一种卡贝缩宫素的纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种卡贝缩宫素的纯化方法，包括以下步骤：A)使卡贝缩宫素粗品在乙腈‑纯化水的混合溶液中溶解，过滤，得到第一粗品溶液；B)调节第一粗品溶液的pH值为2.0～2.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第二粗品溶液；C)调节第二粗品溶液的pH值为7.5～8.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第三粗品溶液；D)调节第三粗品溶液的pH值为3.5～4.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到卡贝缩宫素初纯溶液；E)将卡贝缩宫素初纯溶液通过反相色谱法精纯，得到卡贝缩宫素精纯溶液。本发明专利技术提供的上述纯化方法。本发明专利技术提供的上述纯化方法，产物纯度达到99.5％以上，同时收率可达69％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种卡贝缩宫素的纯化方法
本专利技术涉及化合物提纯
，尤其涉及一种卡贝缩宫素的纯化方法。
技术介绍
卡贝缩宫素是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物，在临床上硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。卡贝缩宫素的临床和药理特性与天然产生的催产素类似。与催产素一样，卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。不论是静脉注射还是肌肉注射卡贝缩宫素后，子宫迅速收缩，可在2分钟内达到一个明确强度。单剂量静脉注射卡贝缩宫素对子宫的活性作用可持续大约1个小时，因此足以预防刚生产后的产后出血。产后给予卡贝缩宫素后，在收缩的频率与幅度方面都比催产素长。研究表明，当硬膜外或腰麻下剖腹产术后立即单剂量静脉给予卡贝缩宫素100微克，在预防子宫张力不足和减少产后出血方面，卡贝缩宫素明显优于安慰剂。在产后的早期给予卡贝缩宫素也可以促进子宫的复旧。目前，很少有关于其分离纯化方面的研究报道，特别是规模化生产的方法。卡贝缩宫素常用的纯化方法包括反相高效液相色谱法、凝胶法、离子交换法等，以上方法都很难分离得到高纯度产品(＞99.5％)，或者收率较低(＜50％)，或者纯化精制工艺复杂，成本居高不下。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种卡贝缩宫素的纯化方法，同时具有较高的纯度和收率。本专利技术提供了一种卡贝缩宫素的纯化方法，包括以下步骤：A)使卡贝缩宫素粗品在乙腈-纯化水的混合溶液中溶解，过滤，得到第一粗品溶液；B)调节第一粗品溶液的pH值为2.0～2.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第二粗品溶液；C)调节第二粗品溶液的pH值为7.5～8.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第三粗品溶液；D)调节第三粗品溶液的pH值为3.5～4.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到卡贝缩宫素初纯溶液；E)将卡贝缩宫素初纯溶液通过反相色谱法精纯，得到卡贝缩宫素精纯溶液。本专利技术采用盐析纯化和反相色谱法纯化相互结合的方法对卡贝缩宫素粗品进行纯化处理，能很好的提高卡贝缩宫素的纯度，使纯度达到99.5％以上，而且意外的发现经过盐析的简单处理后，卡贝缩宫素纯化精制的收率提高显著，且纯化工艺更加简单，高效，使生产周期以及成本显著下降。经检测，本专利技术提供的上述纯化方法，产物纯度达到99.5％以上，同时收率可达69％以上。本专利技术对所述的卡贝缩宫素粗品的来源并无特殊限定，优选由液相合成法或固相合成法合成。首先对卡贝缩宫素粗品进行初步提纯，具体的，使卡贝缩宫素粗品在乙腈-纯化水的混合溶液中溶解，过滤，得到第一粗品溶液。所述乙腈-纯化水的混合溶液与卡贝缩宫素的质量比优选为(10～40)：1(mL/g)；进一步优选为30:1(mL/g)。所述乙腈和纯化水的体积比优选为0.8：1～1:1；进一步优选为1:1。本专利技术对所述过滤的方法并无特殊限定，可以为本领域技术人员熟知的过滤方法。本专利技术优选采用水系滤膜进行过滤。滤除不溶物，收集滤液，得到第一粗品溶液。然后采用酸、碱交替调节pH值，进行第二次提纯。利用粗品中的聚合物杂质、部分有关物质、无机盐等杂质与产品在不同酸、碱电离环境下，以及低温的条件下的溶解性差异达到第二次提纯的目的。具体的，调节第一粗品溶液的pH值为2.0～2.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第二粗品溶液。本专利技术优选的，在2～8℃条件下放置2～4h，溶液析出部分灰色沉淀物杂质，过滤，收集滤液即可。上述调节pH值优选采用醋酸和/或三氟乙酸。然后调节第二粗品溶液的pH值为7.5～8.5，更优选，调节至pH值为8.0～8.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第三粗品溶液。本专利技术优选的，在2～8℃条件下放置2～4h，溶液析出部分灰色沉淀物杂质，过滤，收集滤液即可。本专利技术优选的，上述调节pH值优选采用氨水。然后调节第三粗品溶液的pH值为3.5～4.5，更优选，调节pH值至3.5～4.0，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到卡贝缩宫素初纯溶液。本专利技术优选的，在2～8℃条件下放置2～4h，溶液析出部分沉淀物杂质，过滤，收集滤液即可。上述调节pH值优选采用醋酸和/或三氟乙酸。上述醋酸、三氟乙酸的体积浓度优选为0.5％～1.0％。即100mL水中加入0.5～1mL醋酸或三氟乙酸。本专利技术调节pH值的顺序，必须是上述酸、碱、酸的顺序，同时结合pH的具体值以及温度的具体值，才能获得最佳效果，在提高产物纯度的同时，提高产物收率。本专利技术优选的，采用三氟乙酸/氨水/醋酸的顺序调节pH值。体系的pH值优选分别为2.0～2.5/7.5～8.0/3.5～4.0。经过上述优选的盐析处理后将卡贝缩宫素初纯溶液通过反相色谱法精纯，得到卡贝缩宫素精纯溶液。本专利技术中，所述反相色谱法纯化分为1步2个阶段，集纯化脱盐于一体，首先进行无机盐转换，再进行色谱纯化与脱盐。本专利技术优选的，所述反相色谱法中，采用聚合物反相填料为固定相，浓度为5mM～50.0mM的醋酸铵水溶液为A1相，乙腈为B相；A1相采用醋酸调节pH值至2.0～3.5，A2相为纯化水；B相以10％～40％的梯度进行洗脱，洗脱时间为80min。本专利技术中，上述洗脱的程序优选为：洗脱程序为，前40min为A1，B相为10％，后40min为A2，B相10％～40％，洗脱时间为80min。本专利技术优选的，所述通过反相色谱法精纯后，还包括减压浓缩；所述减压浓缩的温度优选为35℃以下，真空度优选为0.08Mpa以上。本专利技术优选的，所述减压浓缩后还包括冻干。本专利技术优选的，所述冻干具体为：预冻至-50～-10℃保持2～4小时，使真空度恒定在0.01～1.00mbar，升温至20～30℃，干燥12～36小时，得到卡贝缩宫素纯品。本专利技术充分发挥了盐析纯化和反相色谱法纯化技术的优点，显著的提高了卡贝缩宫素纯度，可制备出纯度大于99.5％，单个杂质小于0.1％的药用原料药，突破了现有的高纯度的瓶颈。同时，本专利技术因盐析沉淀中去除杂质的效果，减少了精纯次数和步骤，缩短了纯化工艺路线，节约了成本。另外，本专利技术在极大的提高了纯化效率的同时，提高了收率，其纯度高于99.5％时纯化收率大于69％，更加适合于产业化生产，效果更加显著。与现有技术相比，本专利技术提供了一种卡贝缩宫素的纯化方法，包括以下步骤：A)使卡贝缩宫素粗品在乙腈-纯化水的混合溶液中溶解，过滤，得到第一粗品溶液；B)调节第一粗品溶液的pH值为2.0～2.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第二粗品溶液；C)调本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卡贝缩宫素的纯化方法，包括以下步骤：/nA)使卡贝缩宫素粗品在乙腈-纯化水的混合溶液中溶解，过滤，得到第一粗品溶液；/nB)调节第一粗品溶液的pH值为2.0～2.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第二粗品溶液；/nC)调节第二粗品溶液的pH值为7.5～8.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第三粗品溶液；/nD)调节第三粗品溶液的pH值为3.5～4.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到卡贝缩宫素初纯溶液；/nE)将卡贝缩宫素初纯溶液通过反相色谱法精纯，得到卡贝缩宫素精纯溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种卡贝缩宫素的纯化方法，包括以下步骤：
A)使卡贝缩宫素粗品在乙腈-纯化水的混合溶液中溶解，过滤，得到第一粗品溶液；
B)调节第一粗品溶液的pH值为2.0～2.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第二粗品溶液；
C)调节第二粗品溶液的pH值为7.5～8.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到第三粗品溶液；
D)调节第三粗品溶液的pH值为3.5～4.5，在2～8℃条件下，析出固体，过滤，得到卡贝缩宫素初纯溶液；
E)将卡贝缩宫素初纯溶液通过反相色谱法精纯，得到卡贝缩宫素精纯溶液。


2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述乙腈-纯化水的混合溶液与卡贝缩宫素的质量比为(10～40)：1；
所述乙腈和纯化水的体积比为0.8：1～1:1。


3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述步骤B)、D)中，调节pH值采用醋酸和/或三氟乙酸；
所述步骤C)中，调节pH值采用氨水。

【专利技术属性】
技术研发人员：左成，罗磊，赵建波，王彬容，付晓平，钟国庆，黄波，高剑，李元波，袁瑜，
申请(专利权)人：成都诺和晟泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51