一种鉴别龙眼肉质量的高效液相色谱检测方法技术

本发明专利技术提供的鉴别龙眼肉质量的高效液相色谱检测方法，具体是：对供试样品（新鲜龙眼果肉或制成的龙眼干）进行剪碎研磨处理，加水用超声波提取，提取物经微孔膜过滤后，用高效液相色谱仪测定，得供试样品色谱图；将供试样品色谱图与标准龙眼果肉色谱图相比较，以此对供试样品真假作出科学的评价；标准龙眼肉色谱图是按照１０种核苷标准品的分离方法建立的；通过标准曲线，能计算出标准龙眼肉中多种核苷成分的含量；因此供试样品的测定方法，按照核苷标准品和标准龙眼肉的测定方法进行测定，可鉴别其样品的真伪。本发明专利技术可以准确地、科学地判断被检测样品的真假和质量，并且灵敏度高，稳定性和重现性好，还具有可操作性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农产品鉴别，特别是涉及一种鉴别龙眼肉真假的高效液相色谱检测方法。
技术介绍
由文献1 (中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典2000年版(一部). 北京.化学工业出版社.2000.)、文献2 (谢世华.龙眼肉掺伪鉴别.时珍国医国药， 1999, 10 (5): 355.)和文献3 (纪成茂，吴文海，张河贞.龙眼肉与龙荔肉的鉴别. 海峡药学，1996， 8 (2): 52)及文献4 (孙法丽，徐凌川，马萍.桂圆肉及其伪品的 鉴别.国药鉴别，1998， 9 (4): 384)可知'龙眼("j'历ocarp"s longan Lour)是 国家卫生部第一批公布既是保健食品又是滋补药品的特殊水果，享有南方人参的美 称。龙眼肉俗称桂圆，作为传统的保健食品和滋补药品，在国内外市场上流通量很大， 并且假劣产品很多。有报道市场上有用同属于无患子科的植物如有毒的龙荔肉、或 者荔枝肉来冒充桂圆出售，目前只有从外观形态上的鉴别方法，来鉴别龙眼肉的真假。由文献5(肖维强，黄炳雄，王晓容，等.HPLC法测定龙眼肉中的几种核苷类物质 .食品科学，2007年，28 (1): 234-237.)、文献6 (肖维强，戴宏芬，黄炳雄， 等.龙眼肉中9种核苷类成分的HPLC分析.华中农业大学学报，2007， 26(5): 722-726.)、文献7(黄炳雄，李建光，王晓容，等.18种龙眼中多种核苷的HPLC定 量测定.广东农业科学，2008， (3): 67-69)可知，龙眼肉中有高含量的核苷物质， 以腺苷(adenosine)、鸟苷(guanosine)和尿苷(uridine )的含量最高。但是，关于龙眼肉的真假的高效液相色谱检测方法在国内未见报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供， 以便为科学评价龙眼肉质量提供鉴别的依据。本专利技术解决其技术问题采用以下的技术方案本专利技术提供的鉴别龙眼肉质量的高效液相色谱检测方法，具体是先对供试样品进行 剪碎研磨处理，供试样品为新鲜龙眼果肉或制成的龙眼干，然后加水用超声波提取，提取 物经微孔膜过滤后，用已建立的高效液相色谱标准测定方法进行测定，得供试样品色谱图， 最后将供试样品色谱图与标准龙眼果肉色谱图相比较，以此对供试样品真假作出科学的评 价；标准龙眼肉色谱图是按照IO种核苷标准品的分离方法建立的。本专利技术提供的鉴别龙眼肉质量的高效液相色谱检测方法，其在鉴别龙眼果肉真伪中的 应用。本专利技术与现有技术相比，具有以下主要的优点l.具有明显的特征性其腺苷、鸟苷和尿苷是样品中较稳定的核苷类特征性物质。本方法灵敏度高、稳定性和重现性好，经几种不同的分离方法试验，上述三种核苷类物质均 能得到良好地分离，且含量稳定(本申请只选取其中一种分离方法)。2. 与传统技术采用的从外观、组织形态上鉴别相比，本方法是从龙眼肉内含的、稳 定的核苷物质进行辨别，因此技术上具有稳定性和整体性。3. 本方法是一种综合整体的鉴别手段，既避免了肉眼从外观上判断的差错，又能准确 地、科学地判断被检测样品的真假。结合标准品的标准曲线，还可以确定样品中主要核苷 物质的准确含量，从而判断样品的质量。4. 本方法还具有可操作性，能满足上述测定条件的普通液相色谱仪均能满足分离条 件(需要二元梯度洗脱和柱温控制系统)。本专利技术利用高效液相色谱检测方法所具有的灵敏度高、稳定性好、重复性和实用性强 的特点，以广东的主栽龙眼品种石硖为分析材料，对石硖中水溶性物质(包括多种核苷成 分)进行分离，拟建立石硖龙眼的高效液相色谱检测方法，从而推而广之为科学评价龙眼 果肉质量提供鉴别的依据。 附图说明图1是混合核苷标准品色谱图。图1中依保留时间先后为胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、次黄嘌呤核苷、鸟苷、胸苷和腺苷(含量均为2 Pg/mL)。 图2是石硖龙眼样品(鲜样)分离后得到的多种核苷及水溶性物质高效液相色谱图。具体实施例方式本专利技术提供的鉴别龙眼肉质量的高效液相色谱检测方法，具体是先对供试样品进行 剪碎研磨处理，供试样品为新鲜龙眼果肉或制成的龙眼干，然后加水用超声波提取，提取 物经微孔膜过滤后，再利用已建立的高效液相色谱测定方法进行分离，得供试样品色谱图， 最后用供试样品色谱图与标准龙眼果肉色谱图相比较，以此作为供试样品真假的科学评 价；标准龙眼肉色谱图是按照IO种核苷标准品的分离方法建立的。在利用高效液相色谱测定技术时，所采用的色谱条件为Nucleosil C18反相水性柱 5pm， 250mmX4mm;流动相为0.005mol/L的KH2P04和甲醇；二元梯度洗脱，流速 lmL/min;检测波长260nm，柱温35。C。本专利技术鉴别龙眼肉质量的高效液相色谱检测方法，可采用包括以下步骤的方法(1) 核苷类成分标准样品的分离-准确称取各标准样品2.5mg，精确至0.00001g,用水溶解并定容到5mL，混合标准样 品溶液用水稀释至50ng/mL，以后呈2倍稀释，做标准曲线，该标准曲线可用于计算样品 中各核苷的含量，以此量化地对供试样品进行龙眼果肉的质量评估；然后用色谱条件进 行IO种标准样品的分离，得到IO种标准样品色谱图。(2) 供试样品的处理A.将采集的新鲜龙眼果去皮和核，于—2(TC存放，备用；称取备用龙眼果肉0.9 l.lg，精确到0.001g;再经剪碎研磨处理后移入25 mL容量瓶中，加入10 15mL的水，进行 两次超声波处理，其中，第一次超声波处理为20分钟，停止IO分钟后再进行第二次超声 波处理，时间为10分钟；然后，用水定容至刻度，进样前用0.5pm微孔过滤膜过滤。 或者，B.将采集的新鲜龙眼果肉制成半干型龙眼干，龙眼干经7(TC烘干至恒重后，称取 0.32g精确到0.0001 g，龙眼肉的干湿为l: 5.8 6.5;再剪碎研磨处理后移入25mL容 量瓶中，加入14 16mL的水，浸泡3小时，超声波处理30分钟后定容至刻度，进样前 用0.5nm微孔过滤膜过滤。所述的新鲜龙眼肉取自广东省农业科学院果树研究所果园，包括供试样品和标准龙眼 果肉样品，标准龙眼果肉样品是经该所专家鉴定广东主栽品种石硖龙眼。(3) 供试样品色谱图的建立 将处理后的供试样品进行高效液相色谱分析，每个样品重复3次；在所选定的色谱条件下，供试样品得到满意的分离，得到多种水溶性物质，其中有7种以上的核苷；并且所建立的供试样品色谱图含有多个峰，较大的峰有6个，其中腺苷、鸟苷、尿苷峰较高(或 者峰面积较大)时，即表示这三种核苷的含量也较高；然后根据标准曲线和峰值，可计算 出这三种核苷的含量。(4) 比较将供试样品色谱图与按上述同样步骤已建立的标准龙眼果肉色谱图进行对比，利用试 腺苷、鸟苷和尿苷是标准龙眼果肉样品中较稳定的核苷类特征性物质来鉴别供试样品的真 伪。本专利技术提供的鉴别龙眼肉质量的高效液相色谱检测方法，其在鉴别龙眼果肉真伪中的 应用。所述龙眼果肉为广东主栽品种石硖龙眼果肉，同时适应于广东、广西、云南、福建 等地的其它品种。下面结合实例及附图对本专利技术作进一步说明。本实例采用高效液相色谱(HPLC)法，建立了标准石硖龙眼果肉的核苷类成分HPLC 定量分析方法。结果10种核苷类成分标准品能得到完全分离，在同样条件下广东主栽 品种石硖龙眼果肉本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴别龙眼肉质量的高效液相色谱检测方法，其特征是：先对供试样品进行剪碎研磨处理，供试样品为新鲜龙眼果肉或制成的龙眼干，然后加水用超声波提取，提取物经微孔膜过滤后，用已建立的高效液相色谱标准测定方法进行测定，得供试样品色谱图，将供试样品色谱图与标准龙眼肉色谱图相比较，以此对供试样品真假作出科学的评价；标准龙眼肉色谱图是按照１０种核苷标准品的分离方法建立的。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖维强，王晓容，戴宏芬，黄炳雄，李建光，刘传和，
申请(专利权)人：广东省农业科学院果树研究所，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]