本发明专利技术涉及一种检测乳中成分的方法，特别是一种检测乳免疫球蛋白（ＩｇＧ）含量的检测方法。属于检测技术领域。本发明专利技术毛细管电泳仪检测乳免疫球蛋白（ＩｇＧ）含量的检测方法，包括样品前处理、上样检测，还包括校准读数，编辑报告等步骤。本发明专利技术是样品在毛细管电泳仪上跑电泳，从而毛细管色谱系统检测出样品的吸光值，以图谱的形式表达出来，从而能准确检测出乳免疫球蛋白（ＩｇＧ）的含量，为产品研发、质量控制和分析成分提供技术支持。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种分析检测乳中蛋白的方法，特别是一种检测牛乳 中免疫球蛋白(IgG)含量的方法。属于检测
技术介绍
牛乳是日常生活中不可或缺的营养品，它含有丰富的营养物质， 如酪蛋白、乳清蛋白、补体、脂肪和免疫球蛋白等。牛乳中含有的免 疫球蛋白主要为IgG, IgA和IgM。其中，IgG含量最高，约为免疫球 蛋白总量的80%。母牛分娩后第一天内分泌的初乳中免疫球蛋白含 量最高，研究表明，其IgG的平均浓度可达59~80mg/ml。然而， 第5—7天的初乳中IgG浓度已接近常乳水平，约为0. 7~1. Omg/ ml。免疫球蛋白具有多种生物活性功能，主要是识别和抵抗入侵的细 菌和病毒等病原体，在增强机体的免疫能力、防止细菌和病毒入侵、 活化补体、中和毒素、杀死肿瘤细胞等方面发挥着重要作用。目前，国内尚未有乳免疫球蛋白(IgG)含量;f企测方法的国家标准 和行业标准。检测乳免疫球蛋白(IgG)的方法有血清中和实验、免疫 荧光抗体实验、琼脂扩散实验、补体结合实验、电镜观察、ELISA、 PCR等方法。由于考虑到人力、物力和效率，国内科研院所常用乳免疫球蛋白(IgG)的4企测方法是ELISA。 ELISA法灵敏度高，最小检测限 低，适合于乳免疫球蛋白(IgG)的检测，但是其检测时间较长，不适 于适用于实际应用当中。鉴于该方法的优缺点，本专利专利技术了将使用 毛细管电泳仪快速检测乳免疫球蛋白(IgG)含量的方法。毛细管电泳 仪是一类包括电泳、色谱及其交叉内容的液相微分离技术。它能快速 精确检测出牛奶中的掺假成分、抗生素、添加的功能性因子、乳清蛋 白、免疫球蛋白、酶、糖、添加剂和其他小分子的含量。该方法操作 简便、准确，检测到出结果时间仅为lh左右。目前，毛细管电泳4义的应用前景非常广泛。许多国际官方权威机 构，如FDA、 U. S. P、 CBER、 CDER等均已认可毛细管电泳方法。权威 机构欧洲药典中认可勒沃卡-贝斯庭盐酸盐中杂质的CE测定；欧洲药 典中还认可促红细胞生成素(EP0)的毛细管电泳仪测定等。毛细管 电泳仪已成为化学、农业、医学、生物工程、药学等众多领域的一个 常规科研工具。目前，国内毛细管电泳仪检测技术逐渐应用到乳品领域里，如产 品开发和控制质量问题等领域中。但毛细管电泳技术尚未开发检测乳 免疫球蛋白(IgG)的方法。本专利技术成功弥补了乳品领域中的缺点，能 准确测定乳免疫球蛋白(IgG)的含量，从而有利于产品开发和质量控 制当中。
技术实现思路
本专利技术的目的 一种牛乳中乳免疫球蛋白(IgG)含量的检测方法。本专利技术的一种检测乳免疫球蛋白(IgG)含量的检测方法，其中， 包括如下步骤1)将乳免疫球蛋白(IgG)溶于样品緩冲液，制备得到 多个不同含量乳免疫球蛋白(IgG)的标准溶液，并对多个溶液分别检 测后得到乳免疫球蛋白(IgG)含量与检测结果之间的标准曲线；2 )对 样品进行检测，并得到检测结果；3)将所述的4企测结果与所述的标 准曲线比对，得到样品中乳免疫球蛋白(IgG)的含量；其中，检测样 品的设备是高压毛细管电泳分析仪。上述步骤l)中标准曲线的制定的方法优选如下配制乳免疫球 蛋白(IgG)标准溶液，在样品緩沖液中溶解乳免疫球蛋白(IgG)标准物 质配制成分别为lmg/ml 、 0. 5mg/ml 、 0. 25mg/ml 、 0. lmg/ml 、 0. 05mg/ml,制备得到标准溶液，摇匀后使用高压毛细管电泳分析， 得到检测结果，即得到乳免疫球蛋白(IgG)含量与平均校正因子的关 系曲线；其中，所述的检测结果按照如下方法计算按峰面积计算出 平均校正因子。上述的标准溶液或待;险测样品的处理方法为4巴标准溶液或待4企 测样品装入离心管中，在2000-6000r/min离心条件下离心5-15min, 将样品与緩冲液按照1: 4-20的比例加入冻存管(或其他容器)，并 摇匀，精确提取10-200ul处理样品加入样品管中，；改置于超声波清 洗机1 ~ 10m i n, ^吏用毛细管电泳仪测定。上述的样品緩冲液为能够使蛋白质*的緩沖液，优选如下緩 冲液160 m mol/L三曱基氨基曱烷緩冲液中加40 m mol/L 3-吗啉代丙烷石黄酸，60mmol/L乙二胺四乙酸二钠，7 mol/L尿素，处理样品时 添加5ul/ml的巯基乙醇，甲基羟乙基纤维素0. 05%, pH值为8. 5 上述的摇匀步骤采用旋涡混合器。上述高压毛细管电泳分析的使用检测参数如下毛细管电泳检测 检测的温度控制在15 40。C之间，毛细管柱直径25~75um、长度 20~ 600 mm, DAD (或紫外光)检测器，压力进样(或电动进样)，压 力为0 lpsi，进样时间为ls 20s,分离温度为15~40°C,工作电 压为10~ 30 kV。上述的毛细管柱为石英毛细管柱，包括涂层和未涂层。 上述的高压毛细管电泳分析的检测时电泳模式为区带电泳，其电 泳緩沖液为pH2. 0~9. 0,主要成分为无机盐緩沖液，优选磷酸盐、 硼酸或柠檬酸。上述的检测结果的处理方法如下检测结果为样品分离的图镨， 运用毛细管电泳仪所带的分析软件，积分各峰的面积，计算出试样浓 度，再乘稀释倍数，即得实际浓度。常乳里乳免疫球蛋白(IgG)的含量20mg ~ 350mg/L，其分子量为 12000。毛细管电泳^f义检测最低浓度能达到l(T5-10—8mol/L。所以毛 细管电泳仪能检测出其含量。使用毛细管电泳仪开发检测乳免疫球蛋 白(IgG)含量的方法包括样品性质的了解、分离模式、建立緩沖体系、 优化緩冲体系和换分离模式等步骤。开发出的方法能应用于产品开 发、质量控制和分析检测领域中。本专利技术主要使用毛细管电泳仪能准确测定乳免疫球蛋白(IgG)的含量，从而应用于产品开发、质量控制和分析检测领域中。本专利技术在在传统的电泳和色谱的原理的基础上，使用高压毛细管电泳仪检测乳免疫球蛋白(IgG)的含量，达到准确检测出乳制品中乳 免疫球蛋白(IgG)的含量。通过试验，最终确定检测方法的最佳参数 条件。具体如下检测乳免疫球蛋白(IgG)含量的检测方法，包括样品前处理、上 样检测，还包括校准读数等步骤。毛细管电泳检测检测的温度控制 在15 ~ 40。C之间，毛细管柱直径50 ~ 75 u m、长度20 ~ 600隱的石 英毛细管柱，DAD (或紫外光)检测器，压力进样，压力为0.5psi, 进样时间为5s 20s,分离温度为20~40°C，工作电压为15-25 kV。 校准曲线的制定配制乳免疫球蛋白(IgG)标准溶液浓度分别为 lmg/ml、 Q. 5mg/ml、 0.25mg/ml、 0. lmg/ml、 0. 051mg/ml。摇匀后 使用高压毛细管电泳分析，按峰高计算出平均校正因子。 检测步骤为把原料奶样品装入15ml的离心管中，在5000r/min离心条件下 离心5min。准确提取样品100ul置入冻存管。提取400ul样品緩冲 液加入冻存管(或其他容器)，并使用漩涡混合器混匀。精确提取 40ul处理样品加入样品管中，放置于超声波清洗机3min,使用毛细 管电泳仪测定。样品定量读数:才艮据样品分离的图谱,运用毛细管电泳仪所带的 分析软件，积分各峰高(或峰面积)，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测乳免疫球蛋白（ＩｇＧ）含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：１）将乳免疫球蛋白（ＩｇＧ）溶于样品缓冲液，制备得到多个不同含量乳免疫球蛋白（ＩｇＧ）的标准溶液，并对多个溶液分别检测后得到乳免疫球蛋白（ＩｇＧ）含量与检测结果之间的标准曲线；２）对样品进行检测，并得到检测结果；３）将所述的检测结果与所述的标准曲线比对，得到样品中乳免疫球蛋白（ＩｇＧ）的含量；其中，检测样品的设备是高压毛细管电泳分析仪。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙国庆，康小红，胡新宇，刘卫星，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：15[中国|内蒙]
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