基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条制造技术

本实用新型专利技术涉及一种基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条，该试纸条包括：PVC底板、样品垫、NC膜和吸水垫；样品垫和吸水垫分别覆盖在NC膜的两端对应的底板上；所述的NC膜上由样品垫方向向吸水垫方向依次设有与底板端面平行的检测线和质控线，检测线上设有戊唑醇抗原涂层，质控线上设有兔抗鼠IgG抗体涂层；本实用新型专利技术与传统胶体金免疫层析法试纸条相比，具有稳定性好、检测灵敏度高、可实现对目标物的定量检测，适用于现场监测和大规模快速筛查检测。

【技术实现步骤摘要】
基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条
本专利技术涉及农药残留免疫分析
，具体涉及一种基于量子点荧光微球标记抗体的检测戊唑醇的免疫层析试纸条，该方法可以快速定量检测农产品中戊唑醇残留。
技术介绍
戊唑醇(Tebuconazole)是一种羟乙基三唑衍生物，属广谱、高效、低毒、内吸性强的新型三唑类杀菌剂，是甾醇脱甲基化抑制剂，通过破坏和阻止病菌的细胞膜中麦角甾醇的生物合成，使病原菌不能形成细胞膜而致死，能有效防治禾谷类作物的锈病和白粉病；苹果和香蕉的叶斑病、轮纹病和黑星病等病害。然而长期大量地将戊唑醇用于田间病害防治，由于其持效期长，会造成严重的“3R”问题；另外，研究发现戊唑醇对斑马鱼胚胎发育具有一定的致死、致畸和抑制发育等不良影响，对老鼠具有毒性蓄积和遗传效应，美国环保署(EPA)将其归为潜在人类致癌物，因此亟需建立快速、高灵敏检测戊唑醇杀菌剂的方法。目前，检测戊唑醇残留的方法主要有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱质谱联用法(GC/MS)、液相色谱质谱联用技术(LC/MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)等。虽然这些方法较为准确、灵敏和重现性好，但需要复杂的操作过程与技术培训，只有在专业实验室，专门从事仪器分析的人员才能进行检测，不能满足现场的快速、高通量检测，特别是在对大量样品进行低成本快速筛选时，优势不足。免疫层析技术是20世纪80-90年代发展起来的一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析方法，是最常用的即时检测技术(Pointofcaretest,POCT)，该方法因具有通量高、检测快速、成本低且不需要复杂的仪器设备等优势，近年来已被广泛应用到生物医药、农药残留、食品安全检测等领域。胶体金免疫层析试纸条法因具有检测速度快、抗基质干扰能力强、操作简单、无需复杂仪器等优势，是现场快速筛查的首选方法，但该方法存在检测灵敏度不高、人为因素干扰大等缺陷。与传统胶体金标记物相比，荧光标记物具有更高的检测灵敏度，适用于定量分析。基于荧光标记物的免疫层析技术近年来得到了广泛关注，其中量子点具有激发光谱宽、发射光谱窄且对称、高量子产率、摩尔消光系数大、荧光寿命长等优点，是一种具有巨大开发潜力的新型荧光标记材料。量子点微球(Quantumdotsubmicrobeads，QBs)通过将大量的量子点包裹于聚合物材料中，表现出更高的荧光强度，并且提高了方法学的灵敏度。
技术实现思路
本技术的目的在于研发一种操作简单、灵敏度高，适用于农产品中戊唑醇农药残留的现场快速检测与筛查的基于量子点荧光微球免疫层析试纸条。为实现上述目的,本技术采用以下技术方案：一种基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条，包括PVC底板，样品垫、NC膜和吸水垫，其特征在于，NC膜位于PVC底板的中段，样品垫和吸水垫分别覆盖在NC膜的两端对应的底板上；所述的NC膜上由样品垫方向向吸水垫方向依次设有与底板端面平行的检测线和质控线；所述底板为聚氯乙烯材料，样品垫为玻璃纤维膜，NC膜为硝酸纤维素膜，吸水垫为滤纸材质；所述检测线上设有戊唑醇抗原线状涂层，质控线上设有兔抗鼠IgG抗体线状涂层。所述的戊唑醇抗原是戊唑醇半抗原与鸡卵清白蛋白的偶联物，该偶联物的制备方法为本领域的常规方法，如文献““WangYL,XuJL,QiuYLetal.AHighlySpecificMonoclonalAntibodyandSensitiveQuantumDotBeads-basedFluorescenceImmunochromatographicTestStripforTebuconazoleAssayinAgriculturalProducts.[J].JOURNALOFAGRICULTURALANDFOODCHEMISTRY,2019,67(32):9096-9103.”中公开报的的方法制备该偶联物。所述兔抗鼠IgG抗体同样为市售产品，如本申请中所使用的兔抗鼠IgG抗体即购自杭州伊佰新生物技术有限公司。进一步，本申请所提供的的基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条，样品垫需要用封闭缓冲液浸泡30min后，放入37℃烘箱内干燥过夜，最后放入恒温干燥箱内密封保存备用；该封闭缓冲液由0.01MPBS，终浓度2％BSA，终浓度2.5％蔗糖，终浓度0.02％NaN3组成，该缓冲液同样为本领域常规缓冲液，其制备方法参见文献：ZhangD,LiP,LiuW,etal.Developmentofadetector-freesemiquantitativeimmunochromatographicassaywithmajoraflatoxinsastargetanalytes[J].SensorsandActuatorsB:Chemical,2013,185:432-437.中公开的内容。进一步，本申请所提供的的基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条，在NC膜上戊唑醇抗原和兔抗鼠IgG抗体的喷涂浓度为0.6mg/mL和0.8mg/mL，检测线和质控线之间的间隔为7mm，上述喷涂浓度为优选包被浓度，能够提高试纸条的检测灵敏度。本申请中，样品垫长8mm，宽3.5mm；硝酸纤维素膜长25mm，宽3.5mm；吸水垫长17mm，宽3.5mm；在PVC底板上，样品垫，硝酸纤维素膜、吸水垫各交叠区域的长度均为2mm。本申请中，NC膜是指硝酸纤维素膜。本申请提供的一种基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条,操作简便、快速、灵敏度高、成本低,可实现现场检测。与现有技术相比，具有以下优点：(1)本专利技术方法采用量子点荧光微球为信号标签，可克服外界环境对量子点荧光微球的干扰，更重要的是量子点荧光微球粒径较大，表面提供了很多的羧基化位点，可以与抗体、核酸等生物分子进行特异性的连接，只需很少量样品就能检测，可以起到信号放大作用，大大提高了检测灵敏度并且降低了其它物质的非特异性干扰。(2)本专利技术与传统胶体金免疫层析试纸条相比，具有量子点荧光微球标记物稳定性好，检测灵敏度高，可实现对低浓度目标物的定量检测，与胶体金法相比，检测限能提高2-3个数量级。附图说明图1为基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条的示意图；图中，1、PVC底板；2、吸水垫；3、样品垫；4、NC膜；5、检测线(T线)；6、质控线(C线)。图2为基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条的原理图。图3为基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条对加标样品的检测结果图及标准曲线。图4为基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条的特异性检测结果示意图。具体实施方式本实施例给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1戊唑醇量子点荧光微球免疫层析试纸条的制备本实例中，量子点荧光微球免疫层析试纸条是通过如下方法制备、组装的：1.1量子点荧光微球偶联戊唑醇单克隆抗体的制备本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条，包括PVC底板，样品垫、NC膜和吸水垫，其特征在于，NC膜位于PVC底板的中段，样品垫和吸水垫分别覆盖在NC膜的两端对应的底板上；所述的NC膜上由样品垫方向向吸水垫方向依次设有与底板端面平行的检测线和质控线，检测线上设有戊唑醇抗原涂层，质控线上设有兔抗鼠IgG抗体涂层。/n

【技术特征摘要】
1.基于量子点荧光微球的戊唑醇免疫层析试纸条，包括PVC底板，样品垫、NC膜和吸水垫，其特征在于，NC膜位于PVC底板的中段，样品垫和吸水垫分别覆盖在NC膜的两端对应的底板上；所述的NC膜上由样品垫方向向吸水垫方向依次设有与底板端面平行的检测线和质控线，检测线上设有戊唑醇抗原涂层，质控线上设有兔抗鼠IgG抗体涂层。


2.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：张存政，刘贝贝，李盼，许俊丽，王玉龙，张韩晓亚，吴勤，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：新型
国别省市：江苏;32