本发明专利技术提供了用于检测多巴胺能神经元增殖祖细胞的探针、引物和抗体。本发明专利技术还提供了用于检测或选择多巴胺能神经元增殖祖细胞的多核苷酸探针和多核苷酸引物，所述探针和引物能与由Ｍｓｘ１基因或Ｍｓｘ２基因的核苷酸序列组成的多核苷酸或其互补序列杂交，本发明专利技术还提供了用于检测或选择多巴胺能神经元增殖祖细胞的抗Ｍｓｘ１蛋白或Ｍｓｘ２蛋白或其部分的抗体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及Msxl基因和Msx2基因，该基因是多巴胺能神经元增殖祖 纟田月包(dopaminergic neuron proliferative progenitor cell)的才示i己物。更具体;t也， 本专利技术涉及^r测多巴胺能神经元增殖祖细胞的手段，检测该细胞的方法和 检测该细胞的试剂盒。
技术介绍
多巴胺系统是很重要的系统，它参与对哺乳动物脑而言至关重要的运 动控制、激素分泌控制、情感控制等。因此，多巴胺能神经传递异常会导 致多种神经系统疾病。例如，帕金森氏病是锥体外系统的神经变性疾病， 它是由中脑黑质中多巴胺能神经元的特异性变性引起的(HARRISON， S PRINCIPLES OF INTERNAL MEDICINE Vol. 2 23rd ed., Isselbacher et al. edited by McGraw-Hill Inc., NY (1994) pp. 2275-7)。治疗帕金森氏病的方法，即口服L-DOPA (3,4-二羟基-苯丙氨酸)的方法 主要用于补偿多巴胺产量的降低，但已知其疗效并不持久。因此，为了补偿多巴胺能神经元的损失，最近人们尝试了一种治疗方 法，即移植6-9周龄流产胎儿的中脑腹侧区域，该区域内含有多巴胺能神经 元前体(美国专利5690927; Spencer et al. (1992) N. Engl. J. Med. 327:1541-8; Freed et al. (1992) N. Engl. J. Med. 327:1549-55; Widner et al. (1992) N, Engl. J. Med, 327:1556-63; Kordower et al. (1995) N. Engl. J. Med. 332:1118-24; Defer et al. (1996) Brain 119:41-50; and Lopez-Lozano et al. (1997) Transp. Proc. 29:977-80)。然而，目前除了细胞供应和伦理道德问题外(Rosenstain (1995) Exp. Neuroi.33:106; Turner et al. (1993) Neurosurg. 33:1031-7)，多种其它问题 也已显现，例如，传染性污染的风险、免疫移植物排斥(L叩ez-Lozano et al. (1997) Transp. Proc. 29:977-80 and Widner and Brudin(1988) Brain Res. Rev. 13:287-324)、因胎儿组织主要依赖于脂质代谢而不是糖酵解所造成的低存 活率(Rosenstein (1995) Exp. Neurol. 33:106)等。例如，为了解决伦理道德或供应短缺问题，已被建议的方法有使用得自猪的皮质、紋状体和中脑细胞(例如日本专利特许公开号10-508487、 10-508488和10-509034)等。然而，在此方法中，需要经过复杂的程序来修 饰细胞表面抗原(MHCI类抗原)以抑制排斥。例如，为了解决移植物排斥问特许公开号11-509170、 11-501818; and Selawly and Cameron (1993) Cell Transplant 2:123-9)。移植细胞可能来自MHC匹配的亲属、他人的骨髓、骨 髓库、脐血库等。然而，如果可使用患者自身的细胞，无需额外的程序和 麻烦即可解决排斥问题。因此，得自非-神经细胞，如胚胎-干细胞(ES细胞)和骨髓基质细胞的多 巴胺能神经元体外分化系统有望被用作移植材料，以替代得自流产胎儿的 细胞。实际上，有报道表明通过将ES细胞移植到大鼠帕金森氏病模型的 损害条紋中，形成了功能性的多巴胺能神经元(Kim et al. (2002) Nature 418:50-56)。据认为，得自ES细胞或患者自身神经干细胞的再生药物的重 要性将会增加。另一方面，治疗神经组织损伤时，需要重构脑功能，而为了与周围的 细胞形成适当的联接(网络形成)，需要移植的不是成熟细胞，而是可在体内 分化成神经元的祖细胞。然而，在移植神经元祖细胞时，除了存在上述与 供应有关的问题，还存在一个问题，即祖细胞可分化成不均一的细胞群体。 例如，在治疗帕金森氏病时，需要在含有儿茶酚胺神经元中选择性地移植 多巴胺能神经元。以前，有人建议将下述细胞用作移植细胞以治疗帕金森 氏病紋状体(Lindvall et al. (1989) Arch. Neurol. 46:615-31 and Widner et al. (1992) N. Engl. J. Med. 327:1556-63)，得自人胚胎神经的无限增殖化细胞系 (曰本专利特许公开号8-509215, 11-506930和2002-522070), NT2Z细胞有 丝分裂后的人神经元(日本专利特许公开号9-5050554)，神经元原基细胞(曰 本专利特许公开号11-509729)，被外源基因转染以产生儿茶酚胺，如多巴胺 的细胞，骨髓基质细胞(日本专利特许公开号2002-504503和2002-513545), 基因被修饰的ES细胞(Kimetal. (2002) Nature 418:50-56)，等等。然而，这 些细胞无一仅含有多巴胺能神经元或能分化成多巴胺能神经元的细胞。有人建议了一种从未分化的细胞群体中选择性浓缩或分离多巴胺能神 经元的方法在细胞群体的每个细胞中导入表达焚光蛋白的报道基因，所述基因处于在多巴胺能神经元中表达的基因，如酪氨酸羟化酶(TH)基因的 启动子/增强子的控制之下，分离发出荧光的细胞，籍此用肉眼观察活的多巴胺能神经元，以进行浓缩、分离或鉴定(日本专利特许公开号2002-51775)。 然而，该方法需要复杂的导入外源基因的步骤，此外，当用于基因治疗时， 报道基因的存在会导致毒性和免疫原性的问题。如上所述，目前，移植治疗帕金森氏病的最大问题之一是多巴胺能 神经元祖细胞无论是得自流产胎儿的中脑腹侧区域，还是经诱导后分化的， 皆为多种细胞的混合物。考虑到神经网络形成的安全性，仅分离和使用所 需的细胞种类才是合乎需要的。另外，考虑到存活力或在移植了细胞的脑 中正确形成网络的能力，可以说分离和移植较早的增殖祖细胞会获得合意 的治疗效果。以前，有人报道过在多巴胺能神经元增殖祖细胞中选择性表达的基因 Lrp4(WO 2004/065599)。另外， 一些多巴胺能神经元前体的标记物也已被报 道(WO 2004/038018和WO 2004/052190)。其中，关于Lmxla,已证实它表 达于人和小鼠的多巴胺能神经元增殖祖细胞，有丝分裂后的多巴胺能神经 元前体(postmitotic dopaminergic neuron precursor cell)和多巴胺能神经元 (WO 2005/052190)。Msx基因是参与器官形成的同源异型框基因，已知Msxl、Msx2和Msx3 存在于小鼠中，Msxl和Msx2存在于人中(Davidson, D.(1995). Trends Genet 11:405-411)。以前曾有人报道Msxl在多种脑细胞中表达(Ramo本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测或选择多巴胺能神经元增殖祖细胞的多核苷酸探针或多核苷酸引物，所述探针或引物能与由Ｍｓｘ１基因或Ｍｓｘ２基因的核苷酸序列或其互补序列组成的多核苷酸杂交。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：尾野雄一，中川康子，中谷智哉，坂本佳正，
申请(专利权)人：卫材RD管理有限公司，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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