阿魏酸酯酶制剂、复合酶制剂以及蛋鸡复合饲料制造技术

本发明专利技术提供了一种阿魏酸酯酶制剂，该酶制剂是以阿魏酸酯酶马克斯克鲁维酵母重组菌株，通过高密度发酵获得液体酶，然后加入玉米淀粉、玉米芯粉或麦芽糊精载体进行喷雾干燥制得。本发明专利技术提供的阿魏酸酯酶复合酶制剂能够显著提高饲料的利用率，提高蛋白、淀粉以及非淀粉多糖(NSP)的消化率。本发明专利技术还提供了一种含阿魏酸酯酶的蛋鸡复合饲料，该复合饲料可以提高蛋鸡的产蛋率，降低蛋鸡的料蛋比。

【技术实现步骤摘要】
阿魏酸酯酶制剂、复合酶制剂以及蛋鸡复合饲料
本专利技术属于生物工程
，涉及酶制剂及其应用，具体涉及一种阿魏酸酯酶制剂、含有该阿魏酸酯酶制剂的复合酶制剂以及前述酶制剂在制备蛋鸡复合饲料中的应用。
技术介绍
非淀粉多糖(non-starchpolysaccharides，NSP)是指淀粉以外的多糖，主要有纤维素、半纤维素、果胶、葡聚糖、菊粉、海藻多糖以及几丁质等，在小麦、大麦玉米等谷物中，NSP以纤维素、半纤维素和果胶为主，是人和动物膳食纤维的一部分。在饲料中，半纤维素是一类主要抗营养因子，在动物肠道中会与水分子相互结合缠在一起成为网状胶质结构，增加食糜的黏度，减低脂肪、蛋白质、碳水化合物以及其它营养物的消化吸收，甚至能够影响动物的健康。在饲料中添加降解非淀粉多糖的水解酶，不仅能够将降低食糜的黏度，而且非淀粉多糖的降解能够为动物提供额外的营养，改善肠道菌群，从而提高营养物质消化率、改善动物健康、提高生产性能。饲料中的半纤维素主要包含木聚糖、甘露聚糖、阿拉伯聚糖以及阿魏酸等，在这些成分当中，阿魏酸是一个关键的消化拮抗因素：在木质纤维素中它通过酯键将纤维素、木聚糖和木质素相互紧密交联，从而阻碍酶的水解。半纤维素的降解需要多种酶的协同参与，主要包括木聚糖酶、甘露聚糖酶、半乳糖苷酶、阿拉伯糖苷酶以及阿魏酸酯酶等等。其中，阿魏酸酯酶(feruloylesterases，EC3.1.1.73)又称为肉桂酸酯酶，是羧酸酯水解酶的一个亚类，其能够水解阿魏酸等酚酸与半纤维素、木质素等之间的酯键，打破植物细胞壁中的致密网状结构，使纤维素暴露，提高纤维素的降解率，同时还释放出阿魏酸。阿魏酸具有很强的抗氧化、抗炎症作用，广泛应用于食品添加剂和药品中，在机体内可以清除自由基，促进清除自由基的酶的产生，增加谷胱甘肽转硫酶和醌还原酶的活性，有较强的抗血小板聚集、抗血栓形成、抗心龇缺血等作用，并抑制酪氨酸酶活性，来调节机体生理机能。若在饲料中添加阿魏酸酯酶，则不仅能够促进非淀粉多糖的水解提高饲料的利用率，而且能够在酸性条件下水解释放阿魏酸，提高饲料的营养价值。然而，现有技术中，虽然已经从多种微生物中可以发现或分离得到阿魏酸酯酶，如橄榄色链霉菌Streptomycesolivochromogenes、荧光假单胞菌Pseudomonasfluorescens、嗜松青霉Penicilliumpinophilum、裂褶菌Penicilliumpinophilum以及黑曲霉Aspergillusniger等，但是这些菌株的阿魏酸酯酶表达量较低，其中产酶量最高的菌株黑曲霉表达量仅为10.6U/mL，并不能达到作为饲料添加剂的需求；目前，国内外也未有将阿魏酸酯酶产品的应用于饲料添加的报道。
技术实现思路
本专利技术是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种表达量高、能够应用于饲料添加的阿魏酸酯酶产品，同时提供含有该阿魏酸酯酶产品的蛋鸡复合饲料。作为一种实施形态，本专利技术提供了一种阿魏酸酯酶制剂，其特征在于，利用重组表达阿魏酸酯酶的马克斯克鲁维酵母菌株制备得到。上述阿魏酸酯酶制剂中还可以具有这样的技术特征，其中，利用重组表达阿魏酸酯酶的马克斯克鲁维酵母菌株制备的过程包括如下步骤：i)采用阿魏酸酯酶重组马克斯克鲁维酵母菌株通过高密度发酵获得阿魏酸酯酶液体酶；ii)在阿魏酸酯酶液体酶中添加10-20％的载体，该载体为玉米淀粉、玉米芯粉或麦芽糊精中的一种或任意几种的组合；iii)喷雾干燥获得阿魏酸酯酶制剂。作为另一种实施形态，本专利技术提供了一种阿魏酸酯酶复合酶制剂，其特征在于，含有纤维素酶、木聚糖酶和阿魏酸酯酶，其中，阿魏酸酯酶为如上任一项所述的阿魏酸酯酶制剂。上述阿魏酸酯酶复合酶制剂中还可以具有这样的技术特征，其中，以酶活计，每克阿魏酸酯酶复合酶制剂含有纤维素酶1000-3000U、木聚糖酶20000-40000U、阿魏酸酯酶制剂100000-300000U。进一步，以酶活计，每克阿魏酸酯酶复合酶制剂可以含有纤维素酶2000U、木聚糖酶30000U、阿魏酸酯酶制剂200000U。上述阿魏酸酯酶复合酶制剂中还可以含有α-淀粉酶、甘露聚糖酶、α-半乳糖苷酶以及植酸酶中的一种或任意几种的组合。进一步，α-淀粉酶、甘露聚糖酶、α-半乳糖苷酶以及植酸酶的含量可以分别为6500U/g、1250U/g、1000U/g、5000U/g。作为又一种实施形态，本专利技术还提供了一种蛋鸡复合饲料，其特征在于，含有蛋鸡日粮以及如上任一项所述的阿魏酸酯酶复合酶制剂。上述蛋鸡复合饲料中还可以具有这样的技术特征，其中，阿魏酸酯酶复合酶制剂的添加量为每吨蛋鸡日粮中添加200-1000克。专利技术的作用与效果根据本专利技术所提供的阿魏酸酯酶制剂、复合酶制剂以及蛋鸡饲料，由阿魏酸酯酶制剂采用重组表达阿魏酸酯酶的马克斯克鲁维酵母菌株制备得到，该菌株的表达酶活高，且容易实现高密度发酵，因此能够采用简单的工艺制得高酶活的阿魏酸酯酶制剂。相应地，利用该阿魏酸酯酶制剂制得的复合酶制剂也具有良好的酶活且工艺简单，而采用该阿魏酸酯酶制剂制得的蛋鸡饲料能够显著提高饲料原料的蛋白、淀粉以及非淀粉多糖的利用率，降低肠道食糜的黏度，并释放抗氧化物质阿魏酸，提高蛋鸡的产蛋率。附图说明图1为本专利技术实施例1的马克斯克鲁维酵母重组菌的高密度发酵制备阿魏酸酯酶的结果。图2为本专利技术实施例3的阿魏酸酯酶复合酶制剂的体外仿生试验结果柱形图。图3为本专利技术实施例4的含阿魏酸酯酶的蛋鸡复合饲料喂食效果柱形图。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下结合实施例及附图对本专利技术作具体阐述。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术，而不用于限制本专利技术的范围。下述各实施例中，未注明来源的试剂、试剂盒等经由一般商业途径购得，未注明的实验操作过程及条件参照本领域常规进行。实施例中，重组表达阿魏酸酯酶的马克斯克鲁维酵母菌株为Fim-1-AnfeaA，该菌株是将来源于黑曲霉(Aspergillusniger)阿魏酸酯酶AnfaeA基因经优化后转入马克斯克鲁维酵母获得，具体获得过程如下：1、获取优化后AnfaeA基因核苷酸序列参照马克斯克鲁维酵母的密码子偏好性，在不改变氨基酸序列的前提下将来源于黑曲霉(Aspergillusniger)的阿魏酸酯酶AnfaeA基因核苷酸序列进行密码子优化。其中，来源于黑曲霉的阿魏酸酯酶AnfaeA基因核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，优化后AnfaeA基因核苷酸序列如SEQIDNo.2所示，优化后对应的氨基酸序列如SEQIDNo.3所示。2、构建黑曲霉来源的阿魏酸酯酶AnfaeA马克斯克鲁维酵母重组表达载体以合成的AnfaeADNA为模板，用引物AnfaeA-132-F(序列如SEQIDNo.4所示)和AnfaeA-132-R(序列如SEQIDNo.5所示)PCR扩增AnfaeA基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种阿魏酸酯酶制剂，其特征在于，利用重组表达阿魏酸酯酶的马克斯克鲁维酵母菌株制备得到。/n

【技术特征摘要】
1.一种阿魏酸酯酶制剂，其特征在于，利用重组表达阿魏酸酯酶的马克斯克鲁维酵母菌株制备得到。


2.根据权利要求1所述的阿魏酸酯酶制剂，其特征在于：
其中，利用所述重组表达阿魏酸酯酶的马克斯克鲁维酵母菌株制备的过程包括如下步骤：
i)采用所述阿魏酸酯酶重组马克斯克鲁维酵母菌株通过高密度发酵获得阿魏酸酯酶液体酶；
ii)在所述阿魏酸酯酶液体酶中添加10％-20％质量百分比的载体，该载体为玉米淀粉、玉米芯粉或麦芽糊精中的一种或任意几种的组合；
iii)喷雾干燥获得所述阿魏酸酯酶制剂。


3.一种阿魏酸酯酶复合酶制剂，其特征在于，含有纤维素酶、木聚糖酶和阿魏酸酯酶制剂，
其中，所述阿魏酸酯酶制剂为权利要求1～2中任一项所述的阿魏酸酯酶制剂。


4.根据权利要求3所述的阿魏酸酯酶复合酶制剂，其特征在于：
其中，以酶活计，每克所述阿魏酸酯酶复合酶制剂含有所述纤维素酶1000-3000U、所述木聚糖酶20000-40000U、所述阿魏酸酯酶制剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕红，詹志春，周樱，周峻岗，余垚，
申请(专利权)人：复旦大学，武汉新华扬生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31