本发明专利技术涉及扶正化淤植物药血浆苦杏仁苷的测定方法，包括步骤：（１）将哺乳类给予扶正化淤植物药后的含药血浆，先加２－５ｍｏｌ／Ｌ磷酸混匀后，血浆与磷酸体积比为１∶２－３，加入已用甲醇和水活化后的ｗａｔｅｒｓ Ｏａｓｉｓ ＨＬＢ小柱，经水及８０－１００％甲醇淋洗和０．２－１％氨水甲醇洗脱后，洗脱液在２５－３０℃条件下挥干富集，用流动相复溶；（２）ＵＰＬＣ／ＭＳ法检测色谱条件：色谱柱：Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ↓［１８］，２．１×１００ｍｍ，流动相Ａ：Ｗａｔｅｒ－Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－Ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ ９５∶５∶０．１ｖ／ｖ／ｖ，流动相Ｂ：Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－Ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ１００∶０．１ ｖ／ｖ；质谱条件：电喷雾离子源（ＥＳＩ），采用正离子模式检测，质量扫描范围ｍ／ｚ １５０～８００；本发明专利技术适合用于扶正化淤植物药苦杏仁苷的药代动力学研究。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属药物代谢动力学领域，特别是涉及。技术背景扶正化淤植物药由丹参、桃仁、五味子等复方组成，具有治疗肝、肺、肾纤维化的作 用，但对扶正化淤植物药缺乏药物代谢动力学的研究，因而对体内的药效成分不清楚，难 以为质量控制及指导临床合理用药提供依据，阻碍了该药进入国际市场。到目前为止，未见有关扶正化淤植物药药物代谢动力学的研究报道，无该复方在生物 样品(包括血浆样品)中苦杏仁苷的测定方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供扶.m化淤植物药血浆苦杏仁苷的测定方法，该方法 用于药代动力学研究，阐明扶正化淤植物药苦杏仁苷的药代动力学规律。本专利技术解决的技术问题通过以下技术方案来实现 ，包括下列步骤 (1)哺乳类血浆样品预处理a. 将哺乳类给予扶正化淤植物药后的含药血浆，先加2-5 mol/L磷酸混匀后，血浆 与磷酸体积比为1 : 2-3，加入已用甲醇和水活化后的Waters Oasis HLB小柱，经水及 80-100%甲醇淋洗和0.2-1%氨水甲醇洗脱后，洗脱液在25-3(TC条件下挥干富集，用流动 相复溶；b. UPLC/MS法检测； (2).UPLC/MS测定方法色谱条件色谱柱Acquity UPLC BEH C, , 2. lxl00mm ，流动相A: Water-Acetonitrile-Formic acid 95:5:0.1 v/v/v, 流动相B: Acetonitrile-Formic acid 100:0.1 v/v;质谱条件电喷雾离子源(ESI)，采用正离子模式检测，质量扫描范围m /z 150 800。所述步骤(2)电喷雾离子源，采用正离子模式检测；脱溶剂气流量为440 L/h,脱 溶剂气温度为300'C ，锥孔气流量为50L/h，离子源温度为10(TC，喷雾毛细管电压为 3800 V，取样锥孔电压为30 V，萃取锥孔电压为2.00 V，透镜电压0.1 V。质量扫描范 围m/z 150 800。本专利技术在固相萃取过程中，固相对分析物的吸附力大于样品母液，当样品通过固相 萃取柱时，分析物及一些相近似的成分被吸附在固体表面，其他组分则随样品母液通过柱 子，先用极性较大的溶剂淋洗柱子，将一些无关的成分清洗去除，最后用适当的溶剂将分 析物洗脱下来，洗脱液抽干富集；利用UPLC系统，将分析物与洗脱液中的其他成分进行 分离，最后通过质谱检测仪进行检测。本专利技术的苦杏仁苷为水溶性成分，采用固相萃取方法，可充分将样品中的苦杏仁苷萃 取出来，再加上使用UPLC/MS系统进行检测，使苦杏仁苷与样品中其他成分的分离度明 显提高，且分析方法更加灵敏和快捷，以利于进行药代动力学研究中苦杏仁苷的血药浓度 测定。附图说明图l苦杏仁苷UPLC-MS色谱图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术 而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术 人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1一种血浆中扶正化淤植物药的苦杏仁苷测定方法包括1、 血桨样品预处理方法将哺乳类给予扶正化淤植物药后的含药血浆先加2. 17 mol/L磷 酸混匀后，生物样品与磷酸之间的体积比为1 : 2-3;再加入已用甲醇和水活化后的Waters Oasis HLB小柱，经水及80_100%甲醇淋洗和0. 2-1%氨水甲醇洗脱后，洗脱液在25'C条件 下挥干富集，用流动相复溶。2、 UPLC/MS测定方法本专利技术采用UPLC/MS法的分析条件色谱条件色谱柱Acquity UPLC BEH Cw， 2. lxl00mm，流动相A: Water- Acetonitri le-Formic acid 95:5:0.1 v/v/v， 流动相B: Acetonitrile-Formic acid 100:0.1 v/v，按下列梯度洗脱<table>table see original document page 4</column></row><table>10.000.30070.030.020.000.30040.060.030.000.30020.0,35.000.30020.080.035.010.300100.00.038.000.300100.00.0质谱条件电喷雾离子源(ESI)，采用正离子模式检测；脱溶剂气流量为440 L/h， 脱溶剂气温度为300'C ，锥孔气流量为50L/h,离子源温度为100'C，喷雾毛细管电压 为3800 V，取样锥孔电压为30 V，萃取锥孔电压为2.00 V，透镜电压0.1 V。质量扫描 范围m/z 150 800。测定结果哺乳类灌服扶正化淤植物药后血浆中可测出苦杏仁苷(见图l).权利要求1、，包括下列步骤(1)哺乳类血浆样品预处理a.将哺乳类给予扶正化淤植物药后的含药血浆，先加2-5mol/L磷酸混匀后，血浆与磷酸体积比为1∶2-3，加入已用甲醇和水活化后的Waters Oasis HLB小柱，经水及80-100％甲醇淋洗和0.2-1％氨水甲醇洗脱后，洗脱液在25-30℃条件下挥干富集，用流动相复溶；b.UPLC/MS法检测；(2).UPLC/MS测定方法色谱条件色谱柱Acquity UPLC BEH C18，2.1×100mm，流动相AWater-Acetonitrile-Formic acid 95∶5∶0.1v/v/v，流动相BAcetonitrile-Formic acid100∶0.1v/v；质谱条件电喷雾离子源(ESI)，采用正离子模式检测，质量扫描范围m/z 150～800。2. 根据权利要求1所述的，其特征在于所述 步骤(2)电喷雾离子源，采用正离子模式检测；脱溶剂气流量为440 L/h，脱溶剂气温 度为300。C ，锥孔气流量为50 L/h，离子源温度为IOO 'C，喷雾毛细管电压为3800 V， 取样锥孔电压为30 V，萃取锥孔电压为2. 00 V，透镜电压0. 1 V。质量扫描范围m / z 150 800。全文摘要本专利技术涉及，包括步骤(1)将哺乳类给予扶正化淤植物药后的含药血浆，先加2-5mol/L磷酸混匀后，血浆与磷酸体积比为1∶2-3，加入已用甲醇和水活化后的waters Oasis HLB小柱，经水及80-100％甲醇淋洗和0.2-1％氨水甲醇洗脱后，洗脱液在25-30℃条件下挥干富集，用流动相复溶；(2)UPLC/MS法检测色谱条件色谱柱Acquity UPLC BEH C<sub>18</sub>，2.1×100mm，流动相AWater-Acetonitrile-Formic acid 95∶5∶0.1v/v/v，流动相BAcetonitrile-Formic acid100∶0.1 v/v；质谱条件电喷雾离子源(ESI)，采用正离子模式检测，质量扫描范围m/z 150～800；本专利技术适合用于扶正化淤植物药苦杏仁苷的药代动力学研究。文档编号G01N30/00GK101334386SQ200710040139公开日2008年12月31日 申请日期2007本文档来自技高网...
【技术保护点】
扶正化淤植物药血浆苦杏仁苷的测定方法，包括下列步骤： （１）哺乳类血浆样品预处理 ａ．将哺乳类给予扶正化淤植物药后的含药血浆，先加２－５ｍｏｌ／Ｌ磷酸混匀后，血浆与磷酸体积比为１∶２－３，加入已用甲醇和水活化后的Ｗａｔｅｒｓ Ｏａｓｉｓ ＨＬＢ小柱，经水及８０－１００％甲醇淋洗和０．２－１％氨水甲醇洗脱后，洗脱液在２５－３０℃条件下挥干富集，用流动相复溶； ｂ．ＵＰＬＣ／ＭＳ法检测； （２）．ＵＰＬＣ／ＭＳ测定方法 色谱条件：色谱柱：Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ↓［１８］，２．１×１００ｍｍ，流动相Ａ：Ｗａｔｅｒ－Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－Ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ ９５∶５∶０．１ｖ／ｖ／ｖ，流动相Ｂ：Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－Ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ １００∶０．１ｖ／ｖ；质谱条件：电喷雾离子源（ＥＳＩ），采用正离子模式检测，质量扫描范围ｍ／ｚ １５０～８００。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马越鸣，王天明，张永煜，
申请(专利权)人：上海现代中医药技术发展有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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