一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒及其制备使用方法技术

本发明专利技术提供了一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒，包括反应缓冲液和PTH胶乳试剂；反应缓冲液包括缓冲液、无机盐、增浊剂、表面活性剂等，pH 7.3‑7.7；PTH胶乳试剂包括至少两种通过PTH单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液，每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及PTH单抗标记的胶乳微球；胶乳保存液包括缓冲液、无机盐、表面活性剂、稳定剂、防腐剂，pH 7.4‑7.7。本发明专利技术还提供了一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒的制备使用方法。本发明专利技术试剂盒可使用全自动生化分析仪检测，操作简便、检测速度快、精密度高、重复性好、检测结果不受操作影响，并且价格上具有优势。

【技术实现步骤摘要】
一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒及其制备使用方法
本专利技术涉及生物检测试剂制备领域，尤其涉及一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒及其制备使用方法。
技术介绍
甲状旁腺激素(hyperparathyroidism，PTH)，由甲状旁腺主细胞分泌而来。PTH分子是一条由84个氨基酸组成的肽，分子量为9000，其生物活性决定于N端的第1-27个氨基酸残基。在甲状旁腺主细胞内先合成一个含有115个氨基酸的前PTH原(prepro-甲状旁腺激素)，以后脱掉N端二十五肽，生成九十肽的PTH原(pro-甲状旁腺激素)，再脱去6个氨基酸，变成甲状旁腺激素。在甲状旁腺主细胞内，部分甲状旁腺激素分子可以在第33位与第40位氨基酸残基之间裂解，形成两个片断，可与甲状旁腺激素一同进入血中。正常人血浆PTH浓度为10-50ng/L，半衰期为20-30min。甲状旁腺激素主要在肝水解灭活，代谢产物经肾排出体外。近年，有学者从鳞状上皮癌伴发高血钙的患者癌组织中分离出一种在化学结构上类似甲状旁腺激素的肽，称为PTH相关(parathyroidhormonerelatedpeptide,甲状旁腺激素rp)，并进一步研究并发现，正常组织，如皮肤、乳腺以及胎儿甲状旁腺中，也存在这种肽。甲状旁腺激素rp与甲状旁腺激素从来源上是同族的，尤其两者的N端1-13位氨基酸残其完全相同，甲状旁腺激素rp也具有甲状旁腺激素活性。甲状旁腺激素的生理作用主要是升高血钙、降低血磷，调节钙离子水平。通常，血浆钙离子水平与血浆甲状旁腺激PTH水平成反比。测定PTH对鉴别高钙血症和低钙血症上具有一定的价值，同时对甲状旁腺疾病的诊断及血液透析的监测都有重要意义。检测PTH的方法主要基于抗原抗体反应。现有领域内，已有公司注册了PTH测定试剂盒(免疫荧光干式定量法)，为境内第二类医疗器械，国内无其他厂家上市。进口的则有酶联免疫法的测定试剂，也由一些公司代理注册。然而，我们发现，目前市场上却没有基于胶乳增强免疫比浊法测定的PTH试剂盒。相对于“免疫荧光干式定量法”PTH测定试剂盒以及“酶联免疫法”PTH测定试剂盒而言，基于胶乳增强免疫比浊法测定的PTH试剂盒，可以使用全自动生化分析仪检测PTH，操作简便、检测速度快、精密度高、重复性好、检测结果不受操作影响，并且价格上会有很大的优势。据此，目前急需一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒及其制备使用方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒及其制备使用方法，该试剂盒可使用全自动生化分析仪检测PTH，操作简便、检测速度快、精密度高、重复性好、检测结果不受操作影响，并且价格上会有很大的优势。本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒，包括反应缓冲液和PTH胶乳试剂；所述反应缓冲液包括的成分及相应含量为：缓冲液1-4g/L，无机盐15-20g/L，增浊剂20-30g/L，表面活性剂1-3mL/L，稳定剂30-40g/L，防腐剂0.7-1.7mL/L，溶剂为纯化水，pH7.3-7.7；所述PTH胶乳试剂包括至少两种通过PTH单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液，每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为1.0-1.5mg/mL的相应PTH单抗标记的胶乳微球；所述胶乳保存液包括的成分及相应含量为：缓冲液10-15g/L，无机盐6-12g/L，表面活性剂2-4mL/L，稳定剂30-80g/L，防腐剂0.6-1.6mL/L，溶剂为纯化水，pH7.4-7.7；其中，在所述PTH胶乳试剂中，每种通过PTH单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。作为本专利技术的优选方式之一，在所述反应缓冲液中：所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种；所述增浊剂为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一种或多种；所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种；所述稳定剂为BSA和蔗糖中的一种或多种；所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种。作为本专利技术的优选方式之一，所述反应缓冲液的pH为7.5。作为本专利技术的优选方式之一，在所述胶乳保存液中：所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种；所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种；所述稳定剂为BSA、蔗糖、甘露醇中的一种或多种；所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种或多种。作为本专利技术的优选方式之一，所述胶乳保存液的pH为7.6。作为本专利技术的优选方式之一，所述PTH单抗标记的胶乳微球中使用的胶乳微球粒径范围为150-250nm。一种上述基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)配制反应缓冲液：按照反应缓冲液的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得反应缓冲液；(2)配制PTH胶乳试剂：①取固含量为10％的胶乳微球，并加至清洗缓冲液中；离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声，并加入活化剂活化；再次离心，用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声，制得活化胶乳微球；②取至少两种PTH单抗，各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀，并进行一定时间的偶联，制取偶联后的胶乳微球；③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭；封闭结束后，再次离心、去上清，并加入胶乳保存液重悬超声，制取各自的胶乳试剂组成液；然后，将制取的各胶乳试剂组成液混合，即得所需的PTH胶乳试剂。作为本专利技术的优选方式之一，在所述步骤①中，所述清洗缓冲液与活化缓冲液采用磷酸盐缓冲液；所述偶联缓冲液采用磷酸盐缓冲液；所述活化剂采用EDAC/NHS，所述胶乳微球与活化剂的v/w比为：1：(10-20)。作为本专利技术的优选方式之一，在所述步骤②中，所述活化胶乳微球与各PTH单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6)，偶联时间为2h；在所述步骤③中，所述封闭缓冲液采用BSA、甘氨酸中的一种或多种，封闭时间1h。一种上述基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒的使用方法，包括如下具体步骤：(1)吸取20μL样本，加入240μL反应缓冲液，37℃孵育5min；(2)再加入60μLPTH胶乳试剂，并置37℃孵育；(3)37℃孵育30s后读取吸光值A1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒，其特征在于，包括反应缓冲液和PTH胶乳试剂；/n所述反应缓冲液包括的成分及相应含量为：缓冲液1-4g/L，无机盐15-20g/L，增浊剂20-30g/L，表面活性剂1-3mL/L，稳定剂30-40g/L，防腐剂0.7-1.7mL/L，溶剂为纯化水，pH7.3-7.7；/n所述PTH胶乳试剂包括至少两种通过PTH单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液，每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为1.0-1.5mg/mL的相应PTH单抗标记的胶乳微球；所述胶乳保存液包括的成分及相应含量为：缓冲液10-15g/L，无机盐6-12g/L，表面活性剂2-4mL/L，稳定剂30-80g/L，防腐剂0.6-1.6mL/L，溶剂为纯化水，pH 7.4-7.7；/n其中，在所述PTH胶乳试剂中，每种通过PTH单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒，其特征在于，包括反应缓冲液和PTH胶乳试剂；
所述反应缓冲液包括的成分及相应含量为：缓冲液1-4g/L，无机盐15-20g/L，增浊剂20-30g/L，表面活性剂1-3mL/L，稳定剂30-40g/L，防腐剂0.7-1.7mL/L，溶剂为纯化水，pH7.3-7.7；
所述PTH胶乳试剂包括至少两种通过PTH单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液，每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为1.0-1.5mg/mL的相应PTH单抗标记的胶乳微球；所述胶乳保存液包括的成分及相应含量为：缓冲液10-15g/L，无机盐6-12g/L，表面活性剂2-4mL/L，稳定剂30-80g/L，防腐剂0.6-1.6mL/L，溶剂为纯化水，pH7.4-7.7；
其中，在所述PTH胶乳试剂中，每种通过PTH单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。


2.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒，其特征在于，在所述反应缓冲液中：
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种；
所述增浊剂为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一种或多种；
所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种；
所述稳定剂为BSA和蔗糖中的一种或多种；
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种。


3.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液的pH为7.5。


4.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定PTH的试剂盒法，其特征在于，在所述胶乳保存液中：
所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；
所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种；
所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种；
所述稳定剂为BSA、蔗糖、甘露醇中的一种或多种；
所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮双印，任传伍，
申请(专利权)人：安徽大千生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34