用于治疗肾癌的包含miRNA的药物载体制造技术

本发明专利技术涉及包含选自miR‑15a、miR‑181b、miR‑320c、miR‑874及其任意组合的微RNA的可药用载体，其用于治疗肾癌。所述可药用载体优选地为来源于选自以下的成体干细胞的细胞外囊泡(EV)：间充质干细胞(MSC)、非卵圆人肝祖细胞(HLSC)和脂肪干细胞(ASC)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗肾癌的包含miRNA的药物载体本专利技术涉及肾癌的新治疗性处理。更具体地，本专利技术涉及携带在肾癌的治疗中有效的一组特定miRNA的药物载体的用途。重点在于来源于干细胞的细胞外囊泡(extracellularvesicle，EV)，其作为用于治疗肾癌的药物载体。肿瘤血管形成是肿瘤生长和转移中的基本步骤。在缺乏氧和营养物的血管供应的情况下，实体瘤事实上无法生长超过数平方毫米。此外，转移的数目与原发性肿瘤的血管密度相关。肿瘤内皮细胞(tumorendothelialcell，TEC)与正常内皮细胞不同，并且显示促血管生成表型。例如，TEC表现出更高的运动性和增殖，在体外不依赖于血清，以及通过Akt信号传导增强存活。在表型上，TEC可增强生长因子受体表达，包括VEGF和EGF受体。TEC还对某些化学治疗药物具有抗性并且对靶向VEGF的抗血管生成药物不那么可感知。此外，TEC在遗传学上与正常内皮细胞不同。细胞外囊泡(EV)表现为细胞间通信的重要机制，并且其活性载物(cargo)可通过改变接受体细胞的功能和表型对其进行重编程。事实上，EV的活性看起来依赖于许多不同因子的转移，这些因子包括蛋白质、RNA、DNA和脂质，其中微RNA显示出具有主要作用。已知干细胞来源的EV并且特别是人骨髓来源的间充质基质细胞(bone-marrowderivedmesenchymalstromalcell，BM-MSC)显示出促肿瘤发生活性和抗肿瘤发生活性二者，其取决于肿瘤类型和发展阶段。类似地，MSC-EV也可正向或负向调节肿瘤血管形成(ZhuW，HuangL，LiY，ZhangX，GuJ，YanY，等Exosomesderivedfromhumanbonemarrowmesenchymalstemcellspromotetumorgrowthinvivo.Cancerletters.2012；315(1)：28-37)。据报道，MSC-EV在施用于荷瘤(tumor-bearing)小鼠之后在体内促进血管生成(ZhuW，XuW，JiangR，QianH，ChenM，HuJ，等Mesenchymalstemcellsderivedfrombonemarrowfavortumorcellgrowthinvivo.ExpMolPathol.2006；80(3)：267-74)。另一些研究观察到MSC-EV对通过肿瘤细胞的VEGF分泌具有间接作用。最近，本专利技术人已经表明，另一种来源的表达分离自肝的肝细胞标志物的人驻留非卵圆多能祖细胞(即人肝干细胞(humanliverstemcell，HLSC))可显示出抗肿瘤作用(HerreraMB，BrunoS，ButtiglieriS，TettaC，GattiS，DeregibusMC，等Isolationandcharacterizationofastemcellpopulationfromadulthumanliver.Stemcells.2006；24(12)：2840-50)。特别地，HLSC-EV显示出通过涉及特定抗肿瘤miRNA的递送的机制降低肝癌生长(FonsatoV，CollinoF，HerreraMB，CavallariC，DeregibusMC，CistemaB，等Humanliverstemcell-derivedmicrovesiclesinhibithepatomagrowthinSCIDmicebydeliveringantitumormicroRNAs.Stemcells.2012；30(9)：1985-98)。然而，未研究HLSC-EV是否也影响肿瘤血管生成。在WO2006/126236中已对HLSC进行了描述。此外，据本专利技术人所知，从未报道过干细胞来源的EV通过特定miRNA的递送针对肾癌具有抗肿瘤作用。WO2011/107437公开了来源于成体干细胞(例如BM-MSC、G1-MSC和HLSC)的微泡在治疗肿瘤疾病例如肝、上皮、肺、前列腺、卵巢、乳房、胃和结肠肿瘤中有效。WO2011/070001公开了HLSC来源的条件培养基用于治疗肝癌、卡波西肉瘤(Kaposi’ssarcoma)和乳腺癌的用途。在这些专利中既没有讨论肾癌也没有讨论miRNA的作用。如将在本说明书的实验部分中更详细地举例说明的，现在本专利技术人已出人意料地发现，来源于成体干细胞的细胞外囊泡(EV)例如HLSC-EV和MSC-EV能够在体外抑制肾肿瘤内皮细胞的迁移，并且HLSC-EV还显著降低血管样形成(vessel-likeformation)。体内实验还显示HLSC-EV能够抑制肿瘤血管生成。非常有趣的是，在这些实验中，HLSC-EV对正常内皮细胞未显示出任何作用。因此，本专利技术解决了提供在肾癌的治疗性处理中高效的产品的问题。EV具有复杂的组成，并且包含许多功能性蛋白质、脂质和核酸。本专利技术人已经确定了由HLSC-EV携带的四种微RNA，即miR-15a、miR-181b、miR-320c和miR-874，其能够在肾癌-TEC转染之后体外抑制肿瘤血管生成。用这些miRNA转染分别导致其靶基因FGF1、PLAU、ITGB3和EPHB4的表达降低。当用携带以上确定的miRNA的EV刺激TEC时，观察到与FGF1和PLAU表达的抑制相关的miRNA的表达显著增强，然而未观察到ITGB3和EPHB4的抑制。FGF1是参与肿瘤血管生成的最重要的促血管生成因子之一并且能够不依赖于VEGF地调节血管生成。PLAU是编码尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-typeplasminogenactivator，uPA)(激活来自纤溶酶原的纤溶酶的酶)的基因。纤溶酶参与胞外基质降解的蛋白水解过程，这对血管生成和癌症进展是重要的。FGF1和PLAU通过FGF1受体(FGFR)相联系(colligate)，FGF1受体(FGFR)可激活uPA并增强其受体uPAR的表达。FGF1、uPA和uPAR，其全部通过FGFR在正反馈回路(positivefeedbackloop)中连接。鉴于这些结果，包含miR-15a、miR-181b、miR-320c、miR-874或其混合物的药物载体对于肾癌的治疗是非常有前景的治疗剂。因此，本专利技术的第一方面是包含选自miR-15a、miR-181b、miR-320c、miR-874及其任意组合的微RNA的可药用载体，其用于治疗肾癌。根据本专利技术的一个优选实施方案，可药用载体包含miR-15a、miR-181b、miR-320c和miR-874中的至少两种的组合。甚至更优选地，可药用载体包含所有miR-15a、miR-181b、miR-320c和miR-874。miR-15a、miR-181b、miR-320c和miR-874是本身已知的微RNA(miRNA)；其特征和序列可在例如定名为miRBase的数据库中根据登录号MI0000069、MI0000269、MI0003778、MIPF0000401找到。药物效果可归因于药物载体中包含的miRNA。设想用miRNA对靶细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含选自miR-15a、miR-181b、miR-320c、miR-874及其任意组合的微RNA的可药用载体，其用于治疗肾癌。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171214 EP 17207414.81.包含选自miR-15a、miR-181b、miR-320c、miR-874及其任意组合的微RNA的可药用载体，其用于治疗肾癌。


2.根据权利要求1所述应用的可药用载体，其包含由miR-15a、miR-181b、miR-320c和miR-874组成的组中至少两种的组合。


3.根据权利要求1或2所述应用的可药用载体，其中所述可药用载体是微米粒或纳米粒，并且其中所述微RNA包含在所述微米粒或纳米粒内或者附着在所述微米粒或纳米粒的表面上。


4.根据权利要求1至3中任一项所述应用的可药用载体，其中所述可药用载体是细胞外囊泡(EV)。


5.根据权利要求4所述应用的可药用载体，其中所述细胞外囊泡(EV)来源于干细胞。


6.根据权利要求5所述应用的可药用载体，其中所述细胞外囊泡(EV)来源于成体干细胞。


7.根据权利要求6所述应用的可药用载体，其中所述细胞外囊泡(EV)来源于选自以下的成体干细胞：间充质干细胞(MSC)、非卵圆人肝祖细胞(HLSC)和脂肪干细胞(ASC)。


8.根据权利要求4至7中任一项所述应用的可药用载体，其中所述细胞外囊泡(EV)改造成包含选自以下的微RNA：miR-15a、miR-181b、miR-320c、miR-874及其任意组合。


9.经改造的细胞外囊泡(EV)，其与天然存在的细胞外囊泡(EV)相比包含显著更高量的选自以下的微RNA：miR-15a、miR-181b、miR-320c和miR-874，或及其任意组合，所述经改造的细胞外囊泡(EV)可通过离体地将选自miR-15a、miR-181b、miR-320c和miR-874及其任意组合的微RNA负载到分离的细胞外囊泡中获得。


10.根据权利要求9所述的经改造的细胞外囊泡(EV)，其包含的miR-15a、miR-181b、miR-320c、miR-874或其任意组合的量比存...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔瓦尼·卡穆西，贝内代塔·布索拉蒂，塔蒂亚娜·洛帕蒂娜，
申请(专利权)人：联合细胞EV股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH