分泌抗人天冬酰胺羟化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞制备工艺制造技术

一种分泌抗人天冬酰胺羟化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞制备工艺，其取含人天冬酰胺羟化酶ＨＡＡＨ编码基因的重组真核表达质粒ＤＮＡ，注射至小白鼠的骨骼肌进行ＤＮＡ免疫，１～４周后，进行人天冬酰胺羟化酶ＨＡＡＨ重组蛋白免疫，２～５天后，取免疫小白鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合。进行抗体检测，对抗体检测呈阳性的细胞进行克隆化，至获得可分泌抗人天冬酰胺羟化酶单克隆的杂交瘤细胞株。本发明专利技术解决了背景技术中特异性差、免疫周期长以及效率低的技术问题。本发明专利技术免疫原性质明确，纯度高，非特异反应少，抗原用量少，全程免疫仅需６～８周。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种分泌抗人天冬酰胺羟化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞制备工艺，包括以下实现步骤：　　　　（ｉ）取含人天冬酰胺羟化酶ＨＡＡＨ编码基因的重组真核表达质粒ＤＮＡ；　　　　（ｉｉ）进行ＤＮＡ免疫：将含人天冬酰胺羟化酶ＨＡＡＨ编码基因的重组真核表达质粒ＤＮＡ注射至小白鼠的骨骼肌，注射剂量为１０～２００μｇ／５０～２００μｌ／只；　　　　（ｉｉｉ）进行人天冬酰胺羟化酶ＨＡＡＨ重组蛋白免疫：进行ＤＮＡ免疫后１～４周，用人天冬酰胺羟化酶ＨＡＡＨ重组蛋白免疫小白鼠，免疫剂量为１０～１０００μｇ／１０～１０００μｇ／只；　　　　（ｉｖ）进行细胞融合：人天冬酰胺羟化酶ＨＡＡＨ重组蛋白免疫后２～５天，取免疫小白鼠的脾细胞与免疫或非免疫小白鼠的骨髓瘤细胞进行细胞融合；　　　　（ｖ）进行抗体检测：以重组表达的人天冬酰胺羟化酶为检测抗原，用免疫化学法对细胞融合后的细胞培养上清进行抗体检测；　　　　（ｖｉ）对抗体检测呈阳性的细胞进行克隆化，至获得可分泌抗人天冬酰胺羟化酶单克隆的杂交瘤细胞株。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：薛小平，黄庆生，张明杰，
申请(专利权)人：陕西北美基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]