使用活性炭诊断止血障碍的方法技术

本申请提供了一种用于体外诊断从受试者获得的血浆样品中的止血障碍的方法，该方法包括以下步骤：a)使从所述受试者获得的血浆样品与活性炭接触；b)从所述活性炭中回收所述血浆样品；c)确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力，其中所述血浆样品凝固的能力指示所述受试者中止血障碍的存在、进展或严重程度，以及任选地止血障碍的性质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用活性炭诊断止血障碍的方法
本专利技术属于诊断止血障碍的方法领域。更具体地，本专利技术提供了用于例如在用抗凝剂治疗的患者中诊断止血障碍的方法和试剂盒。专利技术背景总体而言，一旦停止抗凝治疗，患有自发性静脉血栓栓塞(VTE)的患者具有很高的复发风险。实际上，复发性VTE的累积风险在1年时约为10％，在5年时约为30％，在10年时约为50％。常规的和特定的凝血测试是检测止血障碍的有用筛选测试。几种遗传性疾病(例如，活化的蛋白C抗性、蛋白C和蛋白S缺乏症、抗凝血酶缺乏症和VIII因子升高)增加了复发性血栓栓塞的风险。风险程度取决于先前的状况，因此，不应将易栓危险因素的测试作为一般群体的筛选，而是应在患有血栓栓塞事件或具有已知家族史的选定患者中进行。这些患者经常因血栓栓塞性疾病而接受治疗，因此，抗凝药物的作用使结果的解释变得复杂。此外，接受抗血栓治疗的患者可能需要进行凝血测试，以诊断开始治疗后发展的止血障碍，例如维生素K缺乏症、肝病或获得性血友病A。(英国)国家健康和保健研究所(NICE)关于静脉血栓栓塞性疾病的指南认识到这些测试的临床相关性，尽管它们的使用并不舒适和最佳，因为这意味着患者在研究阶段必须是未保护的/未治疗的以允许可靠的诊断。自2008年以来，一类新型的抗凝剂进入了抗凝市场：直接口服抗凝剂(DOAC)。这些化合物包括一种凝血酶抑制剂(达比加群酯(DabigatranEtexilat)-)和三种因子Xa抑制剂(利伐沙班(rivaroxaban)-阿哌沙班(apixaban)-和依度沙班(edoxaban)-)，并且不需要抗凝的常规监测，这与以前使用的维生素K拮抗剂和低分子量肝素(LMWH)相反。但是，有证据表明，在几种情况下进行点测量可能是有用的，并且应采用特定的测试。另一方面，直接靶向凝血因子之一的药物的引入将影响涉及相关凝血因子的若干止血测试，导致假阳性或假阴性结果。因此，需要避免直接抗凝剂在凝血测试中的作用，以促进诊断并确保对血栓形成事件的病因进行适当评估。已经确定了用于从血样中去除低分子量化合物(例如染料)的工具(例如WO9934914A1)。然而，通常设想将这些用于大批血浆。此外，尚未考虑这些技术在诊断止血障碍中的相关性。
技术实现思路
本专利技术人发现，活性炭可以用来制备用于诊断止血障碍的体外测试的血浆，以从血浆样品中去除直接抗凝剂(例如，DOAC)。本文所公开的方法允许在不存在直接抗凝剂(例如，DOAC)对凝固能力的干扰作用的情况下，确定从受试者获得的血浆的凝固能力，从而允许在所述受试者中准确检测止血障碍的存在。此外，本专利技术允许基于样品中抗凝剂的存在来确定止血障碍的风险。在特定实施方案中，用于体外诊断从受试者获得的血浆样品中的止血障碍的方法包括以下步骤：使从所述受试者获得的血浆样品与活性炭接触，以使所述DOAC吸附在所述炭上；从所述样品中分离所述吸附的活性炭，并确定如此获得的所述血浆样品的凝固能力。在特定的实施方案中，该方法包括(a)使从所述受试者获得的血浆样品与活性炭接触；(b)从所述活性炭中回收所述血浆样品；和c)确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力。在这些方法中，所述血浆样品的凝固能力有效地指示了所述受试者中止血障碍的存在、进展或严重程度，以及任选地止血障碍的性质。因此，在特定的实施方案中，所述方法包括步骤(d)，其包括基于所述血浆的所述凝固能力确定所述受试者中止血障碍的存在、进展或严重程度。在特定实施方案中，通过使血浆样品通过过滤器来从活性炭中回收血浆样品。在进一步的实施方案中，过滤器是孔径在0.22至0.65微米之间的过滤器，使得血浆中仍然存在的血小板、血小板碎片和/或血细胞以及活性炭被从血浆中除去。实际上，在特定实施方案中，该方法的特征在于在一个步骤中将血小板和DOAC从样品中除去，并且不包括从所述血浆样品中除去血小板的单独步骤。本文公开的方法允许通过体外诊断测定法快速而可靠地评估止血障碍，例如，用于确定观察到的降低的凝固能力(例如，血凝不足)是否可以归因于止血障碍或由于患者样品中存在抗凝剂而导致的降低的凝固能力(例如，血凝不足)。在特定实施方案中，基于所述血浆的所述凝固能力确定所述受试者止血障碍的存在、进展或严重程度的步骤是通过将所述样品的所述凝固能力与标准或参考值进行比较来进行的。因此，第一方面提供了一种用于体外诊断从受试者获得的血浆样品中的止血障碍的方法，该方法包括以下步骤：a)使从所述受试者获得的血浆样品与活性炭接触；b)从所述活性炭中回收所述血浆样品；和c)确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力；其中所述血浆样品凝固的能力指示所述受试者止血障碍的存在、进展或严重程度，以及任选地止血障碍的性质。在特定实施方案中，所述步骤(b)是通过使血浆样品通过过滤器来进行的。在进一步的特定实施方案中，所述血浆样品的孔径为0.22至0.65μm。在特定实施方案中，从活性炭中回收血浆的步骤包括离心步骤。在特定实施方案中，活性炭的浓度为至少3mg/ml，优选至少5mg/ml。在特定实施方案中，使血浆样品与活性炭接触至少2分钟，优选至少5分钟。在特定实施方案中，本文公开的用于体外诊断止血障碍的方法在步骤(c)之前不包括从血浆样品中去除血小板、血小板碎片和残留血细胞中的一个或更多个的附加步骤。在特定实施方案中，确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力的步骤是通过使血浆样品与凝血活化剂接触来进行的。在特定实施方案中，凝血活化剂选自由以下组成的组：人钙凝血酶(humancalciumthrombin)、兔或重组人组织因子、合成磷脂、鲁塞尔蝰蛇毒(Russel’svipervenom)、ecarin、textarin或二氧化硅、胶体二氧化硅活化剂、凝血调节蛋白、活化蛋白C、冻干牛凝血酶和凝血酶CBS61.50的生色底物、蛇毒中的因子V活化剂和从蛇毒分离的因子Va依赖性凝血酶原活化剂。在特定实施方案中，确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力的步骤还包括在步骤(c)之前使所述血浆样品与免疫衰竭(depleted)的血清或血浆接触。在特定实施方案中，免疫衰竭的血清或血浆选自由以下组成的组：因子VIII或IX或X或XI或XII或XIII或VII或V或II缺陷的血清或血浆。在特定实施方案中，确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力的步骤是通过选自包括以下各项的列表的凝血测试来进行的：凝血酶原时间(PT)、活化促凝血酶原激酶时间(aPTT)、狼疮抗凝物测试、纤维蛋白原测定(Clauss和PT衍生的纤维蛋白原方法)、凝血酶时间、凝血因子活性测定(FVIII、FIX、X、XI、XII、XIII、VII、V、II、X)、活化蛋白C抗性(APCR)测定、蛋白C活性测定、蛋白S活性测定、抗凝血酶活性测定和凝血酶生成测定。在特定实施方案中，确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力的步骤是使用基于血凝的方法来确定的，并进一步提供了所述止血障碍的性质的指征，所述方法用于确定纤维蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外诊断从受试者获得的血浆样品中的止血障碍的方法，包括以下步骤：/na)使从所述受试者获得的血浆样品与活性炭接触；/nb)从所述活性炭中回收所述血浆样品；和/nc)确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力；和/nd)基于所述血浆的所述凝固能力，确定所述受试者中止血障碍的存在、进展或严重程度，以及任选地止血障碍的性质。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180206 EP 18155295.11.一种体外诊断从受试者获得的血浆样品中的止血障碍的方法，包括以下步骤：
a)使从所述受试者获得的血浆样品与活性炭接触；
b)从所述活性炭中回收所述血浆样品；和
c)确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力；和
d)基于所述血浆的所述凝固能力，确定所述受试者中止血障碍的存在、进展或严重程度，以及任选地止血障碍的性质。


2.根据权利要求1所述的方法，其中从所述活性炭中回收所述血浆样品的步骤包括使所述血浆样品通过孔径为0.22至0.65μm的过滤器。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中从所述活性炭中回收所述血浆的步骤包括离心步骤。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述活性炭的浓度为至少3mg/ml，优选为至少5mg/ml。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中使所述血浆样品与活性炭接触至少2分钟，优选至少5分钟。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其在步骤(c)之前不包括从所述血浆样品中去除血小板、血小板碎片和残留血细胞中的一种或更多种的附加步骤。


7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力的步骤是通过使所述血浆样品与凝血活化剂接触来进行的。


8.根据权利要求7所述的方法，其中所述凝血活化剂选自由以下组成的组：人钙凝血酶(humancalciumthrombin)、兔或重组人组织因子、合成磷脂、鲁塞尔蝰蛇毒(Russel’svipervenom)、ecarin、textarin或二氧化硅、胶体二氧化硅活化剂、凝血调节蛋白、活化蛋白C、冻干牛凝血酶和凝血酶CBS61.50的生色底物、蛇毒中的因子V活化剂和从蛇毒分离的因子Va依赖性凝血酶原活化剂。


9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力的步骤还包括在步骤(c)之前使所述血浆样品与免疫衰竭的血清或血浆接触。


10.根据权利要求9所述的方法，其中所述免疫衰竭的血清或血浆选自由以下组成的组：因子VIII或IX或X或XI或XII或XIII或VII或V或II缺陷的血清或血浆。


11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中确定在步骤(b)中获得的所述血浆样品的凝固能力的步骤是通过选自包括以下各项的列表的凝血测试进行的：凝血酶原时间(P...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔纳森·杜菲斯，达明·克洛德·约瑟夫·盖尔多夫，琼米歇尔·保罗·尼古拉斯·多格纳，
申请(专利权)人：那慕尔大学ASBL，
类型：发明
国别省市：比利时;BE