一种核桃低聚肽粉及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种核桃低聚肽粉及其制备方法和用途。所述低聚肽粉肽含量在80wt％以上，其中95％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton。所述方法包括使用高效逆流提取法提取核桃蛋白，过滤、酶解，再将蛋白酶解液依次经过微滤膜与超滤膜高效分离纯化，最后浓缩喷雾，得到低聚肽粉。所述核桃低聚肽粉有改善睡眠作用、酒精性脂肪肝的保护作用、抑制脂肪的吸收、调节肠道pH值以改善有益菌群、增强营养吸收的功效。

【技术实现步骤摘要】
一种核桃低聚肽粉及其制备方法和用途
本专利技术涉及一种高纯度、低分子量的核桃低聚肽肽产品。本专利技术还涉及到核桃肽的制备并酶解，生成低聚核桃肽粉的制备方法，该肽粉可用作食品、保健食品或者药品。
技术介绍
核桃(JuglansregiaL)又名胡桃，属于四大坚果之一，具有很高的营养药用价值。在我国古医药书籍中,有明确记载,李时珍《本草纲目》记述“补气养血、润燥化痰、益命门、利三焦，温肺润肠。治肺润肠。治虚寒喘咳，腰脚重疼，心腹疝痛，血痢肠风，散肿毒，……”宋刘翰《开宝本草》载“胡桃(即核桃)味甘、平、无毒。食之令人肥健，润肌黑发，取瓤烧令黑，未断烟，和松脂，研傅瘰疬疮”。唐化孟诜《食疗本草》中说，核桃仁能“通经脉、黑须发，常服骨肉细腻光润”。崔禹锡的《食经》说它“多食利小便，去五痔”。《医林纂要》一书的评价是，可以“补肾，润命门，固精，润大肠，通热秘，止寒泻虚泻。”等等。核桃中含有丰富的蛋白质、脂肪等营养成分，含量比较均衡，属于比较理想的高蛋白、高脂肪的食物，据报导，核桃仁中含有高达52％-70％的油脂，其中大部分为不饱和脂肪酸，另外还含有约24％的蛋白质，12％-16％的碳水化合物，1.5％-2％的纤维素，以及1.7％-2％的矿物质。核桃中富含人体必需的氨基酸，且氨基酸比例比较合理，其中对人体生理作用有着重要功能的谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸含量均较高，其中谷氨酸还是影响人体特别是青少年智力及记忆发育的重要功能物质。为了获得比核桃原蛋白在营养、功能性及生物活性上更加优良的低聚肽粉，已尝试了多种制备方法。<br>专利CN101228918A将核桃粕粉碎，超声波法提取核桃蛋白，将核桃蛋白真空干燥后，再使用蛋白酶进行酶解，离心，使用透析袋对上清液进行透析，经浓缩透析液并真空干燥得到含量在60％～80％的肽粉。该方法操作复杂，肽含量较低，肽分子量的分布也不明确，同时使用超声提取蛋白，透析袋进行精致，无法进行大规模制备。专利CN102406050A使用碱提酸沉方法提取蛋白质，经冷冻干燥得到核桃蛋白粉，蛋白粉经酶解后，用300Mpa高压处理10min，冷冻干燥得核桃肽粉。此制备方法需超高压设备和冷冻干燥机，成本高，不适宜大规模生产；该专利技术专利虽然提供了该法制备的核桃肽粉的分子量分布，但产品中肽含量不明确。专利CN103103244B使用碱提酸沉的方法提取蛋白质，并用微波结合超声波处理后，酶解得到多肽粉。该法仍不适用大规模生产，并且没有对酶解产品中肽含量进行测定。专利CN104293870A先使用CO2超临界萃取仪去除油脂后得到的核桃粕，碱提酸沉后喷雾得到核桃蛋白粉，再将蛋白粉制成悬浊液并煮沸破坏蛋白质的结构，使用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶分段四步酶解核桃蛋白液，经5000Dalton或者8000Dalton超滤膜精制后使用离子交换树脂脱盐，最后喷雾干燥得到核桃肽粉。此专利涉及到去除油脂时使用超临界萃取仪，增加成本，不易于大生产；涉及到4种酶分段四步酶解，步骤繁琐、成本高；涉及到酶解完成后，未经过微滤膜除杂，直接进行超滤膜，造成超滤膜易阻塞，超滤时间延长，降低多肽收率，同时缩短超滤膜使用寿命；此专利未涉及到多肽产品中肽的百分含量和肽的分子量分布。可见，以上核桃多肽的制备条件苛刻，工艺步骤繁琐，很难实现大规模生产，因此寻找一套工艺简单、低成本、高含量、较高活性的核桃多肽的制备方法已经成为寻找大规模生产的研究热点之一。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种高纯度、低分子量的核桃低聚肽粉。本专利技术的另一目的是提供了一种高纯度、低分子量的核桃低聚肽粉的制备方法。本专利技术的另一目的是提供了含有本专利技术核桃低聚肽粉的药物和食品组合物。本专利技术的另一目的是提供了本专利技术核桃低聚肽粉用于改善或者治疗睡眠障碍、提高睡眠质量、镇静、助眠的食品、保健食品或药品的应用。本专利技术的另一目的是提供了本专利技术核桃低聚肽粉用于制备调节肠道有益菌群、提高肠胃动力、促进营养吸收的食品、保健食品或药品的应用。本专利技术的另一目的是提供了本专利技术核桃低聚肽粉用于制备减少机体脂肪的摄入、提高脂肪代谢的食品、保健食品或药品的应用，优选用于保护酒精性或非酒精性脂肪肝的食品、保健食品、药品或者化妆品的应用。本专利技术的目的是通过下述技术方案实现的：一种核桃低聚肽粉，采用GB/T22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量在80wt％以上，其中95％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton，其分子量分布如下：数均分子量范围：170～3000重均分子量范围：180～4000所述核桃低聚肽粉是通过下述方法制备得到的：(1)核桃粕的预处理：将核桃去壳、冷榨脱油，得到脱脂核桃粕。(2)逆流提取法提取蛋白质：将一定量脱脂后的核桃粕(记录为A)，与水按重量比为1:5～1:15混合，调节pH至9～11于室温提取1～2h；提取完成后，过滤，滤渣进行二次提取，滤液倒入等量的核桃粕(记录为B)，调节pH至9～11于室温提取1～2h；B完成第一次提取后，滤液待用，滤渣继续进行第二次提取；A完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入等量的核桃粕(记录为C)，调节pH至9～11于室温提取1～2h；B完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入C完成第一次提取的滤渣中提取1～2h，而C第一次提取的滤液待用；样品C完成第二次提取后，滤渣弃去，滤液待用；最后合并以上待用滤液，调节pH为3～5，静置0.5～2h，弃去上清液，最后往沉淀物中加入体积比为1:10～1:20的水，搅拌均匀。(3)蛋白酶解：将上述核桃蛋白液加热至40～55℃，将pH值调节至中性，加入核桃粕重量的0.5～2％生物酶，搅拌酶解3～6h后，煮沸灭活30min，离心，上清液即为蛋白酶解液。(4)分离纯化：将蛋白酶解液使用孔径为0.1～0.5μm的微滤膜进行过滤，透过液再经2000～20000Dalton超滤膜处理后，在50～80℃下浓缩至固含为3～5wt％时，进行喷雾干燥，进口温度为140～160℃，出口温度为55～65℃，得到高纯度、低分子量的淡黄色核桃肽粉，产率可达20～30wt％。(5)肽含量与分子量分布测定：采用GB/T22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量在80wt％以上，其中95％以上的核桃肽的分子量小于1500Dalton。所述生物酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胃蛋白酶(酶活力≥50万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用中性蛋白酶或复合酶，所述复合酶的中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比为1:1，中性蛋白酶的活力为30万u/g，木瓜蛋白酶的活力为50万u/g。一种组合物，其含有本专利技术所述的核桃低聚肽粉和，药物或食品上可接受的助剂。根据现有技术，本专利技术可将所述的组合物制备成本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核桃低聚肽粉，其特征在于：采用GB/T 22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量在80wt％以上，其中95％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton，其分子量分布如下：/n分子量Dalton分布/n

【技术特征摘要】
20190610 CN 20191049837771.一种核桃低聚肽粉，其特征在于：采用GB/T22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量在80wt％以上，其中95％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton，其分子量分布如下：
分子量Dalton分布



优选地，肽含量在81wt％以上，其中97％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton；或肽含量在81.3wt％以上，其中96％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton；
更优选地，肽含量在80～81.3wt％以上，其中95％～97％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton；
最优选地，肽含量在81wt％，其中97％核桃肽的分子量小于1500Dalton；或肽含量在81.3wt％以上，其中96％以上核桃肽的分子量小于1500Dalton。


2.权利要求1所述核桃低聚肽粉的制备方法，其特征包括下述步骤：将冷榨脱脂后的核桃粕，使用高效逆流提取法提取蛋白质，过滤、酶解，再将蛋白酶解液依次经过微滤膜与超滤膜高效分离纯化，最后浓缩喷雾，得到核桃低聚肽粉。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
核桃粕的预处理：将核桃去壳、冷榨脱油，得到脱脂核桃粕；
高效逆流提取法提取蛋白质：将一定量脱脂后的核桃粕，记录为A，与水按重量比为1:5～1:15混合，调节pH至9～11于室温提取1～2h；提取完成后，过滤，滤渣进行二次提取，滤液倒入等量的核桃粕，记录为B，调节pH至9～11于室温提取1～2h；B完成第一次提取后，滤液待用，滤渣继续进行第二次提取；A完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入等量的核桃粕，记录为C，调节pH至9～11于室温提取1～2h；B完成二次提取后，滤渣弃去，滤液倒入C完成第一次提取的滤渣中提取1～2h，而C第一次提取的滤液待用；样品C完成第二次提取后，滤渣弃去，滤液待用；最后合并以上待用滤液，调节pH为3～5，静置0.5～2h，弃去上清液，最后往沉淀物中加入体积比为1:10～1:20的水，搅拌均匀，得到核桃蛋白液；
蛋白酶解：将上述核桃蛋白液加热至40～55℃，将pH值调节至中性，加入核桃粕重量0.5～2％的生物酶，搅拌酶解3～6h后，煮沸灭活30min，离心，上清液即为蛋白酶解液。
分离纯化：将蛋白酶解液使用孔径为0.1～0.5μm的微滤膜进行过滤，透过液再经2000～20000Dalton超滤膜处理后，在50～80℃下浓缩至固含为3～5wt％时，进行喷雾干燥，进口温度为140～160℃，出口温度为55～65℃，得到核桃低聚肽粉，产率20～30wt％。


4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述生物酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胃蛋白酶(酶活力≥50万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用中性蛋白酶或复合酶，所述复合酶的中性蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比为1:1，中性蛋白酶的活力为30万u/g，木瓜蛋白酶的活力为50万u/g。


5.一种权利要求1所述的核桃低聚肽粉，其特征在于是由权利要求1-4任一所述的方法制备得到。


6.根据权利要求5所述的核桃低聚肽粉，其特征在于当采用GB/T22492-2008附录A与附录B的检测方法，测得肽含量为81wt％，小于1500Dalton分子量占97％时...

【专利技术属性】
技术研发人员：王昭日，杨进平，崔玉梅，李易达，
申请(专利权)人：杏辉天力杭州药业有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33