一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法技术

本发明专利技术公开了一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，包括提取充质干细胞、培育充质干细胞、制作干细胞外泌体冻干粉、皮肤紧致功效实验、数据统计分析。在提取充质干细胞时，利用输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，经过滤网过滤留下所需的MSC液体，流出到培养基上，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基，避免了运输过程中的感染等意外，同时也避免了互相感染的问题；充质干细胞培养的氧浓度为2‑3%，温度为37C・二氧化碳浓度为5%，在低氧浓度下，促进成体干细胞的扩増，缩短细胞倍増的周期。

【技术实现步骤摘要】
一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法
本专利技术涉及一种干细胞外泌体研究方法，具体为一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，属于干细胞应用

技术介绍
外泌体是由胞吐作用释放到细胞外的纳米级外脂质双层囊泡，可存在于多种类型的细胞外体液中，如血液、尿液、羊水、唾液、脑脊液甚至母乳，研究发现，外泌体中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞，从而改变其它细胞的功能，如：外泌体参与神经元通信、抗原呈递、免疫反应、器官发育和生殖等基本的生理过程的调控，还参与调控癌症进展、心血管疾病、炎症、神经退行性疾病、病毒感染和朊病毒传播等病理过程。间充质干细胞(mesenchymalstemcell，MSC)是干细胞家族的重要成员，是中胚层来源的非造血细胞。其来源丰富，可由胎盘、乳牙、脂肪、骨髓、骨小架、骨膜、骨骼肌、皮肤、外周血和脐带等组织器官中分离得到。MSCs可分泌多种生长因子(如表皮生长因子、血管内皮生长因子、胶原蛋白和纤维粘连蛋白等)及炎性因子(干扰素γ、白细胞介素9及肿瘤坏死因子α等)，在抑制皮肤老化、紧致肌肤、辅助脂肪移植、促进毛发再生等诸多抗衰老方面均有较显著的效果。近年来，干细胞在紧致皮肤的化妆品中的应用也成为了研究的热点，但是，市场上美容行业中有些所谓的干细胞针剂，大多数的活性成分单一，且对保持皮肤紧致的效果并不是很好，目前市场上存在很多的保持皮肤紧致的产品，如茉莉精油，迷迭香精油等，市场广阔，但是很多的产品在长时间不使用时会造成反弹。专利技术内容本专利技术的目的就在于为了解决上述问题而提供一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法。本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，包括以下步骤：步骤一、提取充质干细胞，利用血液中提取的成体充质干细胞进行无血清培养；步骤二、培育充质干细胞，将提取的充质干细胞放入无血清培养基中培养，并在培养基中加入血清普代物，L-谷氮酸酰胺，脱氧核糖核昔，FGF和TGF-B；其中，无血清培养基中血清曾代物的体积分数为15-20％，L-谷気酸酰胺的浓度为280-300ng/mol，脱氧核糖核昔的浓度为l0-20ng/mol，成纤维细胞生长因子的浓度为15-25ng/mol，转化生长因子・B的浓度为15-25ng/mol，维生素B5的浓度为3-5ng/mol，维生素B12的浓度为0.02ng/mol。步骤三、制作干细胞外泌体冻干粉，收集培养基中的上清液，将迷迭香，肉桂，无光敏葡萄柚捣碎并用茉莉花浸泡过的无菌水浸泡，然后将其液体与上清液和维生素C和维生素E混合，釆用0.2-0.22md的无菌过滤器对收集得到的混合液进行过滤，然后经过浓缩、冷冻干燥后，制得干细胞外泌体冻干粉紧致制剂；步骤四、皮肤紧致功效实验，进行小鼠皮肤紧致功效的实验，将外泌体冻干粉紧致制剂敷在表皮层或采用微针、滚针或水光针中任一种方式将外泌体导入表皮深层和真皮层；其中，在进行小鼠皮肤紧致功效实验时，同时进行空白实验组进行实验。步骤五、数据统计分析，分别统计皮肤紧致功效实验组与空白实验组的小鼠皮肤紧致变化程度以及时间，并进行对比分析。作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤一中，在提取充质干细胞时，利用输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，经过滤网过滤留下所需的MSC液体，流出到培养基上，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基。作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤二中，充质干细胞培养的氧浓度为2-3%，温度为37C・二氧化碳浓度为5%。作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤二中，所使用的无血清培养基以alpha-MEM培养基为基础培养基，添加血清替代物、L-谷氨酸酰胺、核糖核昔、脱氧核糖核昔、成纤維细胞生长因子和转化生长因子-8。作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤三中，迷迭香，肉桂，无光敏葡萄柚捣碎充分与茉莉花浸泡的无菌水和维生素接触，其混合液体温度为37℃-40℃，并在高压的环境下浸泡时长为12小时且维生素C的浓度为30-50ng/mol，维生素E的浓度为0.3-0.5ng/mol。本专利技术的有益效果是：该采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法设计合理：1、在提取充质干细胞时，利用输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，经过滤网过滤留下所需的MSC液体，流出到培养基上，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基，避免了运输过程中的感染等意外，同时也避免了互相感染的问题；2、充质干细胞培养的氧浓度为2-3%，温度为37C・二氧化碳浓度为5%，在低氧浓度下，促进成体干细胞的扩増，缩短细胞倍増的周期，刺激成体干细胞中生长因子的基因表达，促进生长因子的分泌；3、所使用的无血清培养基以alpha-MEM培养基为基础培养基，添加血清替代物、L-谷氨酸酰胺、核糖核昔、脱氧核糖核昔、成纤維细胞生长因子和转化生长因子-8，安全性能高，细胞培养过程中不易被污染，能够大大缩短成体干细胞的生长周期，提高成体干细胞的增殖速度，促进成体干细胞分泌大量的生长因子，得到的成体干细胞冻干粉纯度高，生物活性高，能够有效修复受损的细胞；4、制备出的成体干细胞冻干粉中含有表皮生长因子、成纤维细胞生长因子等多肽类物质，能够修复受损的细胞，促进皮肤细胞的生长和増殖，消除皮肤皱纹，收缩毛孔，改善皮肤的状态。附图说明图1为本专利技术流程结构示意图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1，一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，包括以下步骤：步骤一、提取充质干细胞，利用血液中提取的成体充质干细胞进行无血清培养；步骤二、培育充质干细胞，将提取的充质干细胞放入无血清培养基中培养，并在培养基中加入血清普代物，L-谷氮酸酰胺，脱氧核糖核昔，FGF和TGF-B；其中，无血清培养基中血清曾代物的体积分数为15-20％，L-谷気酸酰胺的浓度为280-300ng/mol，脱氧核糖核昔的浓度为l0-20ng/mol，成纤维细胞生长因子的浓度为15-25ng/mol，转化生长因子・B的浓度为15-25ng/mol，维生素B5的浓度为3-5ng/mol，维生素B12的浓度为0.02ng/mol。步骤三、制作干细胞外泌体冻干粉，收集培养基中的上清液，将迷迭香，肉桂，无光敏葡萄柚捣碎并用茉莉花浸泡过的无菌水浸泡，然后将其液体与上清液和维生素C和维生素E混合，釆用0.2-0.22md的无菌过滤器对收集得到的混合液进行过滤，然后经过浓缩、冷冻干燥后，制得干细胞外泌体冻干粉紧致制剂；步骤四、皮肤紧致功效实验，进行小鼠皮肤紧致功效的实验，将外泌体冻干粉紧致制剂敷在表皮层或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤一、提取充质干细胞，利用血液中提取的成体充质干细胞进行无血清培养；/n步骤二、培育充质干细胞，将提取的充质干细胞放入无血清培养基中培养，并在培养基中加入血清普代物，L-谷氮酸酰胺，脱氧核糖核昔，FGF和TGF-B；/n其中，无血清培养基中血清曾代物的体积分数为15-20％，L-谷気酸酰胺的浓度为280-300ng/mol，脱氧核糖核昔的浓度为l0-20ng/mol，成纤维细胞生长因子的浓度为15-25ng/mol，转化生长因子・B的浓度为15-25ng/mol，维生素B5的浓度为3-5ng/mol，维生素B12的浓度为0.02ng/mol；/n步骤三、制作干细胞外泌体冻干粉，收集培养基中的上清液，将迷迭香，肉桂，无光敏葡萄柚捣碎并用茉莉花浸泡过的无菌水浸泡，然后将其液体与上清液和维生素C和维生素E混合，釆用0.2-0. 22md的无菌过滤器对收集得到的混合液进行过滤，然后经过浓缩、冷冻干燥后，制得干细胞外泌体冻干粉紧致制剂；/n步骤四、皮肤紧致功效实验，进行小鼠皮肤紧致功效的实验，将外泌体冻干粉紧致制剂敷在表皮层或采用微针、滚针或水光针中任一种方式将外泌体导入表皮深层和真皮层；/n其中，在进行小鼠皮肤紧致功效实验时，同时进行空白实验组进行实验；/n步骤五、数据统计分析，分别统计皮肤紧致功效实验组与空白实验组的小鼠皮肤紧致变化程度以及时间，并进行对比分析。/n...

【技术特征摘要】
1.一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、提取充质干细胞，利用血液中提取的成体充质干细胞进行无血清培养；
步骤二、培育充质干细胞，将提取的充质干细胞放入无血清培养基中培养，并在培养基中加入血清普代物，L-谷氮酸酰胺，脱氧核糖核昔，FGF和TGF-B；
其中，无血清培养基中血清曾代物的体积分数为15-20％，L-谷気酸酰胺的浓度为280-300ng/mol，脱氧核糖核昔的浓度为l0-20ng/mol，成纤维细胞生长因子的浓度为15-25ng/mol，转化生长因子・B的浓度为15-25ng/mol，维生素B5的浓度为3-5ng/mol，维生素B12的浓度为0.02ng/mol；
步骤三、制作干细胞外泌体冻干粉，收集培养基中的上清液，将迷迭香，肉桂，无光敏葡萄柚捣碎并用茉莉花浸泡过的无菌水浸泡，然后将其液体与上清液和维生素C和维生素E混合，釆用0.2-0.22md的无菌过滤器对收集得到的混合液进行过滤，然后经过浓缩、冷冻干燥后，制得干细胞外泌体冻干粉紧致制剂；
步骤四、皮肤紧致功效实验，进行小鼠皮肤紧致功效的实验，将外泌体冻干粉紧致制剂敷在表皮层或采用微针、滚针或水光针中任一种方式将外泌体导入表皮深层和真皮层；
其中，在进行小鼠皮肤紧致功效实验时，同时进行空白实验组进行实验；
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【专利技术属性】
技术研发人员：朱学义，韦丹，
申请(专利权)人：河南省遗传资源细胞库有限公司，河南省组织细胞库有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41