ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品制造技术

本发明专利技术公开了ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品，首次将检测ZC3H8水平的物质用于制备POP早期预警、诊断、预后评估的产品，操作方法简单，以血液为检测样品，可实现快速、批量的检测，ZC3H8水平的表达可通过现有免疫荧光分析法、ELISA、生物芯片法、电化学发光法等方法实现，具有高灵敏度、高特异性、高准确度以及高精确度的特点。

【技术实现步骤摘要】
ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品
本专利技术属于生物技术和医学领域，具体的说，是ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用和产品。
技术介绍
女性盆底器官脱垂（PelvicOrganProlapse，POP）是女性盆底功能障碍性疾病（PelvicFloorDysfunction，PFD）中最为常见、危害面最广的类型，常伴盆腔支持组织的结构和功能缺陷，全球发病率高达20%且呈逐年升高趋势。POP的早发现早治疗，能够改善成年女性生命质量和身心健康，对于提高POP流行病学防控效果具有重要的指导意义，是切实践行健康中国2030规划纲要目标的重要举措之一。目前POP的诊断主要通过临床表型、病史和相关功能性检查，缺乏能反映长期病理过程的功能分子作为早期识别、干预和评价指标和标靶。王凤玫等在“骨形态发生蛋白-1在盆底器官脱垂患者阴道组织中的表达及意义”，《实用妇科杂质》2012年11月第28卷第11期，954-956，中通过手术中获取患者阴道前壁组织，采用免疫印迹方法检测BMP-1的蛋白表达，可以推测出盆底器官脱垂患者阴道组织中BMP-1的含量降低，对前胶原蛋白的剪切能力降低，引起细胞外基质代谢障碍，从而使盆底组织中胶原含量降低，最终引起盆底器官脱垂。但该研究仍存在补足之处，如所取标本仅来源于阴道组织，标本数量较少，还需进一步实验结果验证，另外，标本需进行手术才能获取，无法实现快速判断。我们知道，盆底器官脱垂与多种因素有关，为实现POP的预判和快速诊断，势必需要找一种快速准确的检测指标。r>CCCH型锌指蛋白ZC3H8（ZincfingerCCCH-typecontaining8,ZC3H8），与器官退化性疾病有关，ZC3H8功能障碍导致多个器官退化。秦智慧等在“CCCH型锌指蛋白研究进展”《生物技术通报》2010年第8期，中记载了ZC3H8（也称为胎儿肝脏锌指蛋白1，Flizl）直接结合到GATA-3基因，并强烈抑制GATA-3的转录，但并未有研究报告ZC3H8在POP及其相关产品中的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用，首次将ZC3H8的检测指标用于辅助诊断POP及早期预警和预后评估，可实现高灵敏度、高特异性、高准确度、高精确度的检测和判断。本专利技术的另一目的在于提供一种用于POP早期预警、诊断、预后评估的产品，通过用于检测ZC3H8水平的物质实现POP的批量、快速检测。本专利技术通过下述技术方案实现：ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用，用于检测ZC3H8水平的物质在制备POP早期预警、诊断、预后评估产品中的应用。所述检测是针对受试者的生物样本进行，生物样本选自全血或血浆。所述用于检测ZC3H8水平的物质是用于在蛋白水平上检测ZC3H8的物质。所述物质在蛋白水平上检测ZC3H8的方法包括：免疫荧光分析法、ELISA、生物芯片法、电化学发光法。所述POP早期预警、诊断、预后评估产品包括试剂盒、试纸或其他医学上可实现的产品。一种用于POP早期预警、诊断、预后评估的产品，包括用于检测ZC3H8水平的物质。所述用于检测ZC3H8水平的物质是用于在蛋白水平上检测ZC3H8的物质。所述物质在蛋白水平上检测ZC3H8的方法包括：免疫荧光分析法、ELISA、生物芯片法、电化学发光法。设置检测限为标准值，当检测到的ZC3H8水平高于或等于标准值时，判断为阳性，表明患有POP；当检测到的ZC3H8水平低于标准值时，判断为阴性，表明未患有POP。本专利技术与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：（1）本专利技术通过研究首次发现，由于POP患者的盆腔肌组织功能障碍，导致女性POP患者血浆中ZC3H8水平显著高于健康对照女性，因此，基于这一研究基础，首次将ZC3H8作为POP的诊断与预测指标。目前尚未发现以血液样本中的ZC3H8含量作为盆底器官脱垂的检测指标的报道，也未发现以血液样本中的ZC3H8含量为检测指标的盆底器官脱垂检测试剂盒及其制备方法的相关报道。（2）本专利技术方法将检测ZC3H8水平的物质用于制备POP早期预警、诊断、预后评估的产品，如检测试剂盒等，操作方法简单，以血液为检测样品，可实现快速、批量的检测，ZC3H8水平的表达可通过现有免疫荧光分析法、ELISA、生物芯片法、电化学发光法等方法实现，具有高灵敏度、高特异性、高准确度以及高精确度的特点。附图说明图1为实施例2中涉及的A450值-ZC3H8浓度标准曲线。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步地详细说明，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例1：本实施例是以ZC3H8为检测指标的盆底器官脱垂检测试剂盒。主要是将检测ZC3H8水平的物质用于制备盆底器官脱垂检测试剂盒，以辅助POP诊断、早期预警和/或预后评估。具体制备工艺步骤如下：（1）制备包被有鼠抗人ZC3H8单克隆抗体（购自：Invitrogen公司，货号MA5-26969）的多孔板。用pH＝9的碳酸盐缓冲液将鼠抗人ZC3H8单克隆抗体稀释为浓度10μg/mL的稀释液，在抗体稀释液中加入无水甲醇，无水甲醇的加入量以其浓度达到3mL/100mL为限，然后将所述含甲醇的鼠抗人ZC3H8单克隆抗体稀释液按100μL/孔的量加入96孔板的各孔内，在4℃包被12小时；包被时间届满后，将浓度1g/100mL的牛血清白蛋白溶液按120μL/孔的量加入多孔板上的各孔并在37℃进行封闭反应，反应时间为1小时；封闭反应结束后，用pH＝7.2、浓度为0.05mol/L的磷酸盐缓冲液洗涤多孔板，当多孔板上的未反应物被去除后即获得包被有鼠抗人ZC3H8单克隆抗体的多孔板，然后将其置于4℃冰箱中保存备用；（2）制备生物素标记的兔抗人ZC3H8多克隆抗体（购自：Abcam公司，货号ab97821）（Biotin-ZC3H8Ab）检测液。以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，生物素酰-N羟基丁二酰亚胺酯为溶质配制浓度为50μg/μL的酰-N羟基丁二酰亚胺酯溶液，以pH＝9.6、浓度为1mol/L的碳酸盐缓冲液为溶剂、兔抗人ZC3H8多克隆抗体为溶质配制浓度为24mg/mL的兔抗人ZC3H8多克隆抗体溶液，按酰-N羟基丁二酰亚胺酯与兔抗人ZC3H8多克隆抗体的质量比＝1∶7量取所述酰-N羟基丁二酰亚胺酯溶液和所述兔抗人ZC3H8多克隆抗体溶液形成混合液，将所述酰-N羟基丁二酰亚胺酯溶液和所述兔抗人ZC3H8多克隆抗体溶液的混合液在搅拌下（磁力搅拌器，搅拌速度200转/分）于室温反应4小时，即获得生物素标记的兔抗人ZC3H8多克隆抗体（Biotin-ZC3H8Ab）；反应结束后，将含生物素标记的兔抗人ZC3H8多克隆抗体（Biotin-ZC3H8Ab）的反应液装入透析袋中，用pH＝9.2、浓度为0.05mol/L的磷酸盐缓冲液在4℃进行透析，透析时间为12小时，其间更换透析液3次；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用，其特征在于：用于检测ZC3H8水平的物质在制备POP早期预警、诊断、预后评估产品中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用，其特征在于：用于检测ZC3H8水平的物质在制备POP早期预警、诊断、预后评估产品中的应用。


2.根据权利要求1所述的ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用，其特征在于：所述检测是针对受试者的生物样本进行，生物样本选自全血或血浆。


3.根据权利要求1所述的ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用，其特征在于：所述用于检测ZC3H8水平的物质是用于在蛋白水平上检测ZC3H8的物质。


4.根据权利要求3所述的ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用，其特征在于：所述物质在蛋白水平上检测ZC3H8的方法包括：免疫荧光分析法、ELISA、生物芯片法、电化学发光法。


5.根据权利要求1所述的ZC3H8在POP早期预警、诊断、预后评估中的应用，其特征在于：所述POP早...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛晓宇，王涛，高林波，梅玲，崔陶，陈悦悦，魏冬梅，张月婷，张晓莉，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，
类型：发明
国别省市：四川;51