用于改善CAR-T细胞功能的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及包含CAR‑T细胞和GSK3β抑制剂的组合物和试剂盒，包括此类组合物和/或试剂盒在治疗诸如癌症等的疾病中的使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于改善CAR-T细胞功能的组合物及其用途相关申请的交叉引用本专利技术要求2017年11月20日提交的美国临时申请US62/588,519的优先权，出于所有目的，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。
本文公开的内容涉及用于改善表达受体蛋白的基因修饰的或嵌合的抗原受体T细胞(例如，CAR-T)的功能的组合物和方法，所述组合物和方法可用于多种治疗应用，例如肿瘤的治疗。
技术介绍
利用表达嵌合抗原受体的工程化T细胞(CAR-T)作为针对恶性肿瘤的免疫治疗策略已成为成功治疗外周液体肿瘤的标志。但是，CAR-T疗法在实体肿瘤治疗中显示出混合反应。过继性T细胞疗法的成功取决于治疗性T细胞容易获得抗原源和协同刺激信号，这会产生强大的活化模式和强烈的细胞毒性作用，例如在血液肿瘤中或在治疗高度免疫原性肿瘤(例如黑色素瘤)的过程中，CAR-T细胞暴露于淋巴结中大量的恶性B细胞。相反，在实体肿瘤的CAR-T治疗期间，由于有限地暴露于肿瘤抗原而导致T细胞弱活化，进而导致免疫反应不稳定、克隆扩增贫血和克隆提早收缩。本领域采用了各种方法来克服克隆收缩和弱T细胞活化这一问题，并在一定程度上取得了成功。例如，将CD28信号传导分子附加到CAR构建体的细胞内部分以设计所谓的第二代CAR-T细胞，以克服克隆收缩、促进快速增殖和克服细胞因子缺乏。随着时间的流逝，人们观察到这种修饰并没有克服将CAR-T用于实体肿瘤的所有障碍。人们已对CAR-T细胞进行了进一步修饰以创建添加有诸如41BB和/或OX40的协同刺激分子的“第三代”CAR。另外，患者通常接受IL2治疗，以保持转移的T细胞的存活和功能，这导致治疗性T细胞不受控制地产生细胞因子。尽管这些方法在实体肿瘤的治疗中已经能够在一定程度上增强T细胞的活化，但是仍然需要进一步创新来完全克服克隆收缩并促进T细胞的快速增殖和活化。本文提供了这样的方法。
技术实现思路
本文公开的内容涉及用于改善CAR-T疗法的组合物和方法。本领域已认识到阻碍CAR-T细胞免疫疗法在实体肿瘤中成功的一个主要障碍是弱抗原暴露，导致CAR-T细胞活化不足，从而伴随产生弱的抗肿瘤免疫反应，本专利技术提供了克服CAR-T疗法中现有障碍的组合物和方法。具体而言，本文所述的组合物和方法克服了第二代CAR中CD28和其它协同刺激信号部分的许多限制，以及与补充IL2疗法相关的细胞毒性。在各种实施方式中，本文提供一种用于体外扩增T细胞群的方法，包括使T细胞群与GSK3β抑制剂接触。在各种实施方式中，首先用编码嵌合抗原T细胞受体的核酸转导T细胞。在各种实施方式中，T细胞来源于哺乳动物。在各种实施方式中，哺乳动物是人。在各种实施方式中，该方法进一步包括使转导的细胞与肿瘤抗原接触。在各种实施方式中，本文提供一种用于体外扩增T细胞群的方法，包括：从受试者体内分离出包含所述T细胞的样品；使用编码嵌合抗原受体蛋白的核酸转导所述T细胞群，所述嵌合抗原受体蛋白包含与肿瘤抗原结合的分子；以及，使转导的T细胞与GSK3β抑制剂接触。在各种实施方式中，该方法进一步包括使转导的T细胞与肿瘤抗原接触。在各种实施方式中，T细胞同时与GSK3β抑制剂和肿瘤抗原接触。在各种实施方式中，用编码包含白介素13或其变体或其片段的嵌合抗原受体蛋白的核酸转导T细胞(IL13CAR-T)。在各种实施方式中，核酸编码白介素13变体IL13.E13K.R109K或其片段。在各种实施方式中，核酸编码白介素13的包含如下结构域或融合蛋白的片段，所述结构域与白介素13受体或其胞外结构域结合，所述融合蛋白包含白介素13受体或其胞外域的融合蛋白。在各种实施方式中，肿瘤抗原包含白介素13受体(IL13R)或其变体。在各种实施方式中，肿瘤抗原包含白介素13受体的阿尔法(α)链(IL13Rα)或其变体的阿尔法(α)链。在各种实施方式中，GSK3β抑制剂是(a)选自SB216763、1-Azakenpaullone、TWS-119或6-溴靛红-3’-肟(BIO)的化学试剂；和/或(b)选自微小RNA(miRNA)，小干扰RNA(siRNA)、DNA定向的RNA干扰(ddRNAi)寡核苷酸、反义寡核苷酸或其组合的遗传试剂。在各种实施方式中，T细胞是辅助T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞、天然杀伤性T细胞或γδT细胞。在各种实施方式中，将扩增的T细胞随后施用回至患者以治疗疾病。在各种实施方式中，该疾病是癌症。在各种实施方式中，所述癌症是实体肿瘤。在各种实施方式中，所述肿瘤表达肿瘤抗原。在各种实施方式中，本文提供一种组合物，其包含所述嵌合抗原受体蛋白(CAR-T细胞)和GSK3β抑制剂。在各种实施方式中，嵌合抗原受体与肿瘤抗原结合。在各种实施方式中，T细胞表达包含白介素13或其变体或其片段的嵌合抗原受体(IL13CAR-T)。在各种实施方式中，T细胞表达包含白介素13变体IL13.E13K.R109K的嵌合抗原受体蛋白。在各种实施方式中，GSK3β抑制剂是小分子或遗传试剂。在各种实施方式中，GSK3β抑制剂是如下小分子或遗传试剂，所述小分子是SB216763、1-Azakenpaullone、TWS-119或6-溴靛红-3’-肟(BIO)；所述遗传试剂是siRNA、miRNA、反义寡核苷酸、ddRNAi或GSK3的显性负抑制剂(GSK3DN)。在各种实施方式中，GSK3β抑制剂是选自微小RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、DNA定向的RNA干扰(ddRNAi)寡核苷酸、反义寡核苷酸或其组合、和GSK3的显性负等位基因(GSK3DN)的遗传试剂。在各种实施方式中，本文提供一种单独施用的制剂，其包含表达嵌合抗原受体蛋白的T细胞(CAR-T细胞)和GSK3β抑制剂。在各种实施方式中，GSK3β抑制剂是如下小分子或如下遗传试剂，所述小分子是SB216763、TWS-119、1-Azakenpaullone或6-溴靛红-3’-肟(BIO)；所述遗传试剂是siRNA、miRNA、反义寡核苷酸、ddRNAi或GSK3的显性负抑制剂(GSK3DN)。在各种实施方式中，本文提供一种试剂盒，其中，所述试剂盒在一个或多于一个包装中包含CAR核酸构建体，该CAR核酸构建体编码包含白介素13或其变体或其片段的嵌合抗原受体蛋白(IL13CAR-T)；GSK3β抑制剂；并且任选地包含用于通过所述CAR核酸构建体转导T细胞的第一试剂；以及进一步任选地包含用于活化T细胞的第二试剂。在各种实施方式中，所述第二试剂是IL13Rα2-Fc。在各种实施方式中，核酸构建体编码包含白介素13变体IL13.E13K.R109K的嵌合抗原受体蛋白。在各种实施方式中，GSK3β抑制剂是如下小分子或如下遗传试剂，所述小分子是SB216763、1-Azakenpaullone、TWS-119或6-溴靛红-3’-肟(BIO)；所述遗传试剂是siRNA、miRNA、反义寡核苷酸、ddRNAi或GSK3的显性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于体外扩增T细胞群的方法，包括使所述T细胞接触GSK3β抑制剂。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171120 US 62/588,5191.一种用于体外扩增T细胞群的方法，包括使所述T细胞接触GSK3β抑制剂。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述T细胞接触所述GSK3β抑制剂之前，先用嵌合抗原受体蛋白转染T细胞，所述嵌合抗原受体蛋白包含与肿瘤抗原结合的分子。


3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述T细胞是从受试者分离的。


4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括使转导的T细胞接触肿瘤抗原。


5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述T细胞同时接触GSK3β抑制剂和所述肿瘤抗原。


6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，采用下述核酸转导所述T细胞，所述核酸编码包含白介素13或其变体或其片段的嵌合抗原受体蛋白(IL13CAR-T)。


7.根据权利要求4所述的方法，其中，所述核酸编码白介素13变体IL13.E13K.R109K或其片段。


8.根据权利要求6所述的方法，其中，所述核酸编码白介素13的包含如下结构域和融合蛋白的片段，所述结构域与白介素13受体或其胞外结构域结合，所述融合蛋白包含白介素13受体或其胞外结构域。


9.根据权利要求6所述的方法，其中，所述肿瘤抗原包含白介素13受体(IL13R)或其变体。


10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述肿瘤抗原包括白细胞介素13受体的阿尔法(α)链(IL13Rα)或其变体的阿尔法(α)链。


11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述GSK3β抑制剂是：
(a)选自SB216763、1-Azakenpaullone、TWS-119或6-溴靛红-3’-肟(BIO)的化学试剂；和/或
(b)选自微RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、DNA定向的RNA干扰(ddRNAi)寡核苷酸、反义寡核苷酸或其组合的遗传试剂。


12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述T细胞是辅助T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞、天然杀伤性T细胞或γδT细胞。


13.根据权利要求1所述的方法，其中，将扩增的T细胞随后施用回至患者以治疗疾病。


14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述疾病是癌症。


15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述癌症是实体肿瘤。


16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述肿瘤表达肿瘤抗原。


17.一种用于体外扩增T细胞群的方法，包括：
a.从受试者中分离出包含T细胞的样品；
b.使用编码包含与肿瘤抗原结合的分子的嵌合抗原受体蛋白的核酸转导所述T细胞群；以及
c.使转导的T细胞接触GSK3β抑制剂。


18.一种包含表达嵌合抗原受体蛋白的T细胞(CAR-T细胞)和GSK3β抑制剂的组合物。


19.根据权利要求19所述的组合物，其中，所述嵌合抗原受体蛋白结合肿瘤抗原。


20.根据权利要求18或权利要求19所述的组合物，其中，所述T细胞表达包含白介素13或其变体或其片段的嵌合抗原受体蛋白(IL13CAR-T)。


21.根据权利要求20所述的组合物，其中，所述T细胞表达包含白介素13变体IL13.E13K.R109K的嵌合抗原受体蛋白。


22.根据权利要求18所述的组合物，其中，所述GSK3β抑制剂是小分子或遗传试剂。


23.根据权利要求18至22中任一项所述的组合物，其中，所述GSK3β抑制剂是如下小分子或遗传试剂，所述小分子为SB216763、1-Azakenpaullone、TWS-119或6-溴靛红-3’-肟(BIO)，所述遗传试剂为siRNA、miRNA、反义寡核苷酸、ddRNAi或GSK3的显性负抑制剂(GSK3DN)。


24.根据权利要求18至22中任一项所述的组合物，其中，所述GSK3β抑制剂是选自微小RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、DNA定向的RNA干扰(ddRNAi)寡核苷酸、反义寡核苷酸或其组合、和GSK3的显性负等位基因(GSK3DN)的遗传试剂。


25.一种单独施用的制剂，其包含表达嵌合抗原受体蛋白的T细胞(CAR-T细胞)和GSK3β抑制剂。


26.根据权利要求25所述的制剂，其中，所述GSK3β抑制剂是如下小分子或遗传试剂，所述小分子是SB216763、TWS-119、1-Azakenpaullone或6-溴靛红-3’-肟(BIO)；所述遗传试剂是siRNA、miRNA、反义寡核苷酸、ddRNAi或GSK3的显性负抑制剂(GSK3DN)。


27.一种试剂盒，其在一个或多于一个包装中包含CAR核酸构建体，GSK3β抑制剂；并且任选地包含用于通过所述CAR核酸构建体转导T细胞的第一试剂；以及进一步任选地包含用于活化T细胞的第二试剂，其中，所述CAR核酸构建体编码包含白介素13或其变体或其片段的嵌合抗原受体蛋白(IL13CAR-T)。


28.根据权利要求27所述的试剂盒，其中，所述第二试剂是IL13Rα2-Fc。


29.根据权利要求27或28所述的试剂盒，其中，所述核酸构建体编码包含白介素13变体IL13.E13K.R109K的嵌合抗原受体蛋白。


30.根据权利要求27至29中任一项所述的试剂盒，其中，所述GSK3β抑制剂是如下小分子或遗传试剂，所述小分子是SB216763、1-Azakenpaullone、TWS-119或6-溴靛红-3’-肟(BIO)，所述遗传试剂是siRNA、miRNA、反义寡核苷酸、ddRNAi或GSK3的显性负抑制剂(GSK3DN)。


31.根据权利要求27至29中任一项所述的试剂盒，其中，所述GSK3β抑制剂是遗传试剂，其包括微小RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、DNA定向的RNA干扰(ddRNAi)寡核苷酸、反义寡核苷酸或其组合，和GSK3DN。


32.一种与天然或野生型T细胞相比抑制GSKβ表达或活性的T细胞。


33.根据权利要求32所述的T细胞，其是辅助T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞、天然杀伤性T细胞或γδT细胞。


34.根据权利要求32所述的T细胞，其中，所述T细胞包含遗传抑制剂，所述遗传抑制剂包括微小RNA(miRNA)、小干扰RNA(siRNA)、DNA定向的RNA干扰(ddRNAi)寡核苷酸、反义寡核苷酸或其组合，其中所述遗传抑制剂抑制T细胞中GSK3β的活性或表达。


35.一种用于体外扩增T细胞的方法，包括：从受试者中分离出包含T细胞的样品；使T细胞与GSK3β抑制剂接触；使用编码包含与肿瘤抗原结合的分子的嵌合抗原受体蛋白的核酸转导所述T细胞；使转导的T细胞与所述肿瘤抗原接触以扩增转导的T细胞。


36.一种用于体外扩增T细胞的方法，包括：从受试者中分离出包...

【专利技术属性】
技术研发人员：沙德哈克·森古普塔，
申请(专利权)人：罗杰威廉姆斯医疗中心以普拉斯派克特查特凯尔RWMC有限责任公司许可，
类型：发明
国别省市：美国;US