本发明专利技术提供了表达HLA‑G4异构体标准蛋白的细胞株，保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:C202014。其能够稳定表达HLA‑G4异构体标准蛋白，能在人类白细胞抗原‑G异构体分子HLA‑G4流式细胞术、免疫印迹、组织及细胞免疫组化、HLA‑G异构体功能研究及特异性抗体开发筛选作为标准参照物等应用。
【技术实现步骤摘要】
表达HLA-G4异构体标准蛋白的细胞株及其应用
本专利技术属于生物工程领域，特别涉及已知7种人类白细胞抗原-G(HLA-G)异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)表达载体构建及稳定表达的细胞株，可作为特定HLA-G异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)流式细胞术、免疫印迹、组织及细胞免疫组化、HLA-G异构体功能研究及特异性抗体开发筛选作为标准参照物等应用。
技术介绍
人类白细胞抗原-G(humanleukocyteantigen-G,HLA-G)基因，全长6.0kb，位于人类第6号染色体短臂远侧6p21.3。在蛋白质翻译过程中，HLA-GmRNA第1外显子编码信号肽，第2、3和第4外显子分别编码细胞外区的α1、α2和α3结构域，第5位外显子编码跨膜区；第6外显子编码仅含6个氨基酸残基的HLA-G分子胞内段；由于外显子6内含有终止密码子，第7外显子不被转录；第8外显子对应于HLA-G基因的3′UTR。HLA-G初始转录产物经选择性剪接，可产生7种成熟mRNA，分别编码7种不同分子量的异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)。HLA-G1是由全长HLA-GmRNA编码，结构上类似于HLAIa抗原分子。HLA-G2缺乏α2结构域；HLA-G3缺乏α2和α3结构域；HLA-G4缺乏α3结构域；HLA-G5及HLA-G6胞外区结构域分别与HLA-G1及HLA-G2相同，但它们由含有内含子4的HLA-GmRNA编码，因内含子4中含有终止密码子，所编码的蛋白分子缺乏由外显子5所编码的跨膜区，形成可溶性HLA-G分子。编码HLA-G7的mRNA由于内含子2中含有终止密码子，胞外区仅含α1结构域及由内含子2所编码的2个氨基酸残基相连(图1)。HLA-G1～-G7异构体分子的分子量分别为39kD、31kD、23kD、30kD、37kD、27kD及16kD。生理情况下，HLA-G分子仅表达在母胎界面的绒毛外滋养层细胞，在维持母胎免疫耐受中起重要作用。病理情况下，HLA-G分子能在多种肿瘤细胞及病毒感染等组织细胞中诱导性表达，与疾病的发生及进展密切相关。目前已广泛认同HLA-G分子是体内一个重要的免疫致耐分子，其免疫抑制功能主要通过结合免疫抑制性受体免疫球蛋白样转录物-2(immunoglobulin-liketranscript-2,ILT2/LILRB1/CD85j)、免疫球蛋白样转录物-4(ILT4/LILRB2/CD85d),传递抑制信号，诱导免疫耐受。具体作用机制有：①与表达在T细胞、NK细胞和B细胞上的ILT2结合，抑制T细胞和NK细胞免疫杀伤活性，及B细胞增殖和抗体分泌等功能。②与树突状细胞(DC)上的ILT2、ILT4结合，抑制DC细胞的成熟和分化，诱导产生耐受性DC细胞。③与骨髓来源抑制性细胞(MDSC)和巨噬细胞(Mφ)上的ILT2、ILT4结合，诱导促炎抗肿瘤的M1向免疫致耐性M2细胞分化。因此，HLA-G分子是机体内一个重要的免疫耐受分子。此外，HLA-G与受体ILT2、ILT4结合，具有分子结构特异性。受体ILT2、ILT4与HLA-G结合的位点HLA-G胞外区α3结构域。ILT2仅结合HLA-G/β2m复合物，而ILT4不仅可以与HLA-G/β2m结合，同时可以与不含β2m的游离HLA-G分子结合。由于HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7在表达机制及分子结构上存在差异，如HLA-G3、-G4、及HLA-G7不含α3结构域，不能与ILT2和ILT4结合。因此，不同HLA-G异构体分子可在病理生理过程中发挥特定的免疫学效应。在不同病理状态下，尤其在肿瘤组织细胞中，HLA-G异构体表达存在广泛的异质性，不同HLA-G分子异构体的表达具有特定的临床意义。分析特定HLA-G异构体分子表达及不同HLA-G异构体分子表达谱，对于阐述特定HLA-G异构体分子的生物学功能及其临床意义具有重要意义。但目前尚无用于检测特定HLA-G异构体分子的抗体。目前已广泛应用，通过免疫组化或免疫印迹检测HLA-G分子表达的抗体4H84，其识别位点位于7种HLA-G异构体分子均具有的胞外区α1结构域，特异性上能够检测含有α1结构域的7种HLA-G异构体分子，在免疫组化中不能区分具体特定HLA-G异构体分子的表达。同时，HLA-G1～-G7异构体分子的分子量分别为39kD、31kD、23kD、30kD、37kD、27kD及16kD，分子量相近的HLA-G异构体分子如HLA-G1(39kD)和HLA-G5(37kD)、HLA-G2(31kD)和HLA-G4(30kD)、HLA-G3(23kD)和HLA-G6(27kD)，以及分子量较小的HLA-G7(16kD)等，由于缺乏特定HLA-G异构体分子的标准参照，在免疫印迹检测中不容易区分特定HLA-G异构体分子的表达。更重要的是，在针对HLA-G异构体抗体研发过程中，HLA-G异构体抗原参照物是特异性抗体筛选的必要条件。因此，建立分别稳定表达7种HLA-G(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)异构体分子的细胞系，作为HLA-G分子检测及特异性抗体筛选的标准参照物，在HLA-G相关基础、临床研究及抗体研发过程中具有重要应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供7种HLA-G异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)稳定表达的肿瘤细胞株，细胞株命名：表达HLA-G1标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G1)，表达HLA-G2标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G2)、表达HLA-G3标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G3)、表达HLA-G4标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G4)、表达HLA-G5标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G5)、表达HLA-G6标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G6)及表达HLA-G7标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G7)。其保藏信息分别为：表达HLA-G1标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G1)，保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO:C202004，保藏时间为2020年1月9日。核苷酸序列为序列表中SeqNo.1.HLA-G1核苷酸序列，氨基酸序列为序列表中SeqNo.2.HLA-G1氨基酸序列。表达HLA-G2标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G2)，保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO:C202012，保藏时间为2020年1月9日。核苷酸序列为序列表中SeqNo.3.HLA-G2核苷酸序列，氨基酸序列为序列表中SeqNo.4.HLA-G2氨基酸序列。表达HLA-G3标准蛋白的K562细胞株(K562-HLA-G3)，保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.表达HLA-G4异构体标准蛋白的细胞株，保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:C202014。/n
【技术特征摘要】
1.表达HLA-G4异构体标准蛋白的细胞株，保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO:C202014。
2.权利要求1所述的表达HLA-G4异构体标准蛋白的细胞株，作为表达HLA-G4异构体标准蛋白，将所表达的HLA-G4异构体标准蛋白作为标准参照物的应用。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜卫华，林爱芬，许惠惠，
申请(专利权)人：台州恩泽医疗中心集团，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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