本发明专利技术公开了一种用于检测测试样品中分析物的存在或数量的侧流测定装置。该装置采用多个区，其中一个用作测试样品中分析物是否处于＂钩状效应＂区域内的指示区。基于这种指示，可以选择针对分析物的浓度或浓度范围校正所测得信号强度的技术。例如，当确定测试样品落在＂钩状效应＂区域之外时，可采用剂量响应曲线的一部分来确定分析物浓度。另一方面，当确定测试样品落在＂钩状效应＂浓度之内时，可采用剂量响应曲线的另一部分来确定分析物浓度。或者，可以只将样品进行稀释以重新实施测定。本发明专利技术发明专利技术者发现这种检测技术可以简单、快速、准确地检测以任何浓度存在的分析物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在钩状效应区域内具有检测能力的测定装置
技术介绍
穿流(flow-through)测试中普遍采用了多种不同的分析方法和装 置，用以确定测试样品中可能存在的分析物是否存在和/或浓度。例如， 免疫测定法利用免疫系统机制，其中响应有机体病原性或外源性抗原的 存在而产生了抗体。这些抗体和抗原，即免疫反应物能够彼此结合，由 此引起能够用来确定生物样品中特定抗原的存在或浓度的高度特异性 反应纟几制。有几种公知的免疫测定方法，这些方法利用由可检测的成分标记的 免疫反应物，从而能够对分析物进行分析检测。例如，"夹心型，，测定 方式一般涉及使测试样品与检测探针混合，这些检测探针与分析物的特 异性结合成员(例如抗体)缀合，从而在分析物与缀合探针之间形成复 合物。然后使这些复合物与固定在检测区内的受体材料(例如抗体)相 接触。分析物/探针缀合复合物与固定的受体材料之间发生结合，从而在 定位能够检测以指示分析物存在的"夹心"复合物。这项技术可用于获 得定量或半定量的结果。这些夹心型测定的一些实例在Gmbb等人的 U.S.4,168,146和Tom等人的U.S.4,366,241中有所描述。另 一种技术是 "竟争型"测定。在竟争性测定中，标记探针通常是和与分析物相同或 类似的分子缀合。因此，标记探针与目标分析物竟争所存在的受体材 料。竟争性测定法通常用于检测诸如半抗原之类的分析物，每个半抗原 都是单价的并且仅能够结合一个抗体分子。竟争性免疫测定装置的实例 在Deutsch等人的U.S.4,235,601、 Liotta的U.S.4，442,204和Buechler 等人的U.S.5,208,535中有所记载。尽管这些装置具有优势，但当暴露于较高浓度的分析物时，许多常 规的侧流测定都会遭遇准确度明显不足的问题。例如，当分析物以高浓 度存在时，测试样品中相当大部分的分析物可能存在过量因而不能与缀 合探针形成复合物。因此，到达检测区时，未复合的分析物与复合的分 析物竟争结合位点。因为未复合分析物没有用探针标记，因而不能被检 测到。因此，如果大量的结合位点被未复合的分析物所占据，则该测定 可能显示出"假阴性"。该问题通常称为"钩状效应(hook effect)"或"前带(prozone )，，。已经提出多种用于减少免疫测定中的"钩状效应"的技术。例如， Kuo等人的美国专利U.S. 6,183,972中记载了一种多孔材料条带,通过 它怀疑含有分析物的测试流体可以通过毛细作用流动。该条带具有至少 两个其中固定有特异于分析物的第 一 抗原决定部位的抗体的不同的捕 获区域。还采用了带可检测标记的特异于分析物第二抗原决定部位的抗 体。当存在足够浓度时，分析物部分阻断了固定抗体与分析物第一抗原 决定部位的结合。因此，在捕获区内形成了固定抗体、分析物和标记抗 体的夹心形式。因而在各个不同的捕获区域中标记抗体发出的信号提供 了一种独特于分析物浓度的信号模式。通过数学方法将这一组信号合并 形成单调剂量响应曲线，以算出固定抗体与分析物第一抗原决定部位之间结合的阻断。然而，现在仍然需要一种以准确而简单廉价的方式测定"钩状效 应"区域内分析物浓度的改进技术。专利技术简述根据本专利技术的 一种实施方式，公开了 一种用于检测测试样品中分析 物的存在或数量的侧流测定装置。这种侧流测定装置包括与缀合检测探 针连通(in communication with)的多孔膜。所述分析物能够与该缀合检测 探针形成复合物。所述多孔膜限定出固定有第一受体材料的检测区，该 第一受体材料设计成优先与分析物结合，而无论分析物是否与缀合检测 探针复合。所述多孔膜还限定出位于检测区下游的指示区，其中该指示 区中固定有第二受体材料。该第二受体材料设计成优先与未复合的缀合 检测探针结合。所述检测区和指示区能够产生可测量的信号。该可测量 的指示信号强度与参比标准相比较以确定测试样品中的分析物浓度是 否处于构状效应区域内。所迷参比标准表示了在处于分析物的饱和浓度或饱和浓度附近时指示信号的强度或强度范围。本专利技术公开了 一种定量或半定量地检测测试样品中的分析物的方 法。该方法包括使测试样品与侧流装置的多孔膜接触。该多孔膜与缀合 检测探针连通，并进一步限定出检测区和位于检测区下游的指示区。该 方法包括测量检测区产生的检测信号强度以及指示区产生的指示信号 强度。该方法进一步包括将测得的指示信号强度与参比标准相比较，所述参比标准表示在分析物的饱和浓度或饱和浓度附近指示信号的强度 或强度范围。以下更详细地论述本专利技术的其它特征和方面。附图简要说明针对本领域的普通技术人员，本专利技术的全面和可实施的内容，包括 其最佳方式，都参照附图在说明书的剩余部分进行了更加具体的阐述，其中附图说明图1是本专利技术的侧流测定装置的一个实施方式的透视图；图2是根据本专利技术的一种实施方式，检测和指示区的分析物浓度和信号强度之间的关系曲线图；图3是用于本专利技术一种实施方式的机制在实施测定之前的示意图； 图4表示了测定完成后图3的实施方式；图5表示了用于测定分析物浓度是否处于"构状效应"区域内、并 半定量或定量地测定该分析物浓度的方法的一种实施方式；图6是实施例4的剂量响应区线，其中绘制了信号强度与CRP浓度的关系；图7是实施例5的剂量响应区线，其中绘制了信号强度与CRP浓度 的关系；图8是实施例6的剂量响应区线，其中绘制了信号强度与CRP浓度 的关系；图9是实施例8的各缀合颗粒浓度的剂量响应曲线图，其中绘制了 检测区产生的强度(即Rann分数)与CRP浓度的关系；图IO是实施例8的各缀合颗粒浓度的剂量响应曲线图，其中绘制 了指示区产生的强度(即Rann分数)与CRP浓度的关系；图11是实施例9的剂量响应曲线图，其中绘制了检测区和指示区 的Rann分数与CRP浓度的关系，其中金颗粒尺寸为40纳米，缀合物 光密度为1.0,抗体线浓度为0.5毫克每毫升，CRP线浓度为0.5毫克每 毫升；图12是实施例9的剂量响应曲线图，其中绘制了检测区和指示区 的Rann分数与CRP浓度的关系，其中金颗粒尺寸为60纳米，缀合物 光密度为1.0,抗体线浓度为0.5毫克每毫升，CRP线浓度为0.5毫克每毫升；图13是实施例9的剂量响应曲线图，其中绘制了检测区和指示区的Rann分数与CRP浓度的关系，其中金颗粒尺寸为40纳米，缀合物 光密度为1.0，抗体线浓度为0.1毫克每毫升，CRP线浓度为0.5毫克每 毫升；图14是实施例9的剂量响应曲线图，其中绘制了检测区和指示区 的Rann分数与CRP浓度的关系，其中金颗粒尺寸为60纳米，缀合物 光密度为1.0,抗体线浓度为0.5毫克每毫升，CRP线浓度为0.5毫克每 毫升；以及图15是实施例9的剂量响应曲线图，其中绘制了检测区和指示区 的Rann分数与CRP浓度的关系，其中金颗粒尺寸为40纳米，缀合物 光密度为2.5,抗体线浓度为O.l毫克每毫升，CRP线浓度为0.5毫克每毫升。附图标记在本说明书和附图中的重复使用意味着其代表本专利技术的 相同或类似特征或部件。代表性实施方式详述 定义正如本文所用的，术语"分析物"通常是指待检测的物质。例如， 分析物可包括抗原性物质、半抗原、抗体以及这些物质的组合。分析物 包括但不限于毒素、有机本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测测试样品中分析物的存在或数量的侧流测定装置，该侧流测定装置包括与缀合检测探针连通的多孔膜，其中所述分析物能够与该缀合检测探针形成复合物，所述多孔膜限定出：检测区，该检测区内固定有第一受体材料，该第一受体材料设计成优先与所述分析物结合，而无论分析物是否与缀合检测探针复合，所述检测区能够产生可测量的检测信号；以及 指示区，该指示区位于所述检测区下游并且该指示区内固定有第二受体材料，该第二受体材料设计成优先与未复合的缀合检测探针结合，所述指示区能够产生可测量的指示信号 ；其中所述可测量的指示信号的强度可与参比标准相比较以确定测试样品中的分析物浓度是否处于构状效应区域内，所述参比标准表示在处于分析物的饱和浓度或饱和浓度附近时指示信号的强度或强度范围。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：X宋，保罗克里斯多佛，
申请(专利权)人：金伯利克拉克环球有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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