靶向SREBP1的反义寡核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及与SREBF1前mRNA内含子和外显子序列互补的反义LNA寡核苷酸(寡聚物),其能够抑制SREBP1蛋白质的表达。抑制SREBF1表达对于一系列医学病症是有益的,包括心血管疾病,2型糖尿病,脂肪肝,代谢疾病,和癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向SREBP1的反义寡核苷酸专利
本专利技术涉及与SREBF1前mRNA内含子和外显子序列互补的反义LNA寡核苷酸(寡聚物),其能够抑制SREBP1蛋白质的表达。抑制SREBF1表达对于一系列医学病症是有益的,包括心血管疾病,2型糖尿病,脂肪肝,代谢疾病,和癌症。专利技术背景SREBP1(固醇调节元件结合蛋白-1)是一种属于SREBP家族的转录因子的蛋白。SREBP家族包括三种主要蛋白,SREBP-1a,-1c,和2,由两种基因编码:SREBF1和SREBF2。SREBP-1a和-1c(在本文中统称为SREB1)是经由使用不同启动子和可变剪接自相同基因生成的。SREBP蛋白是牵涉碳水化合物,甘油三酯,脂肪酸,和胆固醇代谢的酶的关键调节物。已知SREBP的过表达是代谢疾病,诸如2型糖尿病,非酒精性脂肪肝病,和心血管疾病的一个风险因子。最近,还已经将SREBP1过表达与细胞生长联系起来,因而提出转录因子活性是癌症的起因(Shaoetal.,CellMetab.2012Oct3；16(4):414-9),与脂质代谢在癌细胞中强烈上调的观察结果一致。SREBP信号传导的小分子干预已经证明SREBP在代谢综合征的病理生理学中的重要作用(综述见Solyal2015)。瘦素缺陷(ob/ob)小鼠具有高肝SREBP1c,而这种小鼠品系中的SREBP1敲除导致与ob/ob/SREBP1+/+同窝幼仔相比降低的从头脂肪生成和降低的脂肪肝,对肥胖和胰岛素抵抗没有影响(Yagahi2002)。对ob/ob小鼠每天注射脂肪抑制素(fatostatin)(SREBP激活的一种小分子抑制剂)达四周导致与对照相比降低的肝脂肪,体重,和血液葡萄糖(Kamisuki2009),指示成年动物中的干预具有与自出生敲除SREBP1不同的效果。注意,脂肪抑制素抑制所有SREBP激活而不是对SREBP1特异性的,提高不想要的副作用的风险。桦木素(betulin)(SREBP成熟的另一种小分子阻断剂)已经报告在疾病的小鼠模型中改善高脂血症和胰岛素抵抗且减少动脉粥样硬化斑块(Tang2010)。看来高SREBP活性是为肿瘤生长维持高脂质供应所需要的,指示肿瘤中的SREBP信号传导的正常化是抗癌症疗法的一个潜在靶。在癌症,诸如前列腺癌,子宫内膜癌,和成胶质细胞瘤中发现独立于系统调节且导致高从头脂肪生成的高SREBP1信号传导。已经证明脂肪抑制素降低胰腺癌细胞存活力和增殖(Siqingaowa2017),并降低小鼠中的前列腺癌细胞异种移植物的肿瘤生长(Li2015)。WO2008/011467涉及据称介导SREBP1的RNA干扰的推定siRNA。US2005/0215504和US2003/02245151涉及MOE缺口体反义化合物和它们抑制人或小鼠SREBP1体外转染测定法的用途。能够将SREBP1表达抑制至少40％的化合物鉴定为优选的。因此,需要能特异性抑制SREBP1的治疗剂。我们筛选了207种靶向小鼠和人SREBP1的LNA缺口体并鉴定出在体外(人和小鼠细胞,经由剥裸(gymnosis))和在体内(小鼠)特别有力且有效特异性靶向SREBP1反义的序列和化合物。测试的化合物是安全的且降低肝,肾,和脂肪SREBP表达。我们发现不同化合物具有不同水平的肝,肾和脂肪中的活性。专利技术目的专利技术人鉴定了对于体外或体内反义抑制特别有效的SREBP1转录物(SREBF1)区域,并提供靶向SREBF1前mRNA或成熟mRNA的这些区域的反义寡核苷酸,包括LNA缺口体寡核苷酸。本专利技术鉴定抑制人SREBP1的寡核苷酸,其在治疗一系列医学病症中是有用的,包括心血管疾病,2型糖尿病,脂肪肝,代谢疾病,和癌症。专利技术概述本专利技术提供一种长度为10-30个核苷酸的反义寡核苷酸,其中所述反义寡核苷酸包含长度为10-30个核苷酸的连续核苷酸序列,其中该连续核苷酸序列与SEQIDNO:14或SEQIDNO:15至少90％互补,其中该反义寡核苷酸能够抑制表达人SREBP1的细胞中的人SREBP1的表达。在一些实施方案中,本专利技术的反义寡核苷酸能够抑制表达所述SREBP1的细胞中的SREBP1,诸如SREBP1c的表达。本专利技术提供一种长度为10-30个核苷酸的反义寡核苷酸,其中所述反义寡核苷酸包含长度为10-30个核苷酸的连续核苷酸序列,其中该连续核苷酸序列与SEQIDNO:14或SEQIDNO:15至少90％互补,其中该反义寡核苷酸能够抑制表达人SREBF1转录物的细胞中的人SREBF1转录物的表达。如本文中提到的或要求保护的本专利技术的寡核苷酸可以是药学可接受盐的形式。本专利技术提供一种缀合物,其包含依照本专利技术的寡核苷酸,和至少一个共价附着至所述寡核苷酸的缀合物模块。本专利技术提供一种药学组合物,其包含本专利技术的寡核苷酸或缀合物和药学可接受稀释剂,溶剂,载剂,盐和/或佐剂。本专利技术提供一种用于调控表达SREBF1的靶细胞中的SREBF1表达的体内或体外方法,所述方法包含以有效量将本专利技术的寡核苷酸或缀合物或药学组合物施用于所述细胞。本专利技术提供一种用于治疗或预防疾病的方法,其包含将治疗或预防有效量本专利技术的寡核苷酸,缀合物或药学组合物施用于罹患或易感该疾病的受试者。在一些实施方案中,该疾病选自由心血管疾病,2型糖尿病,脂肪肝,代谢疾病,和癌症组成的组。本专利技术提供本专利技术的寡核苷酸,缀合物或该药学组合物,其供药物中使用。本专利技术提供本专利技术的寡核苷酸,缀合物或该药学组合物,其供治疗或预防选自由心血管疾病,2型糖尿病,脂肪肝,代谢疾病,和癌症组成的组的疾病中使用。本专利技术提供本专利技术的寡核苷酸,缀合物或药学组合物用于制备用于治疗或预防选自由心血管疾病,2型糖尿病,脂肪肝,代谢疾病,和癌症组成的组的疾病的药物的用途。附图简述图1:以单一浓度在A549,HeLa和RAW264.7细胞系中测试各种靶向人和小鼠SREBF1mRNA的反义寡核苷酸的体外功效。图2:以单一浓度在A549和HeLa细胞系中靶向人SREBF1mRNA的反义寡核苷酸的体外功效的比较显示较好的相关性。突显了两种具有非常有效的靶向的基序。图3:在A549细胞系中在体外对靶向人(和小鼠)SREBF1mRNA的选定寡核苷酸测试浓度依赖性效力和功效。图4:在HeLa细胞系中在体外对靶向人(和小鼠)SREBF1mRNA的选定寡核苷酸测试浓度依赖性效力和功效。图5:在RAW264.7细胞系中在体外对靶向(人和)小鼠SREBF1mRNA的选定寡核苷酸测试浓度依赖性效力和功效。图6:在RAW264.7细胞系中在体外对靶向小鼠SREBF1mRNA的选定寡核苷酸测试浓度依赖性效力和功效。图7:小鼠体内功效:静脉内IV(尾静脉)处理16天后小鼠组织中的剩余SREBF1mRNA转录物。定义在本说明书中,单独或组合的术语“烷基”表示具有1至8个碳原子的直链或支链烷基基团,特别是具有1至6个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长度为10-30个核苷酸的反义寡核苷酸或其药学可接受盐,其中所述反义寡核苷酸包含长度为10-30个核苷酸的连续核苷酸序列,其中该连续核苷酸序列与SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15至少90％互补,其中该反义寡核苷酸能够抑制表达人SREBF1的细胞中的人SREBF1的表达。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180118 EP 18152299.6;20180604 EP 18175692.51.一种长度为10-30个核苷酸的反义寡核苷酸或其药学可接受盐,其中所述反义寡核苷酸包含长度为10-30个核苷酸的连续核苷酸序列,其中该连续核苷酸序列与SEQIDNO:14或SEQIDNO:15至少90％互补,其中该反义寡核苷酸能够抑制表达人SREBF1的细胞中的人SREBF1的表达。


2.依照权利要求1的反义寡核苷酸,其中该连续核苷酸序列与SEQIDNO:14或SEQIDNO:15完全互补。


3.依照权利要求1的反义寡核苷酸,其中该连续核苷酸序列与SEQIDNO:16完全互补。


4.依照权利要求1的反义寡核苷酸,其中该连续核苷酸序列与SEQIDNO:17或SEQIDNO:18完全互补。


5.依照权利要求1-4任一项的反义寡核苷酸,其中该反义寡核苷酸是包含式5’-F-G-F’-3’的连续核苷酸序列的缺口体寡核苷酸,其中F和F’区独立包含1-8个糖修饰的核苷,且G是能够募集RNA酶H的5-16个核苷的区域。


6.依照权利要求5的反义寡核苷酸,其中F和F’区的糖修饰的核苷独立选自由2’-O-烷基-RNA,2’-O-甲基-RNA,2’-烷氧基-RNA,2’-O-甲氧基乙基-RNA,2’-氨基-DNA,2’-氟-DNA,阿拉伯糖核酸(ANA),2’-氟-ANA和LNA核苷组成的组。


7.依照权利要求5或6的反义寡核苷酸,其中G区包含5-16个连续DNA核苷。


8.依照权利要求1-7任一项的反义寡核苷酸,其中该反义寡核苷酸是LNA缺口体寡核苷酸。


9.依照权利要求5-8任一项的反义寡核苷酸,其中该LNA核苷是β-D-氧基LNA核苷。


10.依照权利要求1-9任一项的反义寡核苷酸,其中该连续核苷酸序列之间的核苷间连接是硫代磷酸酯核苷间连接。


11.依照权利要求1-10任一项的反义寡核苷酸,其中该寡核苷酸包含选自由SEQIDNO:1,SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:7和SEQIDNO:8组成的组的连续核苷酸序列。


12.依照权利要求1-11任一项的反义寡核苷酸,其中该寡核苷酸包含下述连续核苷酸序列或由其组成:
GACgggtacatCTT(SEQIDNO:1)；
GGAcgggtacatcTT(SEQIDNO:2)；
CAgtcattgcattCAG(SEQIDNO:3)；
ACagtcattgcattCAG(SEQIDNO:4)；
AACagtcattgcattCA(SEQIDNO:7)；
AGATgtttattttccttaAG(SEQIDNO:8),
其中大写字母代表LNA核苷,小写字母代表DNA核苷。


13.依照权利要求1-12任一项的反义寡核苷酸,其中该寡核苷酸包含下述连续核苷酸序列或由其组成:
GACgggtacatCTT(SEQIDNO:1)；
GGAmcgggtacatcTT(SEQIDNO:2)；
CAgtcatt...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·M·W·林德霍姆，S·施密特，
申请(专利权)人：哥本哈根罗氏创新中心，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK