高密度脂蛋白测定装置及分离方法制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种高密度脂蛋白测定装置及分离方法，该方法是从生物学的液体中分离非－ＨＤＬ脂蛋白的方法，该方法可以回避以往技术的缺点，更迅速地且不需要复杂化的附加装置就可进行，可以更迅速、更简单地进行ＨＤＬ胆固醇的测定。从通过沉淀剂生成沉淀的ＬＤＬ脂蛋白、ＶＬＤＬ脂蛋白、乳糜微粒中，分离未生成沉淀的ＨＤＬ脂蛋白，然后，通过利用过滤器过滤法代替以往的离心分离法，除去生成的沉淀物，来分离血清中的ＨＤＬ脂蛋白。作为过滤器优选为亲水性纤维素混合酯，采用孔径为０．８μｍ以下的过滤器。通过采用过滤器过滤法，可以简化以往的离心分离法的烦杂操作、缩短原来较长的所需时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分离器具、特别是分离液体中特定成分的分离器具，更详细地，涉及分离血液等体液中的高密度脂蛋白(以下，简称为HDL)部分中所含有 的特定成分，特别是分离脂质成分的分离器具，以及涉及在其测定中使用的高 密度脂蛋白测定装置和HDL脂蛋白分离方法。
技术介绍
例如，在特开平3-99268号公报中(专利文献1)中指示出HDL脂蛋白 分离方法。血液中的HDL胆固醇是冠状动脉硬化症的危险预防因子，因此，在很多 机构中，作为成人病预防检查的一环对其进行测定。对用于评价涉及冠状动脉性心疾病的程度的危险性的参数来说，血液、血 浆及血清中的全胆固醇是已知的最佳参数之一 。但是，全胆固醇的浓度是用于各个危险性评价的唯一的被限定的值。一方面，低密度的脂蛋白(低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein )=LDL ) 中的胆固醇测定比另一方面的高密度的脂蛋白(高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein) =HDL )中的胆固醇测定更有意义。根据免疫学和临床学的研究，了解到在LDL胆固醇和冠状动脉性心疾病 之间有正的相关性，在HDL胆固醇和冠状动脉性心疾病之间有负的相关性。这样，由于相关性密切类似，因此，HDL和全胆固醇的测定对于危险性的评价是充分的。该方法现在在诊断中被优选使用。对于HDL胆固醇，将HDL脂蛋白从其他脂蛋白中分离后，利用酶法等测 定上清(上清液)中的HDL胆固醇。为了独立测定HDL胆固醇，必须分离存在的其他的脂蛋白类(LDL、 VLDL、乳糜微粒)。分离方法包括基于不同的表面电荷(以纸或琼脂糖作为载体的电泳)或载脂蛋白的差异(使用特异性抗体的免疫化学方法)的方法。此外，还有使用超离心力的方法、通过2价金属离子和聚阴离子使其他的脂蛋白沉淀来除去的方法。由于超离心法使用超离心机，使得操作烦杂且需要很多时间，因此，现在 的测定中使用的分离法的主流是沉淀法。作为组合2价的金属离子和聚阴离子的聚阴离子沉淀剂，可以使用肝素-Ca2+、肝素-Mn"、磷钨酸-Mg"、葡聚糖硫酸-Mg"。使用这些聚阴离子沉淀剂的方法大致相同，如下所示。即，向血清中加入上述沉淀剂，放置5~20分钟(根据使用沉淀剂的不同而不同)，充分生成沉淀后，以3000rpm的条件，离心分离10 15分钟。离心分离后，取出上清(HLD部分)，在37。C下通过月旦固醇显色反应或酶电极法来定量。专利文献1:日本特开平3-99268号公报
技术实现思路
但是，正如上述中所述的那样，使用沉淀剂的HDL胆固醇的测定方法， 除了生成沉淀以外还需要离心分离操作，因此，虽然不如超离心法麻烦，但还 是被指出操作烦杂且耗费时间的缺点。即，即使离心分离的净需要时间是IO分钟，如果加上样品的转移、分离 管的准备、取得离心分离的平衡、旋转速度的上升和减速等所必须的时间，则 至少需要20分钟。另外，也可能产生样品的拿错。与上述沉淀法原理完全不同，作为实用化的方法有电泳法。该方法通过电 泳分别分离HDL、 LDL、 VLDL，因此，是对HDL部分的胆固醇进行染色通 过光密度测定法来定量的方法，但电泳和染色需要时间，即使高速化，其测定 速度与沉淀法也无大差别。鉴于上述问题，本专利技术的目的是提供一种分离方法，该方法不具备复杂化 的附加装置，通过简单的结构，就能从生物学的液体中迅速分离非-HDL脂蛋 白。本专利技术的特征在于，使生物学的液体流过分离非-HDL脂蛋白的载体，从 生物学的液体中分离非-HDL脂蛋白。根据本专利技术可以提供一种分离方法，该方法通过简单的结构就能够从生物学的液体中迅速地分离与夂-HDL脂蛋白。 附图说明图1是本专利技术的实施例3所涉及的图，是表示试样容器和过滤器的分离器 具等的图。图2是本专利技术的实施例3所涉及的图，是表示具备工作电极、参比电极的 试样容器等的图。图3是本专利技术的实施例3所涉及的图，是表示高密度脂蛋白测定装置的图。图4是本专利技术的实施例3所涉及的图，是表示具备加压泵的试样容器和过 滤器的分离器具等的图。图5是本专利技术的实施例3所涉及的图，是表示具备具备注射泵的试样容器 和过滤器的分离器具等的图。图6是本专利技术的实施例3所涉及的图，是表示可以使用全血试样的具备工 作电极、参比电极的试样容器等。图7是本专利技术的实施例3所涉及的图，是表示可以使用全血试样的具备加 压泵的试样容器、和过滤器的分离器具等的图。图8是本专利技术的实施例3所涉及的图，是表示可以使用全血试样的具备注 射泵的试样容器、和过滤器的分离器具等的图。符号说明1试样容器，2支撑体，3分离用过滤器，4试样注入容器，5工作电极， 6参比电极，7试剂层，40数据处理部，20测定部，30信号处理部，50电 位差测定装置，60试样注入岡，70加压泵连接阀，80阀支撑体，90微型泵， 100注射泵，110注射器形试样容器，120电极支撑体 具体实施例方式从本专利技术的实施例的概要进行说明。本专利技术的HDL脂蛋白的分离法的特征在于，向血清中添加聚阴离子沉淀 试剂，生成LDL脂蛋白、VLDL脂蛋白、乳糜微粒的沉淀物，通过过滤器除 去生成的沉淀物。另外，采用该分离法的HDL胆固醇的定量测定法的特征在于，以由上述分离法分离的HDL脂蛋白作为对象，通过比色法或酶电极法来进行定量测定。 如上所述，在本专利技术中，从通过沉淀剂生成沉淀的LDL脂蛋白、VLDL 脂蛋白、乳糜《鼓粒中，分离出未生成沉淀的HDL脂蛋白，然后，利用过滤器 过滤法来代替以往的离心分离法来除去生成的沉淀物，分离血清中的HDL脂 蛋白。作为过滤器，优选亲水性纤维素混合酯，使用孔径为0.8)im以下的材料。 通过采用过滤器过滤法，能够简化以往的离心分离法的烦杂操作，缩短以往较 长的必要时间。本专利技术的HDL胆固醇的测定法的基本原理为，为了从LDL脂蛋白、VLDL 脂蛋白、乳糜微粒中分离血清中的HDL脂蛋白，而使用聚阴离子沉淀试验， 用0.8pm以下的亲水性过滤器过滤生成的沉淀物，对于得到的HDL脂蛋白部 分通过比色法或酶电极法进行定量测定。肝素-Ca沉淀剂、磷钨酸-Mg沉淀剂、葡聚糖硫酸Mg-磷钨酸Mg沉淀剂、 等电点分离-磷钨酸沉淀剂这4种沉淀剂，由于HDL胆固醇测定的精度、正确 性都很优异，因此可以被广泛用作聚阴离子沉淀剂，在本专利技术中，可以使用这 4种中的任一种沉淀剂。通过使沉淀剂的溶液、乳浊液或悬浊液渗入过滤器，接着，进行干燥，将 沉淀剂应用于过滤器。在该方法中，可以应用pH緩冲剂或表面活性剂等添加 剂。可以举出通常市售的过滤器制品等。作为过滤器的材料，可以举出纤维素、 尼龙、聚^5风等，优选纤维素，特别优选醋酸纤维素和硝酸纤维素的混合酯。过滤器的优选规格参数为，孔径0.8|tim以下、膜厚50 400prn、膜重量 3~10mg/cm2、流量(差压0,07Mpa)水90 150ml/分/cm2。过滤器中，除了分离试剂，根据需要，可以添加表面活性剂、緩冲剂等。 在进行过滤器的分离过滤的层中，滴下试样溶液时，通过分离试剂，使不供于 测定的脂蛋白成分生成沉淀，被捕捉于构成层内。测定的HDL成分不生成沉 淀，向下层渗透。特别是表面活性剂，能够有效地用于调节将液体试样应用于本专利技术的元件 时的渗透速度等。作为可以使用的表面活性剂，不论离子性(阴离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离方法，其特征在于，使生物学的液体流过分离非－ＨＤＬ脂蛋白的载体，从生物学的液体中分离非－ＨＤＬ脂蛋白。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：山下浩太郎，三宅雅文，
申请(专利权)人：株式会社日立高新技术，
类型：发明
国别省市：JP[日本]