一种蛤蚧种苗质量评价方法技术

本发明专利技术公开了一种蛤蚧种苗质量评价方法，包括：获取待检测蛤蚧种苗的形态特征，并鉴定待检测蛤蚧种苗形态是否合格；分别提取形态合格的待检测蛤蚧种苗和正品蛤蚧的DNA，进行PCR扩增获得PCR产物并进行电泳检测对比，对PCR扩增条带进行测序然后和正品蛤蚧的序列进行比对，以此鉴定出质量合格的正品蛤蚧种苗。本发明专利技术通过体态特征对蛤蚧种苗进行鉴定，挑选符合规格的种苗，然后对种苗进行分子生物学鉴定，判断是否属于蛤蚧品种，有效的减少了分子生物学鉴定的数量，降低了检测成本。同时，分子生物学鉴定使用PCR扩增和检测技术进行鉴定，准确率高，检测速度快。再者，PCR扩增引物使用COI序列通用引物，设计和生产成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种蛤蚧种苗质量评价方法
本专利技术涉及动物药材养殖和鉴定
，更具体地说，本专利技术涉及一种蛤蚧种苗质量评价方法。
技术介绍
蛤蚧为壁虎科动物蛤蚧(GekkogeckoLinnaeus)的干燥全体。据《中国药典》记载，蛤蚧性味咸平，归肺、肾经。具有补肺益肾，纳气定喘，补肺益肾的功效。临床上主要用于肺肾不足，虚喘气促，劳嗽咳血，阳痿，遗精等。常见以蛤蚧为主要原料的中成药有蛤蚧定喘丸，蛤蚧补肾丸，蛤蚧定喘胶囊等。随着人们对长期使用抗生素危害意识的提高，越来越多的人更倾向于使用疗效好，安全性高，无毒副作用的中成药用于预防和治疗疾病，导致对蛤蚧这一珍贵药材原料的需求量越来越大，而野生资源已然无法满足日益增长的需要，蛤蚧的人工养殖已然成为趋势。由于野生资源的锐减，价格逐年攀升，市场上也出现了许多易混淆品，诸如多疣壁虎，无蹼壁虎，红螺疣螈，东方蝾螈，青海沙蜥，变色树蜥等，蛤蚧正品与其混淆品的形态特征差别细微，传统的鉴别方法很难鉴定。DNA条形码是一种可以在DNA分子水平上对药材的真伪进行鉴定的新技术，其采用一个或者一些短的、标准的DNA片段作为物种标记进行鉴定，不受个体形态、大小等特征和完整性的影响，COI基因在不同动物类群中均存在显著差异。能直接从基因水平上提取丰富的鉴别依据，可实现对中药材原动物、细胞、组织等材料来源进行准确快速的鉴定。俗话说“药材好，药才好”。蛤蚧种苗是人工养殖是否成功的关键环节，种苗的质量关系到药材的质量及养殖户的经济效益。因此，亟需一种用于鉴定和评价蛤蚧种苗的方法用于指导蛤蚧养殖生产。通过对蛤蚧种苗的鉴定及评价，规范种苗的质量标准，筛选合格的种苗，对于指导蛤蚧人工养殖，保障蛤蚧药材质量具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述缺陷，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术的另一个目的是提供一种操作简单的蛤蚧种苗质量评价方法。本专利技术提供的方案具体如下：一种蛤蚧种苗质量评价方法，包括：获取待检测蛤蚧种苗的形态特征，并鉴定待检测蛤蚧种苗形态是否合格；分别提取形态合格的待检测蛤蚧种苗和正品蛤蚧的DNA，进行PCR扩增获得PCR产物并进行电泳检测对比，对PCR扩增条带进行测序然后和正品蛤蚧的序列进行比对，如和Genbank中的灰斑蛤蚧COI序列进行比对，对比相似度，以此鉴定出质量合格的正品蛤蚧种苗；其中，PCR扩增引物为：LCO1490：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′；HCO2198：5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′。上述技术方案中，首先通过体态特征对蛤蚧种苗进行鉴定，挑选符合规格的种苗，然后对种苗进行分子生物学鉴定，判断是否属于蛤蚧品种，不但操作简单，且有效的减少了分子生物学鉴定的数量，降低了检测成本。同时，分子生物学鉴定使用PCR扩增和检测技术进行鉴定，准确率高，检测速度快。再者，PCR扩增引物使用COI序列通用引物：LCO1490，HCO2198，设计和生产成本低。优选的是，所述的蛤蚧种苗质量评价方法中，所述形态特征包括：个体完整度，头部，背部，口腔，体色，脚趾，尾巴，体重，眶间距，头长，体长，尾长，灰白色尾环数。优选的是，所述的蛤蚧种苗质量评价方法中，所述个体完整度是指：蛤蚧种苗个体具有完整的器官且个体完整无损伤。优选的是，所述的蛤蚧种苗质量评价方法中，合格的蛤蚧种苗具有以下形态特征：个体完整度：具有完整的器官且个体完整无损伤；头部：成三角形，吻端突圆，头背面覆盖细密粒鳞；背部：体背部覆盖细密粒鳞，鳞片光滑；口腔：舌尖呈红润色，上下颌排齿整洁，无破损或无白色脓状物附着；体色：呈灰黑色或墨绿色，夹杂白色、灰黑色或褐色疣粒；脚趾：四只脚趾膨大，蹼及吸盘无肿胀；尾巴：尾鳞排列成环状，尾巴呈锥形，向尾端逐渐变细，尾部呈横行节段，尾椎有横生的软骨盘，尾肌束呈V型前后左右规则排列，易断裂；个体体重≥21.00g；眶间距≥12.00mm；头长≥30.00mm；体长≥71.00mm；尾长≥83.00mm；尾巴灰白色环状鳞有7环。上述方案中，通过上述形态特征能够有效筛选鉴别出蛤蚧种苗的质量，便于进行筛选和评价。优选的是，所述的蛤蚧种苗质量评价方法中，获取蛤蚧种苗的体重，眶间距，头长，体长和尾长时，蛤蚧种苗处于安静、无身体蜷曲，自然伸直状态。优选的是，所述的蛤蚧种苗质量评价方法中，所述眶间距是指安静状态下蛤蚧两眼眶内侧的最短距离；所述头长是指安静状态下蛤蚧吻突到头骨与第1颈椎连接处的距离；所述体长是指安静状态下蛤蚧第1颈椎到第1荐椎与第13腰椎连接处的距离；所述尾长是指安静状态下蛤蚧第1荐椎到尾端的距离。优选的是，所述的蛤蚧种苗质量评价方法中，使用蛤蚧测量装置测量蛤蚧种苗的体重，眶间距，头长，体长和尾长；所述蛤蚧测量装置包括：底座，其顶部设置有水平的支撑面；称重模块，其设置在所述支撑面上；支撑板，其水平设置在称重模块上并被称重模块支撑和感应；所述支撑板的顶面的中位线上设置有凸出部，沿所述凸出部设置有凹槽，所述凹槽沿凸出部的长度方向直线伸延；凸出部凸起的高度优选大于蛤蚧手足的长度，使得蛤蚧放在凸出部上测量时，手足无法接触支撑板而无法挣扎，进而保持安静。头部夹持件，其下部配合至凹槽并能够沿凹槽滑动，所述头部夹持件包括第一支撑块、吻部适配壳、左定位件和右定位件，所述第一支撑块下端滑动配合至所述凹槽，所述吻部适配壳设置在第一支撑块后侧面上，该侧面与蛤蚧相对应，所述吻部适配壳与蛤蚧的吻部形状适配以套入吻部，所述左定位件和右定位件铰接在支撑块顶部以实现自由左右摆动，且所述左定位件和右定位件为伸缩结构，以使的左定位件和右定位件的前端能够分别调节伸延到蛤蚧的左眼眶和右眼眶的位置，所述左定位件和右定位件的前端还分别设置有测距模块以测量左定位件和右定位件的前端之间的距离；颈部夹持件，其下部配合至凹槽并能够沿凹槽滑动，所述颈部夹持件包括第二支撑块和颈部夹持环，所述第二支撑块下端滑动配合至所述凹槽，所述颈部夹持环顶部设置有开口以适配到蛤蚧的颈部颈椎位置，且所述颈部夹持环为弹性环使得直径能够增大缩小以对蛤蚧的颈部弹性夹持；体部夹持件，其下部配合至凹槽并能够沿凹槽滑动，所述体部夹持件包括第三支撑块和体部夹持环，所述第三支撑块下端滑动配合至所述凹槽，所述体部夹持环顶部设置有开口以适配到蛤蚧的体部荐椎位置，且所述夹持环为弹性环使得直径能够增大缩小以对蛤蚧的体部荐椎位置弹性夹持；尾部夹持件，其下部配合至凹槽并能够沿凹槽滑动，所述尾部夹持件包括第四支撑块、左适配件和右适配件，所述第四支撑块下端滑动配合至所述凹槽，所述左适配件和右适配件分别铰接在第四支撑块的前端面并分别从两侧夹持蛤蚧尾部；其中，第一支撑块、第二支撑块、第三支撑块和第四支撑块之间分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛤蚧种苗质量评价方法，其特征在于，包括：/n获取待检测蛤蚧种苗的形态特征，并鉴定待检测蛤蚧种苗形态是否合格；/n分别提取形态合格的待检测蛤蚧种苗和正品蛤蚧的DNA，进行PCR扩增获得PCR产物并进行电泳检测对比，对PCR扩增条带进行测序比对，以此鉴定出质量合格的正品蛤蚧种苗；其中，PCR扩增引物为：/nLCO1490：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′；/nHCO2198：5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′。/n

【技术特征摘要】
1.一种蛤蚧种苗质量评价方法，其特征在于，包括：
获取待检测蛤蚧种苗的形态特征，并鉴定待检测蛤蚧种苗形态是否合格；
分别提取形态合格的待检测蛤蚧种苗和正品蛤蚧的DNA，进行PCR扩增获得PCR产物并进行电泳检测对比，对PCR扩增条带进行测序比对，以此鉴定出质量合格的正品蛤蚧种苗；其中，PCR扩增引物为：
LCO1490：5′-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3′；
HCO2198：5′-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3′。


2.如权利要求1所述的蛤蚧种苗质量评价方法，其特征在于，所述形态特征包括：
个体完整度，头部，背部，口腔，体色，脚趾，尾巴，体重，眶间距，头长，体长，尾长，灰白色尾环数。


3.根据权利要求2所述的蛤蚧种苗质量评价方法，其特征在于，所述个体完整度是指：蛤蚧种苗个体具有完整的器官且个体完整无损伤。


4.根据权利要求3所述的蛤蚧种苗质量评价方法，其特征在于，合格的蛤蚧种苗具有以下形态特征：
个体完整度：具有完整的器官且个体完整无损伤；
头部：成三角形，吻端突圆，头背面覆盖细密粒鳞；
背部：体背部覆盖细密粒鳞，鳞片光滑；
口腔：舌尖呈红润色，上下颌排齿整洁，无破损或无白色脓状物附着；
体色：呈灰黑色或墨绿色，夹杂白色、灰黑色或褐色疣粒；
脚趾：四只脚趾膨大，蹼及吸盘无肿胀；
尾巴：尾鳞排列成环状，尾巴呈锥形，向尾端逐渐变细，尾部呈横行节段，尾椎有横生的软骨盘，尾肌束呈V型前后左右规则排列，易断裂；
个体体重≥21.00g；
眶间距≥12.00mm；
头长≥30.00mm；
体长≥71.00mm；
尾长≥83.00mm；
尾巴灰白色环状鳞有7环。


5.根据权利要求4所述的蛤蚧种苗质量评价方法，其特征在于，获取蛤蚧种苗的体重，眶间距，头长，体长和尾长时，蛤蚧种苗处于安静、无身体蜷曲，自然伸直状态。


6.根据权利要求5所述的蛤蚧种苗质量评价方法，其特征在于，所述眶间距是指安静状态下蛤蚧两眼眶内侧的最短距离；
所述头长是指安静状态下蛤蚧吻突到头骨与第1颈椎连接处的距离；
所述体长是指安静状态下蛤蚧第1颈椎到第1荐椎与第13腰椎连接处的距离；
所述尾长是指安静状态下蛤蚧第1荐椎到尾端的距离。

【专利技术属性】
技术研发人员：赵成坚，张秋仙，徐永莉，霍娟，姜建萍，张月云，刘武，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45