一种高效抗肿瘤活性多肽Tubulysin M的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种高效抗肿瘤活性多肽Tubulysin M的制备方法，包括步骤S1，提供化合物2；步骤S2，以化合物2作为关键原料制备活性多肽Tubulysin M。本发明专利技术的制备方法采用了创新性的路线，优化了活性多肽Tubulysin M的全合成过程，总产率较高，立体选择性好。

【技术实现步骤摘要】
一种高效抗肿瘤活性多肽TubulysinM的制备方法
本专利技术涉及药物的
，更具体地，涉及一种高效抗肿瘤活性多肽TubulysinM的制备方法。
技术介绍
四肽化合物Tubulysins是2000年由Hofle等从粘细菌中提取出来的，但其晶体结构直到2004年才被确定下来。TubulysinA-Z是一个家族化合物，见表1，它们都属于天然产物。表1Tubulysins家族化合物的结构式活性多肽TubulysinM是化学家通过结构改造得到，即将敏感的缩醛替换为稳定的甲基。研究发现活性多肽TubulysinM对人癌细胞显示出极强的细胞毒活性，IC50值在较低的纳摩尔范围内，见表2(参考文献J.Am.Chem.Soc.,2016,138(5):1698-1708)。活性多肽TubulysinM是一种具有细胞毒性活性微管溶素，抑制微管蛋白聚合并导致细胞周期停滞和凋亡。此外，研究表明活性多肽TubulysinM同时还具有抑制血管新生和抗多重耐药性的优点。在水溶性方面活性多肽TubulysinM相比其它抗癌药物有着明显的优势，其对特定的癌细胞表现出超强的抗癌活性，使其成为新型抗癌新药研发中颇受关爱的目标分子之一。表2活性多肽TubulysinM对人癌细胞的体外细胞毒活性从活性多肽TubulysinM较短几年的发展历程看，活性多肽TubulysinM以其独有的生物活性正在受到越来越多人的关注，已经成为抗肿瘤药物中的明星分子。但其合成并不理想，至今活性多肽TubulysinM及其类似物化学合成上报道的文献的合成路线大部分不是很完美，存在很大进一步探索的空间。因此，如何提供一条简洁快速，可以大量合成的路线对活性多肽TubulysinM的进一步生物研究及实现临床应用具有重要意义。有鉴于此，特提出本申请。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种活性多肽TubulysinM的制备方法，该制备方法采用了创新性的路线，优化了活性多肽TubulysinM的全合成过程，总产率较高，立体选择性好。为了达到上述技术效果，本专利技术采用的技术方案的基本思路如下：一种高效抗肿瘤活性多肽TubulysinM的制备方法，所述制备方法包括：步骤S1，提供化合物2；步骤S2，以化合物2作为关键原料制备活性多肽TubulysinM；其中，化合物2的化学式如下：活性多肽TubulysinM的化学式如下：作为一种实施方式，所述步骤S2采用如下合成路线：其中，上述反应式中使用的化合物3、化合物7和化合物9的化学式如下：包括如下步骤：(1)将化合物2于三氟乙酸中，加热回流反应至完毕，减压浓缩，真空干燥后得到中间体；将所述中间体溶于二氯甲烷，加入化合物3和HATU，搅拌均匀后加入二异丙乙基胺，于室温下搅拌反应，加水淬灭反应，萃取，然后合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯的混合液为洗脱液进行柱层析分离，得到化合物4；(2)将所述化合物4溶于二氯甲烷，在冰水浴冷却下加入2,6-二甲基吡啶和叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯，升到室温搅拌反应，加水淬灭反应，萃取合并有机相，依次用稀盐酸和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯的混合液为洗脱液进行柱层析分离，得到化合物5；(3)将所述化合物5溶于DMF，冰水浴冷却下加入60％的氢化钠固体，然后加入碘甲烷，缓慢升到室温搅拌反应，再用冰水浴冷却，加饱和氯化铵水溶液淬灭反应，萃取合并有机相，用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯的混合液为洗脱液进行柱层析，分离得到化合物6；(4)将所述化合物6溶于四氢呋喃/水混合溶剂，冰水浴冷却下加入氢氧化钠固体，然后升到室温搅拌反应，反应结束后冰水浴冷却，酸化溶液至pH＝2，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到中间体酸；将上述中间体酸溶于二氯甲烷，加入化合物7和HATU，搅拌均匀后加入二异丙乙基胺，于室温下搅拌反应，加水淬灭反应，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯混合液为洗脱液进行柱层析，分离得到化合物8；(5)将化合物8溶于四氢呋喃/水混合溶剂，加入三苯基膦，加热回流反应至完毕，减压浓缩，再用甲苯除水，真空干燥得到中间体胺；将所述中间体胺溶于二氯甲烷，加入化合物9和HATU，搅拌均匀后加入二异丙乙基胺，于室温下搅拌反应，加水淬灭反应，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯混合液为洗脱液进行柱层析，分离得到化合物10；(6)将所述化合物10溶于甲醇，加入氟化铵固体，加热回流反应，减压浓缩，加水稀释，萃取合并有机相，用饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到第一中间体；将所述第一中间体溶于四氢呋喃/水混合溶剂，加入氢氧化钠固体，然后加热回流反应，冰水浴冷却，酸化至溶液pH＝2，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到第二中间体；将所述第二中间体溶于吡啶，加入醋酸酐，于室温下搅拌反应，加水淬灭反应，冰水浴冷却，酸化至溶液pH＝2，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到第三中间体；将所述第三中间体溶于二氯甲烷，加入三氟乙酸，于室温下搅拌反应，减压浓缩，干燥得到第四中间体；将所述第四中间体溶于乙腈和甲醇的混合溶剂，加入甲醛水溶液，于室温下搅拌反应，加入氰基硼氢化钠，搅拌反应至完毕，滴加冰醋酸至溶液的pH＝5，然后于室温下搅拌反应至完毕，减压浓缩，先用硅胶柱层析分离纯化，再用异丙醚打浆纯化，得到化合物1。作为一种实施方式，所述步骤(1)中，化合物2：化合物3：HATU：二异丙乙基胺的摩尔比＝1：1.1-1.5：2-3：4-6，优选为1：1.2：3：6。优选地，所述步骤(1)中，所述石油醚和乙酸乙酯的混合液中石油醚：乙酸乙酯的体积比＝4：1。优选地，所述步骤(1)中，所述萃取使用的溶剂为二氯甲烷。作为一种实施方式，所述步骤(2)中，化合物4：2,6-二甲基吡啶：叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯的摩尔比＝1：3-5：1.5-2，优选为1：3：1.5。优选地，所述步骤(2)中，冰水浴冷却下加入2,6-二甲基吡啶和叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯，20～30min后升到室温搅拌反应3～4h，更优选为30min后升到室温搅拌反应4h。优选地，所述步骤(2)中，所述稀盐酸为1M稀盐酸。优选地，所述步骤(2)中，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效抗肿瘤活性多肽Tubulysin M的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：/n步骤S1，提供化合物2；/n步骤S2，以化合物2作为关键原料制备活性多肽Tubulysin M；/n其中，化合物2的化学式如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种高效抗肿瘤活性多肽TubulysinM的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
步骤S1，提供化合物2；
步骤S2，以化合物2作为关键原料制备活性多肽TubulysinM；
其中，化合物2的化学式如下：



活性多肽TubulysinM的化学式如下：





2.根据权利要求1所述的的制备方法，其特征在于，所述步骤S2采用如下合成路线：






其中，上述反应式中使用的化合物3、化合物7和化合物9的化学式如下：



包括如下步骤：
(1)将化合物2于三氟乙酸中，加热回流反应至完毕，减压浓缩，真空干燥后得到中间体；
将所述中间体溶于二氯甲烷，加入化合物3和HATU，搅拌均匀后加入二异丙乙基胺，于室温下搅拌反应，加水淬灭反应，萃取，然后合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯的混合液为洗脱液进行柱层析分离，得到化合物4；
(2)将所述化合物4溶于二氯甲烷，在冰水浴冷却下加入2,6-二甲基吡啶和叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯，升到室温搅拌反应，加水淬灭反应，萃取合并有机相，依次用稀盐酸和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯的混合液为洗脱液进行柱层析分离，得到化合物5；
(3)将所述化合物5溶于DMF，冰水浴冷却下加入60％的氢化钠固体，然后加入碘甲烷，缓慢升到室温搅拌反应，再用冰水浴冷却，加饱和氯化铵水溶液淬灭反应，萃取合并有机相，用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯的混合液为洗脱液进行柱层析，分离得到化合物6；
(4)将所述化合物6溶于四氢呋喃/水混合溶剂，冰水浴冷却下加入氢氧化钠固体，然后升到室温搅拌反应，反应结束后冰水浴冷却，酸化溶液至pH＝2，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到中间体酸；
将上述中间体酸溶于二氯甲烷，加入化合物7和HATU，搅拌均匀后加入二异丙乙基胺，于室温下搅拌反应，加水淬灭反应，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯混合液为洗脱液进行柱层析，分离得到化合物8；
(5)将化合物8溶于四氢呋喃/水混合溶剂，加入三苯基膦，加热回流反应至完毕，减压浓缩，再用甲苯除水，真空干燥得到中间体胺；
将所述中间体胺溶于二氯甲烷，加入化合物9和HATU，搅拌均匀后加入二异丙乙基胺，于室温下搅拌反应，加水淬灭反应，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯混合液为洗脱液进行柱层析，分离得到化合物10；
(6)将所述化合物10溶于甲醇，加入氟化铵固体，加热回流反应，减压浓缩，加水稀释，萃取合并有机相，用饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到第一中间体；
将所述第一中间体溶于四氢呋喃/水混合溶剂，加入氢氧化钠固体，然后加热回流反应，冰水浴冷却，酸化至溶液pH＝2，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到第二中间体；
将所述第二中间体溶于吡啶，加入醋酸酐，于室温下搅拌反应，加水淬灭反应，冰水浴冷却，酸化至溶液pH＝2，萃取合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤，分液，有机相加无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到第三中间体；
将所述第三中间体溶于二氯甲烷，加入三氟乙酸，于室温下搅拌反应，减压浓缩，干燥得到第四中间体；
将所述第四中间体溶于乙腈和甲醇的混合溶剂，加入甲醛水溶液，于室温下搅拌反应，加入氰基硼氢化钠，搅拌反应至完毕，滴加冰醋酸至溶液的pH＝5，然后于室温下搅拌反应至完毕，减压浓缩，先用硅胶柱层析分离纯化，再用异丙醚打浆纯化，得到化合物1。


3.根据权利要求2所述的的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，化合物2：化合物3：HATU：二异丙乙基胺的摩尔比＝1：1.1-1.5：2-3：4-6，优选为1：1.2：3：6；
优选地，所述石油醚和乙酸乙酯的混合液中石油醚：乙酸乙酯的体积比＝4：1；
优选地，所述萃取使用的溶剂为二氯甲烷。


4.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴正治，龙伯华，
申请(专利权)人：深圳市老年医学研究所，吴正治，
类型：发明
国别省市：广东;44