一种协同抑制肝癌索拉非尼耐药的药物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及药物领域，具体是蜂毒素和蟾毒灵联用在制备肝癌治疗药物中的应用，以及一种协同抑制肝癌索拉非尼耐药的药物组合物及其应用。本发明专利技术优点在于：蜂毒素和蟾毒灵能通过不同的机制发挥良好的抗肝癌作用，两者的联合应用能够提高抗肝癌疗效，发挥协同抗肝癌索拉非尼耐药作用，比单药使用效果更佳。

【技术实现步骤摘要】
一种协同抑制肝癌索拉非尼耐药的药物组合物及其应用
本专利技术涉及药物领域，具体地说，是一种协同抑制肝癌索拉非尼耐药的药物组合物及其应用。
技术介绍
原发性肝癌是受到全球关注的重大癌症之一，在全球肿瘤相关原因死亡中位列第3位。在我国，原发性肝癌的发病率在各类肿瘤中排第4位，死亡率位列第3位，新发病例和死亡病例数量均占全球总数的一半以上，是一个肝癌大国。目前，肝癌的治疗手段有肝移植、肝癌切除术、肝动脉化疗栓塞术、立体定向放疗、射频消融术及分子靶向治疗等。大多数肝癌患者在诊断时已经处于中晚期，手术切除仅是不到20％患者的选择。索拉非尼是美国FDA推荐的用于肝癌的分子靶向一线治疗药物，主要用于中晚期肝癌患者的治疗。然而，临床研究结果显示，与对照组比较，索拉非尼仅能延长约3个月的中位生存时间(7.9个月vs10.7个月；P<0.001)，仅对30％患者有效，且有手足综合征、腹泻等诸多副作用。此外，索拉非尼还容易出现耐药，获得性耐药通常在6个月内发生。在我国，中医药在肝细胞癌的治疗中发挥着极为重要的作用，具有增效减毒、调节免疫力、防治肝癌复发转移等作用，有效改善肝细胞癌患者的临床症状、提高生活质量。蟾酥是中华大蟾蜍(BufobufogargarizansCantor)或黑框蟾蜍(BufomelanostictusSchneider)耳后腺及表皮腺体的分泌物，呈白色乳状液体或浅黄色浆液。《本草汇言》认为蟾酥能“化解一切瘀郁壅滞诸疾，如积毒、积块、积胀、内疔痈肿之证，有攻毒拔毒之功”，《本草纲目》则记载蟾酥能“治一切恶肿”，是中医临床上重要的抗肿瘤药物。现代研究表明，中药蟾酥中的重要活性成分之一蟾毒灵(Bufalin)具有较强的抗肝癌生长及转移的作用，可以调节线粒体这一细胞内“能量供应站”及肿瘤转移“加速器”如PI3K/Akt信号通路、Wnt/β-catenin信号通路等环节。此外，蟾毒灵可以通过内质网应激促进肝癌细胞的凋亡，内质网应激特别是PERK/eIF2α/CHOP通路参与了蟾毒灵诱导的自噬反应，通过AMPK/mTOR/p70S6K-4EBP-1通路诱导肝癌细胞的自噬，并作用于细胞核，干扰其转录调控。蜂毒素(Melittin)，又名蜂毒肽，由Habermann等最早从欧洲蜜蜂(ApisMellifera)的毒液中分离出来，占蜂毒干重的50％以上，由26个氨基酸(H-Gly-Ile-G1y-Ala-Val-Leu-Lys-Val-Leu-Thr-Thr-Gly-Leu-Pro-Ala-Leu-Ile-Ser-Tyr-Ile-Lys-Arg-Lys-Arg-Gin-Gin-NH2)组成，主要通过直接抑制细胞运动分子Rac1信号通路、VEGF信号通路等肿瘤侵袭的作用。目前，针对索拉非尼耐药肝癌的治疗迫切需要新的治疗药物。但是关于蜂毒素和蟾毒灵联合应用提高索拉非尼耐药肝癌疗效，发挥协同抗索拉非尼耐药肝癌作用目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术中的不足，提供蜂毒素和蟾毒灵联用在制备肝癌治疗药物中的应用，以及一种协同抑制肝癌索拉非尼耐药的药物组合物及其应用。本专利技术的第一方面，提供蜂毒素和蟾毒灵联用在制备肝癌治疗药物中的应用。进一步的，所述的肝癌为索拉非尼耐药肝癌。进一步的，所述的药物中蜂毒素和蟾毒灵的摩尔比为5:1。进一步的，所述的应用为蜂毒素和蟾毒灵在制备协同诱导肝癌细胞凋亡的药物中的应用。进一步的，所述的应用为蜂毒素和蟾毒灵在制备协同抑制肝癌肿瘤体积增长的药物中的应用。本专利技术的第二方面，提供一种协同抑制肝癌索拉非尼耐药的药物组合物，所述的药物组合物包括蜂毒素和蟾毒灵。进一步的，所述的药物组合物还包括其他药学上可以接受的辅料或载体。进一步的，所述的药物组合物中蜂毒素和蟾毒灵的摩尔比为5:1。本专利技术的第三方面，提供一种如上所述的药物组合物在制备肝癌治疗药物中的应用。进一步的，所述的肝癌为索拉非尼耐药肝癌。本专利技术优点在于：蜂毒素和蟾毒灵能通过不同的机制发挥良好的抗肝癌作用，两者的联合应用能够提高抗肝癌疗效，发挥协同抗肝癌索拉非尼耐药作用，比单药使用效果更佳。附图说明图1.蟾毒灵对SMMC-7721-R细胞的增殖抑制作用。图2.蜂毒素对SMMC-7721-R细胞的增殖抑制作用。图3.蜂毒素和蟾毒灵对SMMC-7721-R细胞的半数抑制浓度。注：直方图中的数据为平均值±标准差；**P<0.01，***P<0.001。图4.蜂毒素和蟾毒灵联合作用于SMMC-7721-R细胞的综合指数图。注：综合指数<1表示两种药物有协同效应，综合指数＝1表示两种药物有相加效应，综合指数>1表示两种药物有拮抗效应。图5.蜂毒素和蟾毒灵合用对SMMC-7721-R的凋亡的影响。注：A，流式细胞术检测结果；B，凋亡率所占比例；直方图中的数据为平均值±标准差；**P<0.01，***P<0.001。图6.蜂毒素和蟾毒灵对肝癌荷瘤裸鼠皮下瘤的抑制作用；注：趋势图中的数据为平均值±标准差；*P<0.05，**P<0.01。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例1：蜂毒素和蟾毒灵单药对SMMC-7721-R的杀伤作用细胞株索拉非尼获得性耐药人肝癌细胞株：SMMC-7721-R，构建完成后保存于解放军中医肿瘤研究所(LiuDong,FanYifu,LiJun,ChengBinbin,LinWanfu,LiXiaoyan,DuJuan*,LingChangquan*.InhibitionofcFLIPovercomesacquiredresistancetoSorafenibviareducingERstress-relatedautophagyinhepatocellularcarcinoma.OncolRep2018；40(4):2206-14.)。1.铺板：取正常生长的SMMC-7721-R细胞，胰酶消化、离心(1000rpm,5min)后，用细胞计数板在显微镜下计数；稀释细胞浓度至5.0×104个/mL的细胞悬液，将其加入96孔板(100μL/孔)，置于细胞培养箱(37℃，5％CO2)中，孵育12h。2.加药：12h细胞贴壁后，用含10％FBS的DMEM稀释至浓度梯度，每孔加100μL样品溶液，每组设6个复孔；设无细胞孔作为空白孔和有细胞但不加任何处理的对照孔，边缘用PBS填充(100μL/孔)。3.将96孔板在细胞培养箱(37℃，5％CO2)中孵育(24h、48h和72h)，定期观察细胞变化。4.配制CCK-8检测液，新鲜含10％FBS的DMEM中加入10％的CCK-8试剂；在不同的时间节点(24h、48h和72h)，将96本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.蜂毒素和蟾毒灵联用在制备肝癌治疗药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.蜂毒素和蟾毒灵联用在制备肝癌治疗药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的蜂毒素和蟾毒灵联用在制备肝癌治疗药物中的应用，其特征在于，所述的肝癌为索拉非尼耐药肝癌。


3.根据权利要求1所述的蜂毒素和蟾毒灵联用在制备肝癌治疗药物中的应用，其特征在于，所述的药物中蜂毒素和蟾毒灵的摩尔比为5:1。


4.根据权利要求1所述的蜂毒素和蟾毒灵联用在制备肝癌治疗药物中的应用，其特征在于，所述的应用为蜂毒素和蟾毒灵在制备协同诱导肝癌细胞凋亡的药物中的应用。


5.根据权利要求1所述的蜂毒素和蟾毒灵联用在制备肝癌治疗药物中的应用，其特征在于，所述的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄念，凌昌全，王丽娜，杜娟，何煜宇，干正，王曼，阮亦，贺海威，
申请(专利权)人：上海长海医院，
类型：发明
国别省市：上海;31