本发明专利技术提供了一种检测麻疹、风疹病毒ＩｇＭ抗体胶体金检测试纸条。其是在硝酸纤维膜（ＮＣ膜）上同时包被麻疹特异性基因工程抗原Ｈ、风疹病毒特异性基因工程抗原Ｅ１和质控二抗ＩｇＧ，结合胶体金标记的抗人ＩｇＭ，应用膜层析捕获法，检测标本中麻疹、风疹病毒特异性ＩｇＭ抗体。应用本发明专利技术试纸条检测，操作简单、方便、快速、简捷，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合基层，适合于现场检测和流行病学调查，对麻疹、风疹病毒感染起到辅助和鉴别诊断作用，并可用于疫苗接种后的免疫效果观察。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种麻瘆、风瘆病毒IgM抗 体胶体金检测试纸条、其制备方法及其应用。
技术介绍
麻瘆病毒(measles virus, MV)感染除能引起发热、呼吸道卡 他症状和全身斑丘瘆等急性感染症状外，还同抑制细胞介导的免疫作 用相关，从而导致肺炎、腹泻等继发感染。少数病例中甚至还能引起 脑炎及持续性中枢神经系统感染等严重并发症。MV-H蛋白(血凝素 蛋白)属于II型跨膜糖蛋白，分子量为73-78 kD，能刺激机体产生有 效的体液免疫和细胞免疫。MV-H蛋白是MV两类受体CD46和SLAM 作用的主要位点，起始病毒的感染；同时还能与F蛋白共同作用，诱 导病毒胞膜和细胞膜融合。当前麻渗病例的临床症状往往不够典型，因此，对疑似麻疹病例 的实验室诊断显得异常重要。目前，临床常用酶联免疫吸附试验 (ELISA)法检测患者血清中麻麥IgM抗体进行确认。但是，特异性 IgM抗体在发病初期1 ~ 3 d时和恢复期的阳性率较低，仅为50 ~ 73%， 尤其在发病当日和次日检出的阳性率更低。因此，容易造成漏诊，引 起各种严重并发症。据报道，对出渗初期就诊临床符合，但麻疹IgM 抗体阴性的患者，釆用RT-PCR的方法检测MV-H基因，可以提高检测 的阳性率。但受限于成本和PCR技术本身，不适合应用于大规模的临 床检测。风瘆病毒(rubella virus， RV)是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成 员。通常RV感染症状较轻，表现为急性、轻型、病程短、自限性出瘆性疾病。RV对公众健康的最大威胁是它的致畸特性。妇女妊娠期，尤其是前3个月感染RV可导致新生儿产生一系列的器官畸形，称为先 天性风瘆综合征(CRS)。 RV为单股正链RNA病毒，其3端的结构基因 编码三种蛋白，即衣壳蛋白C和两种包膜糖蛋白E1和E2。在RV的3种 主要结构蛋白E1、 E2和C蛋白中，抗原表位主要存在于E1膜蛋白上。 El为包膜糖蛋白，与E2共同构成病毒包膜的刺突。El相对分子质量 为57，000，由412-418个氨基酸残基组成。应用单克隆抗体已确定E1 上存在血凝及中和抗原决定簇。国外已有E1膜蛋白的全长基因表达， 但完整的E1膜蛋白水溶性差，不易纯化，难以作为抗原用于RV病毒 感染的血清学检测。据文献报道，El膜蛋白中大多数抗原决定簇聚集 区位于第202 305位氨基酸之间，并且这一抗原决定簇聚集区序列高 度保守。自HIA(血凝抑制)建立以来，RV感染的实验室诊断方法得到了 不断的更新和改善。虽然ELISA是诊断先天性感染的主要常规方法， 但是RV特异性抗体与微小病毒B19、 EB病毒等发生交叉反应，I型糖 尿病、慢性肝病患者也会出现阳性反应，使其特异性受到限制。而PCR 在病毒感染的诊断中存在着其他方法难以比拟的优势。但目前尚缺乏 PCR检测RV感染的诊断标准。有待进一步研究阐明。所以，单独从 一个方面诊断RV感染是不可靠的，两种或两种以上方法如ELISA和 PCR联合应用才是RV感染更具有说服力的诊断方法。胶体金免疫层析法(Immunochromatography Assay)始于上世纟己 90年代中期，是在免疫渗滤法的基础上发展起来的。它是免疫亲和技 术、印迹技术、免疫标记技术和层析技术的组合。将包被抗原、胶体 金标记抗体固相化，与样本吸附材料等组合在一起，制备为免疫层析 诊断试条/板，使用时只需要把试纸条下插入样本溶液，数分钟就可 以判断结果。与免疫渗滤法比较，稳定性好，操作更简便、快速，且 由于为试条/试板形式，无需低温保存，储运方便。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种使用方便、快捷，用于检测麻疹病毒、风瘆病毒特异性igM抗体的试纸条，检测人类标本中麻疹、风疹病 毒特异性IgM抗体，用于麻瘆、风瘆病毒感染的辅助诊断和鉴别。本专利技术的另一目的是提供一种麻疹、风疹病毒IgM抗体胶体金 检测试纸条的制备方法。本专利技术的再一目的是提供一种麻疹、风疹病毒IgM抗体胶体金 检测试纸条在用于检测麻疹、风疹病毒特异性IgM抗体中的应用。本专利技术提供了 一种麻疹、风疹病毒IgM抗体胶体金检测试纸条， 其包括同时含有包被有麻疹病毒H抗原、风疹病毒E1特异性抗原和 二抗IgG的三个色带的硝酸纤维膜，及含有胶体金标记的抗人IgM 的玻璃纤维膜。其中，所述的麻疹病毒H抗原、风疹病毒E1特异性抗原通过原 核表达制备获得。所述的抗IgG抗体为抗鼠IgG抗体。所述硝酸纤维膜中麻瘆病毒H抗原、风疹病毒E1抗原的浓度为 3.5mg/ml，所述抗鼠IgG抗体的浓度为2mg/ml，釆用0.01MPBS进行稀释。所述玻璃纤维膜中胶体标记的抗人IgM的pH值为7.6 8.0，胶 体金和抗体的配比为18吗/ml胶体金。本专利技术麻瘆、风渗病毒IgM抗体胶体金检测试纸条，还包括反 应支持物、金标抗体保护膜和吸水垫，所述反应支持物上依次相互搭 接粘贴的金标抗体保护膜、玻璃纤维膜、硝酸纤维膜和吸水垫。所述反应支持物优选PVC板；所述吸水垫优选滤油纸；所述金 标抗体保护膜同时具有吸水功能，优选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤 维。本专利技术麻疹、风疹病毒IgM抗体胶体金检测试纸条的制备方法，包括以下步骤1) 分别制备麻渗病毒H抗原、风瘆病毒E1特异性抗原；2) 硝酸纤维膜的制备将麻瘆病毒H抗原、风疹病毒E1抗原用 PBS稀释成3.5mg/ml，将抗鼠IgG抗体用PBS稀释成2mg/ml，喷于硝酸 纤维膜上，分别形成检测线和对照线，且于37。C中干燥2小时，备用；3) 玻璃纤维膜的制备将胶体金调整至最适pH值为7.6 8.0， 胶体金和抗体的配比为18)ag/ml胶体金，经稳定剂(含0.05。/。BSA， pH8.0， O.OlMTris缓冲液)处理后，按每平方厘米65pl的量均勾吸附于玻璃纤维膜上，冷冻干燥，备用；4) 最后在反应支持物上依次相互搭接粘贴金标抗体保护膜、玻璃纤维膜、硝酸纤维膜和吸水垫。本专利技术所述试纸条用于检测麻疹、风疹病毒特异性IgM抗体中 的应用。本专利技术釆用纯化的麻瘆病毒H抗原、风疹病毒E1特异性基因工 程抗原和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金 标记的抗人IgM，应用膜层析捕获法的原理检测标本中的麻疹、风疹 病毒特异性IgM抗体。本专利技术的试纸条利用胶体金标记技术和膜层析技术，用于快速定 性半定量检测样本中可能存在的麻渗、风瘆病毒特异性抗体，达到快 速筛检病人，及时控制疫情的目的。可节省大量人力物力，方便、快 速、简捷，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作 简单，易于推广，适合基层，适合于现场检测和流行病学调查，对麻 瘆、风瘆病毒的感染起到辅助和鉴别诊断作用。附图说明图1A为本专利技术麻瘆、风瘆病毒IgM抗体胶体金检测试纸条的正 面示意图1B为本专利技术麻疹、风疹病毒IgM抗体胶体金检测试纸条的侧面示意其中，1:吸水垫；2:硝酸纤维膜(T1和T2:麻疹病毒H抗原、风疹病毒El特异 性抗原的二条检测条带；C:包被抗鼠IgG的质控条带)；3:含有胶体金标记抗人IgM的玻璃纤维膜；4:金标抗体保护膜；5:反应支持物。图2为本专利技术试纸条检测结果示意图。 其中，从左至右依次为Tl、 C或T2、 C两条线阳性；C一条线阴 性；T、 C两条线阴性，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种麻疹、风疹病毒ＩｇＭ抗体胶体金检测试纸条，其特征在于，其包括同时含有包被有麻疹病毒Ｈ抗原、风疹病毒Ｅ１特异性抗原和二抗ＩｇＧ的三个色带的硝酸纤维膜（２），及含有胶体金标记的抗人ＩｇＭ的玻璃纤维膜（３）。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘明，
申请(专利权)人：北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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