一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物及其制备方法和应用，所述鱼腥草水煎液提取物由鱼腥草生药材加水煎制得到的水煎液冻干后得到。本发明专利技术通过鱼腥草水煎液得到提取物，该制备方法与临床用药时煎药方法一致，经细胞实验证明，其水煎液提取物有抗氧化应激作用，并进一步明确了其中抗氧化应激的主要有效成分，为含有鱼腥草制剂的疗效提供药理学基础。此外，通过调整该有效成分含量，能增加鱼腥草的抗炎抗氧化作用。根据水煎液中的成分比例还能改善临床使用时的煎药条件，使有效成分最大程度的进入水煎液中，增加临床疗效。

【技术实现步骤摘要】
一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物及其制备方法和应用
本专利技术涉及鱼腥草加工
，更具体地，涉及一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物及其制备方法和应用。
技术介绍
鱼腥草(HouttuyniacordataThunb,HC)又名折耳根、狗心草、狗点耳等，来源于三白草科植物蕺菜的干燥地上部分，其味辛，性寒凉，归肺经。药用功效为清热解毒、消痈排脓、利尿通淋，主要治疗肺痈、疮疡肿毒、痔疮便血、脾胃积热等。现代药理研究表明，鱼腥草有明显的抗菌、抗病毒作用，能增强机体免疫功能，还能抗炎、抗过敏和抗肿瘤。近年来，从该植物中已经分离鉴定出许多化合物，但分离方法多采用有机溶剂提取，与临床使用方法不一致。鱼腥草水煎液是否仍具有抗氧化应激作用不明确。
技术实现思路
本专利技术为克服上述现有技术所述的缺陷，提供一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物，本专利技术通过鱼腥草水煎液得到提取物，经细胞实验证明，其水煎液提取物有抗氧化应激作用，并进一步明确了其中抗氧化应激的主要有效成分。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物，由鱼腥草生药材加水煎制得到的水煎液冻干后得到。本专利技术通过鱼腥草水煎液得到提取物，该制备方法与临床用药时煎药方法一致，经细胞实验证明，其水煎液提取物有抗氧化应激作用，并进一步明确了其中抗氧化应激的主要有效成分。优选地，所述鱼腥草水煎液提取物含有有机酸，所述有机酸为d-(-)-奎宁酸、苹果酸、绿原酸、七叶亭或咖啡酸中的一种或几种。优选地，所述鱼腥草水煎液提取物含有黄酮类，所述黄酮类为槲皮苷、金丝桃苷、异槲皮素、芸香苷、尿苷或玫瑰果苷中的一种或几种。本专利技术还保护上述鱼腥草水煎液提取物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：S1.煎制：取鱼腥草生药材，加水煎制，重复多次，得到水煎液；S2.浓缩：将所述水煎液浓缩，得到药液，所述药液的体积与鱼腥草生药材的质量之比为0.9～1.1mL/g；S3.冻干：将所述药液进行冷冻、干燥，得到鱼腥草水煎液提取物。具体地，步骤S1.可以为：称取鱼腥草生药材100g，放置于自动煎药壶中；加入1600mL去离子水浸泡30min；煎煮方法：先用武火(500W)煮沸后，再用文火(200W)煎煮30min；2层纱布过滤；药渣再加1400mL去离子水，武火(500W)煮沸后，再用文火(200W)煎煮20min；2层纱布过滤合并两次滤液。具体地，步骤S2.可以为：用旋转蒸发仪减压浓缩至100mL药液(1mL/g生药)。优选地，步骤S3.中冷冻的温度为-70～-85℃。具体地，步骤S3.可以为：将100mL滤液用50mL离心管分装，每管5mL，放置于-80℃冰箱中冷冻24h，成固体状态；置于冷冻干燥机冷冻干燥；取出称重，冻干粉重量11.63g，得率11.63％，用研钵研磨成粉末状。本专利技术还保护上述鱼腥草水煎液提取物在制备用于增加抗氧化物质SOD、谷胱甘肽或内皮型一氧化氮合成酶的药物中的应用。本专利技术还保护上述鱼腥草水煎液提取物在制备用于降低ROS或谷胱甘肽过氧化物酶的药物中的应用。本专利技术还保护上述鱼腥草水煎液提取物在制备用于降低炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6，以及ROS的药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过鱼腥草水煎液得到提取物，该制备方法与临床用药时煎药方法一致，经细胞实验证明，其水煎液提取物有抗氧化应激作用，并进一步明确了其中抗氧化应激的主要有效成分，为含有鱼腥草制剂的疗效提供药理学基础。此外，通过调整该有效成分含量，能增加鱼腥草的抗炎抗氧化作用。根据水煎液中的成分比例还能改善临床使用时的煎药条件，使有效成分最大程度的进入水煎液中，增加临床疗效。附图说明图1为鱼腥草冻干粉对C2C12细胞活力的影响。图2为鱼腥草冻干粉对TNF-α诱导的C2C12细胞SOD的影响。图3为鱼腥草冻干粉对TNF-α诱导的C2C12细胞ROS的影响。图4为鱼腥草冻干粉对TNF-α诱导的C2C12细胞ROS的影响。图5为鱼腥草冻干粉对TNF-α诱导的C2C12细胞ROS荧光含量的影响。图6为应用UPLC-Q-TOF-MS在正离子模式(A)和负离子模式(B)下的鱼腥草水提物的基本峰强度(BasePeakintensity,BPI)色谱图。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的说明。实施例中的原料均可通过市售得到；除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。实施例1一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物，其制备方法如下：S1.煎制：称取鱼腥草生药材100g，放置于自动煎药壶中；加入1600mL去离子水浸泡30min；煎煮方法：先用武火(500W)煮沸后，再用文火(200W)煎煮30min；2层纱布过滤；药渣再加1400mL去离子水，武火(500W)煮沸后，再用文火(200W)煎煮20min；2层纱布过滤合并两次滤液。S2.浓缩：用旋转蒸发仪减压浓缩至100mL药液(1mL/g生药)。S3.冻干：将100mL滤液用50mL离心管分装，每管5mL，放置于-80℃冰箱中冷冻24h，成固体状态；置于冷冻干燥机冷冻干燥；取出称重，冻干粉重量11.63g，得率11.63％，用研钵研磨成粉末状。得到鱼腥草水煎液提取物，简称鱼腥草冻干粉，即HC冻干粉。试验例1制备鱼腥草冻干粉溶液：称取鱼腥草冻干粉100mg，加入去离子水4mL溶解，配置成25mg/mL的鱼腥草母液。在超净台内用0.22μm滤膜过滤后用于干预细胞。氧化应激测试：(1)配置TNF-α母液重组鼠TNF-α(peprotech)5μg，打开前先12000rpm离心1min，在超净台内打开，加50μL水，轻轻摇晃勿震荡，室温静置30min，得到0.1μg/μL的TNF-α溶液。然后加PBS缓冲液(含5％海藻糖、PH7.2)450μL，将溶液稀释至10ng/μL。将配置好的母液用600μL离心管分装10管，每管50μL，存放于-80℃冰箱。(2)C2C12细胞铺板按1×104/孔铺96孔板，待24h细胞贴壁后，用25mg/mL的鱼腥草按照浓度梯度为0，6.25，12.5，25，50，100，200，400，800，1000μg/mL干预细胞24h。24h后采用MTT法检测细胞活力。MTT结果如图1所示，鱼腥草冻干粉在100μg/mL浓度以下无毒，200μg/mL以上显示出细胞毒性。因此在100μg/mL以内设置3个浓度梯度，即低浓度(25μg/mL)、中浓度(50μg/mL)、高浓度(100μg/mL)。(和0μg/mL对比，*，P＜0.05，**，P＜0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物，其特征在于，由鱼腥草生药材加水煎制得到的水煎液冻干后得到。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于抗氧化应激的鱼腥草水煎液提取物，其特征在于，由鱼腥草生药材加水煎制得到的水煎液冻干后得到。


2.根据权利要求1所述的鱼腥草水煎液提取物，其特征在于，所述鱼腥草水煎液提取物含有有机酸，所述有机酸为d-(-)-奎宁酸、苹果酸、绿原酸、七叶亭或咖啡酸中的一种或几种。


3.根据权利要求1所述的鱼腥草水煎液提取物，其特征在于，所述鱼腥草水煎液提取物含有黄酮类，所述黄酮类为槲皮苷、金丝桃苷、异槲皮素、芸香苷、尿苷或玫瑰果苷中的一种或几种。


4.权利要求1～3任一项所述鱼腥草水煎液提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.煎制：取鱼腥草生药材，加水煎制，重复多次，得到水煎液；
S2.浓缩：将所述水...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖炜，王复婧，王明清，张佳幸，裴婷婷，琚李亮，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44