一种提高蚂蟥越冬产量的方法技术

本发明专利技术提供一种提高蚂蟥越冬产量的方法。本发明专利技术目的在现有蚂蟥养殖基础上提供一种显著提高存活率，促进越冬蚂蟥生长，增加经济效益的养殖方法。与普通越冬相比，采用本发明专利技术使蚂蟥越冬后存活率提高8％，产量最高增加约43.99％，同时抗凝血酶含量提高10.73％。本发明专利技术在不扩大蚂蟥养殖面积的前提下，提高了蚂蟥养殖的经济效益。与现有蚂蟥养殖技术相比，应用本发明专利技术越冬前短期添加6周17β‑E2，60天出冬眠后，不仅可以提高蚂蟥的内在品质，同时每亩最高可增加蚂蟥干重约22.0公斤(以每亩产量50kg计)，按目前市场价1000元/kg计，每亩增加经济效益约2.0万元。

【技术实现步骤摘要】
一种提高蚂蟥越冬产量的方法一、
本专利技术涉及一种提高蚂蟥越冬产量的方法，属于药用动物养殖领域。二、
技术介绍
蚂蟥(WhitmaniapigraWhitman)，又名宽体金线蛭，是中国药典(2015版)中药材水蛭的主要基原动物，干燥全体入药，具有良好的破血通经，逐瘀消癥功效。由于过度捕捞，环境污染等原因致使野生蚂蟥资源量急剧下降。近年来，对蚂蟥生物学特性、消化生理、呼吸生理、养殖密度等方面进行了大量研究，蚂蟥人工养殖初步取得成功。研究发现蚂蟥具有冬眠习性，自然条件下，当环境温度低于10℃时，蚂蟥停止进食，环境温度低于4℃时，蚂蟥进入冬眠，出冬眠后体重减少、死亡率升高，抗凝血酶活性下降，如何减少蚂蟥越冬后的损失成为生产上亟待解决的热点问题。17β-E2是一种性类固醇激素，能够通过影响胰岛素样生长因子-1(IGF-1)轴从而影响生长激素(GH)的分泌和功能，对动物的生长具有一定的促进作用，有报道称水体中添加17β-E2能够提高动物生长速率，促进体重增加。近年来17β-E2被广泛应用在水产养殖上，但鲜见用于蚂蟥养殖上的研究报道。三、
技术实现思路
本专利技术目的是在现有蚂蟥养殖基础上，提供一种显著促进越冬蚂蟥生长，增加经济效益的养殖方法。本专利技术在蚂蟥养殖水体中添加17β-E2，使养殖水体中17β-E2浓度为10～25ng·mL-1。养殖过程中3天换1次水同时清除残留物，换水时间固定。换水后投喂清洗后的新鲜螺蛳(梨形环棱螺)，养殖过程中及时清理死亡蚂蟥。通过实验统计和比较发现，与不添加17β-E2相比，采用本专利技术使蚂蟥越冬后存活率提高8％，产量最高增加约43.99％，同时抗凝血酶含量提高10.73％。本专利技术在不扩大蚂蟥养殖面积的前提下，增加了蚂蟥养殖的经济效益。与现有蚂蟥养殖技术相比，应用本专利技术越冬前短期添加6周17β-E2后自然冬眠60天，每亩最高可增加蚂蟥干重约22.0公斤(以每亩产量50kg计)，按目前市场价1000元/kg计，每亩增加经济效益约2.0万元。四、具体实施方式1.材料1.1实验材料及仪器：蚂蟥由南京农业大学中药材研究所提供，经郭巧生教授鉴定为蚂蟥W.pigra。Agilent1200-6410B三重串联四级杆液质联用仪(安捷伦科技有限公司)、EclipsePlusC18色谱柱(2.1×150mm，3.5μm)、水浴氮吹仪(上海允延仪器有限公司)、LC-C18固相萃取柱(沃特世科技有限公司)、RM2015切片机(Leica公司)、DFC450C正置荧光显微镜(Leica公司)等。2方法2.1试验设计11月份取5.5月龄健康蚂蟥，体重6.0g±0.5g。试验设置养殖水体17β-E2浓度为1.0、10.0、25.0、50.0、100.0ng·mL-15个实验处理组和1个空白对照组，分别标记为C1、C2、C3、C4、C5、CK，每组24瓶，每瓶10条蚂蟥。其它养殖管理条件相同，实验处理6周后，蚂蟥自然越冬至来年3月份检测生长、性腺发育情况。2.2体重、特定生长率、存活率的测定实验处理后，通过分析天平精确称量蚂蟥体重、性腺重量，存活率(SR)、性腺指数(GSI)、增重率(WGR)、特定生长率(SGR)根据以下公式进行计算。公式中W1为实验初始体重(g)，W2为实验末体重(g)。t为总时间天数(d)WGR＝(W2-W1)/W1×100％SGR＝(lnW2-lnW1)/t×100％SR＝(总条数-死亡数)/总条数×100％2.3蚂蟥内源类固醇激素测定液氮下磨碎蚂蟥组织样品5.0g(精确至0.01g)，加入叔丁基甲醚15mL，10％Na2CO3溶液3mL，旋涡混匀器混匀提取1min，室温超声提取30min。10000r·min-1离心5min，取上清液，下层重复提取3次，合并有机相，40℃氮气吹干。加20％甲醇溶液5mL溶解残渣，旋涡混匀1min，4℃冰箱中放置1h后，10000r·min-1离心5min，取上清液，获得激素粗提液。LC-C18固相萃取柱先经5ml甲醇和5ml水活化。上清液过柱后，用5ml20％甲醇溶液淋洗，真空抽干3min，用5ml甲醇洗脱，收集甲醇相，氮吹至干。残余物用V(乙腈)∶V(水)＝1∶1定容至0.5mL，漩涡混匀30s，过0.22μm微孔滤膜，进行HPLC-MS/MS分析。2.4蚂蟥药材内在品质测定测定蚂蟥水分、灰分、酸不溶灰分、酸碱度以及抗凝血酶活性，测定方法参照《中国药典》(2015版)。2.5数据分析使用SPSS17.0软件进行数据统计分析，单因素方差分析(one-wayANOVA)，P＜0.05表示差异显著。3结果与分析3.117β-E2对越冬蚂蟥生长的影响不同浓度的17β-E2对蚂蟥生长的影响见表1。由表1可知，17β-E2处理后蚂蟥体重、增重率、特定生长率均高于CK组，随着17β-E2浓度的升高呈现先升高后降低的趋势，除C1、C5组与CK组无显著差别外，其他组别均显著高于CK组(P＜0.05)，其中C3组显著高于其他组(P＜0.05)。存活率方面除C4、C5组低于CK组外，其余组别均高于CK组，但无显著性差异(P＞0.05)。表1外源17β-E2对蚂蟥生长的影响Table.1Theeffectof17β-E2ongrowthtargetofWhitmaniapigra注：同列不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，下表同。3.217β-E2对越冬蚂蟥内源类固醇激素的影响不同浓度17β-E2对越冬蚂蟥内源类固醇激素的影响见表2。添加17β-E2后蚂蟥内源雌激素(雌二醇、雌三醇)水平较对照组有所升高，随着外源17β-E2浓度升高表现为先升高后降低的趋势，其中雌二醇水平在C4组差异最显著(P＜0.05)，雌三醇水平在C3组差异最显著(P＜0.05)；内源雄激素(睾酮、甲基睾酮)水平在外源17β-E2浓度小于25ng·mL-1时与对照组差异不显著(P＞0.05)，当外源17β-E2浓度大于50ng·mL-1时表现为显著降低(P＜0.05)，其中C5组睾酮、甲基睾酮水平均显著低于对照组；孕激素(黄体酮)水平与外源17β-E2浓度呈负相关，与对照组比较差异显著(P＜0.05)；皮质激素(皮质酮)实验各组水平较对照组无明显差异。表2外源17β-E2对蚂蟥内源类固醇激素水平的影响Table.2Theeffect17β-E2onendogenoussteroidhormonelevelsofWhitmaniapigra3.317β-E2对越冬蚂蟥内在品质的影响各组蚂蟥药材品质指标均符合《中国药典》(2015版)标准(见表3)，其中水分、总灰分、酸不溶性灰分以及酸碱度各组无明显差异，添加17β-E2后蚂蟥抗凝血酶活性较对照组有所升高，其中C3组蚂蟥抗凝血酶活性显著高于对照组(P＜0.05)。表3外源17β-E本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高蚂蟥越冬产量的方法，其特征在于：在现有蚂蟥养殖基础上，添加一种雌激素来提高蚂蟥的越冬产量。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高蚂蟥越冬产量的方法，其特征在于：在现有蚂蟥养殖基础上，添加一种雌激素来提高蚂蟥的越冬产量。


2.根据权利要求1所述的一种提高蚂蟥越冬产量的方法，其特征在于：添加雌激素为17β-E2。


3.根据权利要求1所述的一种提高蚂蟥越冬产量的方法，其特征在于：养殖蚂蟥为宽体金线蛭WhitmaniapigraWhitman。


4.根据权利要求1所述的一种提高蚂蟥越冬产量的方法，其特征在于：17β-E2添加时间是蚂蟥越冬前1个半月。


5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：史红专，郭巧生，王帅，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32