21-1水平与临床分期有关，但其 阳性率不高，仅为21.2%，但与良性肿瘤组差异有显著性，CYFRA21-1阳性率 随临床分期及有无转移或复发的程度增加而上升。由于相关上皮起源的肿瘤 都可能表达CK19，因此CYFRA21-1的检测亦可出现假阳性，这需要结合临床 资料及通过追踪观察加以排除。单独检测上述某一肿瘤标志物指标，并不能提供更多的信息，检测灵敏 度和特异性都比较低，很难检测出早期或复发乳腺癌患者，容易出现误诊或 漏诊。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种新的乳腺癌诊断试剂盒，相比于现有的乳腺癌 诊断试剂盒，本专利技术乳腺癌诊断试剂盒具有更高的灵敏度高和更强的特异性 强。针对CA27. 29对乳腺癌诊断具有特异性高的特点，TPS在肿瘤的早期诊断、预测复发和转移、评价预后方面有独特的优势，CYFRA21-1在乳腺癌临床 分期有关及区分恶性与良性肿瘤方面的特性，本专利技术应用免疫层析法将以上 三种抗原联合使用，从而大大提高了乳腺癌临床检测的灵敏度及特异性，相 对于单检试剂具有灵敏度高及特异性强等特点，同时，每种肿瘤标志物的显 色颜色不同，结果判断更加直观。具体的，本专利技术目的是通过以下技术方案来实现的一种乳腺癌胶体金三联检诊断试剂盒，包括反应卡、吸滴管、血清加样 杯和一次性注射器，其中，所述的反应卡自下而上依次由样品垫、胶体金标 记的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫(各自的边缘)连接在一起后固定于背 衬上而组成；其中，所述的胶体金标记的结合垫按照以下方法制备得到将CA27.29 单克隆抗体、TPS单克隆抗体和CYFRA21-1单克隆抗体分别用金溶胶粒标记后， 将其混合，包被于玻璃纤维上，即得；更优选的，所述的胶体金标记的结合垫按照以下方法制备得到将 CA27. 29单抗用粒径为24. 5 nm的金溶胶粒标记，TPS单抗用粒径为41 nm的 金溶胶粒标记，CYFRA21-lCA12-5单抗用粒径为71nm的金溶胶粒标记，将金 溶胶粒标记的3种单抗混合后(优选为等比例混合)，包被于玻璃纤维上，即 得。所述的硝酸纤维素膜上含有由抗CA27. 29单克隆抗体、抗TPS单克隆抗 体和抗CYFRA21-1单克隆抗体分别包被而成的3条检测线和1条由羊抗鼠IgG 包被而成的对照线；更优选的，所述的硝酸纤维素膜上的3条检测线和1条 对照线按照以下次序排列而成从靠近吸水纸一端到靠近胶体金结合垫一端 依次为为羊抗鼠IgG对照线、抗CA27. 29单克隆抗体检测线、抗TPS单克隆抗体检测线和抗、CYFRA21-1单克隆抗体检测线。其中，所述的硝酸纤维素膜可以由尼龙膜等代替。所述的背衬可以是各种硬质的支持物，只要具有一定的硬度具有附载或 支持的功能都可用于本专利技术，例如可以是塑料板(PVC)、硬纸板等，优选为 PVC。本专利技术首先制备抗CA27.29、 TPS、 CYFRA21-1的单克隆抗体(所述3 种单克隆抗体的制备方法可参考实施例所公开的方法)；再用不同大小的金颗 粒分别标记抗CA27.29、 TPS、 CYFRA21-1单克隆抗体，按一定比例混合，制 备成金结合物垫；通过试验发现，抗CA27. 29、 TPS、 CYFRA21-1单克本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种乳腺癌诊断试剂盒，包括反应卡，吸滴管、血清加样杯和一次性注射器，其特征在于：所述的反应卡自下而上依次由样品垫、胶体金标记的结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫各自的边缘连接在一起后固定于背衬上而组成；其中，所述的硝酸纤维素膜上含有由抗ＣＡ２７．２９单克隆抗体、抗ＴＰＳ单克隆抗体、抗ＣＹＦＲＡ２１－１单克隆抗体所分别包被而成的３条检测线和１条由羊抗鼠ＩｇＧ包被而成的对照线。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金鑫，戴路，
申请(专利权)人：黑龙江美康汇融生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]
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