一种乳品中是否含有发酵抑制物的快速检验方法技术

本发明专利技术公开了一种乳品中是否含有发酵抑制物的快速检验方法，包括以下步骤：１）将液态的待测乳品设置成相同规格的２份，１份为对照组，另１份为检验组；在对照组和检验组内分别加入相同数量的液态发酵剂均匀混合；２）在对照组中加入作为指示剂的试剂Ⅰ、试剂Ⅱ并均匀混合，使对照组成淡红色；３）将检验组在４２～４８℃的温度下培养１０～１５分钟，然后加入与步骤２）相同数量的试剂Ⅰ和试剂Ⅱ并均匀混合；４）获得检验结果：如果步骤３）所得物呈乳白色，则说明待测乳品中没有发酵抑制物质；如果步骤３）所得物呈现淡红色，则说明待测乳品中含有发酵抑制物质。采用本发明专利技术的检验方法，能简便、快速地获得准确的检验结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，具体地说是一种用于检 验生鲜动物乳液中是否含有抗生素残留及其它发酵抑制物质的方法。
技术介绍
动物乳液中的发酵抑制物是指抗生素残留物和其它发酵抑制物质，其它发酵抑制物质 的范围很广，主要包括清洗剂或消毒剂的残留、药品的残留物、乳品防腐剂等物质。牧场内经常使用抗生素治疗乳牛或羊的各种疾病，凡经抗生素治疗过的乳牛和羊，其 所分泌的乳液在一定时期内仍残存着抗生素。对抗生素有过敏体质的人(服)食用此种乳 液后就会发生过敏反应，也会使人体内的某些菌株对抗生素产生抗药性。因此，随着人们 对食品安全意识的提高，促使乳品加工企业对乳制品的主要原料 一 生鲜牛乳的质量控制 日趋严格，因此检査乳液中有无抗生素残留已成为常规、必要的检验工作。在目前的现有技术中，主要的检测方法有微生物抑制法和酶联免疫法。微生物检测 法是应用最早而广泛的方法，其测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制 作用来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留，如纸片法(PD)、TTC法、拭子法(STOP) 等。采用上述传统的微生物检测方法的优点是可靠，价格低，易操作。缺点是(l)时间长，需2.5小时以上；(2)显色状态判断通过肉眼辨别，易产生误差，对微红色者无法做出准确 判断；(3)操作复杂。其中，纸片法和TTC法是牛奶中药物残留检测的两种常用的微生物 检测法。采用传统的酸奶培养方法在2.5小时内亦可有良好的结果，还可以分类断 定不同的微生物种类。国际乳品联合会推荐的微生物检测抗生素残留菌种为嗜热脂肪芽 孢杆菌(5acz7/ws WearaA^vwop/ 7i var.calidolactis)，由于它对抑制物质的敏感性较高。已有大量的快速检测筛选方法问世并应用，微生物抑制法的主要试剂盒有 DELVOTEST、 CHARM SCIENCE、 BRILLIANT BLACK REDUCTION等；但由于标准方 法所需时间长，测定手续亦繁琐，因此，在生产中趋向研究更为灵敏、准确、简便、快速 的微生物检测方法。目前药物残留免疫分析技术主要分为两大类 一为相对独立的分析方法，即免疫测定法(immunoassays, IAs)，如RIA、 E1JSA、固相免疫传感器(solid phase immunosensor ) 等; 二是将免疫分析技术与常规理化分析技术联用，如利用免疫分析的高选择性作为理 化测定技术中的净化手段，典型的方式为免疫亲合色谱(i面uno affinity chromatography, IAC)。免疫分析技术最突出的优点是操作简单、速度快、分析成本低。以使用微量滴板的 ELISA为例，免疫测定法取样量小，前处理简单，容量大，仪器化程度低，检测极限与GC/MS 或GC/ECD相似，可方便地达到ng/g pg/g级，分析效率则为HPLC或GC的几十倍以上。目前 大部分抗生素己经建立了免疫测定法，如磺胺二甲基嘧啶、氯霉素、沙拉沙星、链霉素、 四环素、莫能菌素等。 Strasser报道一种采用单克隆抗体和半抗原葡萄糖氧化酶间接 竞争法测定乳中多残留的方法，链霉素的检测极限可达到3.2ng/ml、磺胺嘧啶9. 0 ng/ ml、磺胺二甲氧嗪7.0 ng/ ml、邻氯青霉素0.8 ng/ml。以免疫法为基础的主要有e-LACTAMS、 DEVLX-PRESS、 BETASCREEN、 CHARM IIASSAY、 e-STAR、 CHARM-MRL、 PENZYM、 PARALLUX等。但该仪器价格昂贵， 非一般的中小型乳品加工企业和牧场所能承受。丁东新、丁峰等提交申请"一种生鲜牛奶抗生素残留检测盒及其制造方法"(公开号CN 1793922A)，公开了一种微生物法的改良法，将乳酸菌和指示剂按最佳配比灌入盒中，在 检验时无需菌种，也不需要在检验过程中加入指示剂，更不需要试管等玻璃仪器，只需直 接加入待检乳样即可得出检验结果。但上述方法存在的缺点是需要至少2个多小时的保 温，才可以实现，由于没有设置对照，如果时间过短，则会产生很多误差。参考文献叶兴乾，刘东红，陈健初牛奶抗生素残留快速检测技术进展及应用现状，农业工程学报，2005， 21 (4) : 181 — 185 邓斌，邓春来.牛奶中抗生素残留及其检测方法研究进展.饲料广角.2002,24:19-22李淑坚.TTC法测定牛乳中残留的抗生素.兽药与饲料添加剂,2001，6(4),17-17
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种简便、快速且检验结果准确的乳品中是否含有 发酵抑制物的快速检验方法。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种乳品中是否含有发酵抑制物的快速检验方法，包括以下步骤1) 、将液态的待测乳品设置成相同规格的2份，l份为对照组，另l份为检验组；在 对照组和检验组内分别加入相同数量的液态发酵剂均匀混合，液态发酵剂与对照组中待测 乳品的体积比为1.4~1.6: 10;2) 、在对照组中加入作为指示剂的试剂I并均匀混合；然后用滴定的方式加入试剂II 并均匀混合，使对照组成淡红色，记录滴定所需的量(v)，试剂II为碱溶液；3) 、将检验组在42 48'C的温度下培养10 15分钟，然后加入与步骤2)相同数量 的试剂I和试剂II并均匀混合；4) 、获得检验结果如果步骤3)所得物呈乳白色，则说明待测乳品中没有发酵抑制 物质；如果步骤3)所得物呈现淡红色，则说明待测乳品中含有发酵抑制物质。作为本专利技术的乳品中是否含有发酵抑制物的快速检验方法的改进液态发酵剂为由保 加利亚乳杆菌与嗜热链球菌组成的菌种液，具体制作方法如下取1L新鲜无残留奶，先在 98 10(TC中巴氏杀菌，接着冷却到44'C;取0.1 0.5克纯的冷冻干燥活性菌种，先溶解于 200ml的新鲜无残留奶中，再混合于上述杀菌冷却后的1L奶中，于44'C下培养3 5小时(此 时乳会凝固，酸度达到70 75T左右)，冷冻干燥活性菌种中保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌 的重量比为1:05 2;最后冷却到4 6'C，保存于冰箱中，即为待用的液态发酵剂。作为本专利技术的乳品中是否含有发酵抑制物的快速检验方法的进一步改进试剂I为酚 酞指示剂，试剂II为NaOH溶液，步骤l)中待测乳品的温度为19 2rC。作为本专利技术的乳品中是否含有发酵抑制物的快速检验方法的进一步改进当待测乳品 为牛奶时，其酸度为16 22T;步骤3)中的培养时间为10分钟。当待测乳品为羊奶时， 其酸度为23 24T;步骤3)中的培养时间为15分钟。作为本专利技术的乳品中是否含有发酵抑制物的快速检验方法的进一步改进步骤3)中 的培养温度为44°C。在本专利技术的检验方法中，步骤2)中试剂I的用量为2-3滴，步骤l)中所使用的液态发 酵剂也可以通过市购获得。采用本专利技术的检验方法，如果样品中含有抗生素或其它发酵抑制物质，由于其酸度没 有任何下降，在NaOH测定下在酚酞指示剂的存在时，则样品呈淡红色；如果没有抗生素 或其它发酵抑制物质，则样品的酸度会少量下降，同样的碱中和样品时，酸碱中和的结果 会使样品呈酸性，在酚酞指示剂存在时样品呈乳白色。本专利技术的检验方法由于设置了对照样品，并且使保温发酵后的检验样品使用与对照样品相同的碱性溶液(例如为NaOH溶液)，因此可以保证测定结果的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乳品中是否含有发酵抑制物的快速检验方法，其特征是包括以下步骤：１）、将液态的待测乳品设置成相同规格的２份，１份为对照组，另１份为检验组；在对照组和检验组内分别加入相同数量的液态发酵剂均匀混合，所述液态发酵剂与对照组中待测乳品的体积比为１．４～１．６∶１０；２）、在对照组中加入作为指示剂的试剂Ⅰ并均匀混合；然后用滴定的方式加入试剂Ⅱ并均匀混合，使对照组成淡红色，记录滴定所需的量，所述试剂Ⅱ为碱溶液；３）、将检验组在４２～４８℃的温度下培养１０～１５分钟，然后加入与步骤２）相同数量的试剂Ⅰ和试剂Ⅱ并均匀混合；４）、获得检验结果：如果步骤３）所得物呈乳白色，则说明待测乳品中没有发酵抑制物质；如果步骤３）所得物呈现淡红色，则说明待测乳品中含有发酵抑制物质。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：叶兴乾，刘东红，陈健初，方忠祥，吴丹，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]