免疫原性组合物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了蛋白激酶C(PKC‑θ)抑制剂用于增强功能上受抑制的T细胞其免疫效应功能的用途，所述功能上被抑制的T细胞已经历从上皮向间充质的转化(EMT)。在具体的实施方案中，公开了PKC‑θ抑制剂用于增强疲惫的T细胞对PD‑1结合拮抗剂重新活化的敏感性。本发明专利技术的组合物可用于治疗一系列疾患，包括T细胞功能障碍性疾患，例如病原性感染和过度增殖性疾患。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫原性组合物及其用途
本申请要求2017年11月8日提交的标题为“免疫原性组合物及其用途”的澳大利亚临时申请号2017904540的优先权，其内容通过引用整体并入本文。本专利技术一般涉及免疫原性组合物。更具体地，本专利技术涉及蛋白激酶C(PKC-θ)抑制剂用于增强已经历上皮向间充质转化(EMT)的功能上受抑制T细胞的免疫效应功能的用途。在具体的实施方案中，PKC-θ抑制剂用于增强疲惫的T细胞对PD-1结合拮抗剂重新活化的敏感性。本专利技术的组合物可用于治疗一系列疾患，包括T细胞功能障碍性疾患，例如病原性感染和过度增殖性疾患。
技术介绍
程序性死亡受体1(PD-1)是一种免疫检查点调节剂，其可在各种免疫细胞中表达，包括其活化后的T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞、NKT(NKT)细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞(DC)。PD-1与其两个配体结合：程序性细胞死亡1配体-1(PD-L1；B7-H1；CD274)和PD-L2(B7-DC；CD273)，两者都是B7家族成员。PD-L1在包括造血细胞和非造血细胞的多种细胞中组成型表达。相反，PD-L2的表达限于专门的抗原呈递细胞(APC；单核细胞、巨噬细胞和DC)和B细胞的某些亚组。炎性细胞因子例如干扰素(IFN；α、β和γ)是PD-L1和PD-L2表达的有效调节剂。PD-1由T细胞受体(TCR)信号传导诱导，当PD-1与PD-LI或PD-L2结合时，它会抑制TCR/CD28信号传导和T细胞活化。PD-1的这些免疫调节作用可限制T细胞过度活化，从而防止免疫介导的组织损伤。然而，长时间的TCR刺激和PD-1表达导致T细胞疲惫，这是一种T细胞功能障碍的状态，其由不良的T细胞效应功能、抑制性受体的持续表达和不同于功能性效应T细胞或记忆T细胞的转录状态所定义，这通常与肿瘤控制无效和病毒持续感染有关(Wherry,EJ.,2011.NatureImmunology12：492-499)。因此，PD-1通路是T细胞响应结果的重要决定因素，它调节有效的宿主防御和免疫病理之间的平衡，暗示了针对各种人类疾病操纵PD-1通路的潜力。PD-1通路的阻断已被用于重新活化疲惫的T细胞并恢复抗肿瘤或抗病原体免疫响应。实际上，阻断PD-1通路的抗体已在显著数量的晚期癌症患者中显示出令人鼓舞的临床结果。但是，迄今为止的临床试验数据显示，不同类型的癌症对PD-1免疫检查点抑制疗法的响应率差异很大，范围为18％至87％。这些试验还发现，患者可以表现出对PD-1免疫检查点抑制疗法的原发性、适应性或甚至获得性耐受性。此外，新出现的数据表明，某些患者在接受抗PD-1抗体后会出现疾病状态的过度进展。最近，Huang等人(2017,Nature545：60-65)使用抗PD-1抗体(派姆单抗(pembrolizumab))治疗之前和之后的IV期黑色素瘤患者外周血的免疫谱分析，鉴定了循环疲惫表型的CD8T细胞(Tex细胞)的药代动力学变化。大多数患者表现出对派姆单抗的免疫响应，但这是短暂的。在许多患者中，临床失败不仅是由于无法诱导免疫重新活化，还在于T细胞的重新活化与肿瘤负荷之间的不平衡。在治疗前肿瘤负荷中测定的循环Tex细胞的重新活化的幅度与临床响应相关，这增加了一种可能性，即，如果肿瘤负荷高，那么即使采用抗PD-1疗法进行强有力的重新活化临床上也可能无效。
技术实现思路
本专利技术源于出乎意料的发现，即增加蛋白激酶Cθ(PKC-θ)在T细胞(例如CD8+T细胞)核中的易位诱导细胞的上皮向间充质转化(EMT)，抑制其免疫效应功能，包括降低T细胞活化和效应能力的生物标记物(例如，白细胞介素2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α))的表达、以及增加锌指E-Box结合同源异型盒1(ZEB1)的表达，ZEB1是与癌症进展和T细胞效应抑制相关的T细胞响应的负调节物，包括抑制IL-2和E-钙黏附蛋白的表达，并诱导EMT。出乎意料的是，发现PKC-θ和ZEB1在核中共定位，并且这种共定位至少部分地有助于抑制T细胞的功能。值得注意的是，专利技术人已经确定PKC-θ和ZEB1在核中非常接近并且形成复合物，预测该复合物为T细胞功能的抑制物。本专利技术人还发现，将这些间充质、功能上受到抑制的T细胞暴露于PKC-θ抑制剂导致T细胞表观遗传重编程，并显著地解除其免疫效应功能的抑制，包括提高T细胞活化和效应能力的生物标记物(例如，IL-2、IFN-γ和TNF-α)的表达、降低T细胞效应抑制和癌症进展的生物标记物(例如，ZEB1)的表达、以及降低T细胞疲惫的生物标记物(例如PD-1和脱中胚蛋白(Eomesodermin，EOMES))的表达、以及升高转录因子TBET的表达，这增加了适应性和固有免疫系统的细胞中IFN-γ的产生。出人意料的是，还发现PKC-θ抑制剂介导的表观遗传重编程赋予疲惫的T细胞对PD-1结合拮抗剂重新活化的敏感性增加。这些发现已被转化为实践用于增强T细胞的免疫效应功能和用于治疗与T细胞功能障碍相关的疾病或病症的方法和组合物，如下文所述。相应地，一方面，本专利技术提供了用于增强T细胞(例如，CD8+T细胞)功能、或用于治疗T细胞功能障碍性疾患的组合物。这些组合物通常包含PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂，由PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂组成或基本上由PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂组成。PKC-θ抑制剂合适地选自PKC-θ酶促活性的抑制剂和PKC-θ核易位的抑制剂。在具体的实施方案中，PKC-θ是PKC-θ核易位的抑制剂，其非限制性示例包括对应于PKC-θ的核定位位点的肽，如在例如国际公开WO2017/132728Al中公开的那些(例如，importinib4759)。PD-1结合拮抗剂适当地抑制PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。在优选的实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1拮抗剂抗体，其说明性示例包括尼武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、兰博珠单抗(lambrolizumab)和匹地珠单抗(pidilizumab)。在其他实施方案中，PD-1结合拮抗剂是免疫粘附素(例如，AMP-224)。在一些实施方案中，组合物还包含辅助剂(例如(化学治疗剂)，用于治疗或辅助治疗T细胞功能障碍性疾患。所述组合物典型地是药物组合物或制剂，其任选地包含药学上可接受的载体。本专利技术的另一方面提供了增强T细胞功能的方法。这些方法通常包括以下、由以下组成、或基本上由以下组成：使T细胞与PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂接触，从而增强T细胞功能。适当地，增强的T细胞功能包括以下中的任一种或多种：增加的细胞因子(如IL-2、IFN-γ、TNF-α)的产生，增加的CD8+T细胞活化，增加的T细胞受体对抗原或抗原肽的识别(所述抗原或抗原肽衍生自MHCI类分子情况时的抗原)，增加的对MHCI类分子所呈递的细胞的清除，以及增加的对表达抗原的靶细胞的溶细胞杀伤。在一些实施方案中，T细胞具有间充质表型。适当地，T细胞具有核PKC-θ的异常表达。在这种类型的代表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，所述组合物用于增强T细胞(例如，CD8

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171108 AU 20179045401.一种组合物，所述组合物用于增强T细胞(例如，CD8+T细胞)功能、或用于治疗T细胞功能障碍性疾患，所述组合物包含PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂，或由PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂组成，或基本上由PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂组成。


2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述PKC-θ抑制剂是PKC-θ核易位的抑制剂。


3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述PKC-θ抑制剂是对应于PKC-θ的核定位位点的肽。


4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述PKC-θ抑制剂是由式(XXVI)表示的蛋白分子：
Z1X1X2X3X4IDX5PPX6X7X8X9X10X11Z2(XXVI)
其中：
“Z1”和“Z2”独立地不存在、或独立地选自蛋白部分和保护部分中的至少一个；所述蛋白部分包含约1至约50个氨基酸残基(以及其间所有整数个氨基酸残基)；
“X1”不存在或选自碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基包括R、K及其修饰形式；
“X2”和“X3”独立地选自碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基包括R、K及其修饰形式；
“X4”选自带电荷氨基酸残基，所述带电荷氨基酸残基包括R、K、D、E及其修饰形式；
“X5”不存在或为W或其修饰形式；
“X6”选自芳族或碱性氨基酸残基，所述芳族或碱性氨基酸残基包括F、Y、W、R、K及其修饰形式；
“X7”选自碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基包括R、K及其修饰形式；
“X8”不存在或为P或其修饰形式；
“X9”为选自碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基包括R、K及其修饰形式；
“X10”选自疏水性残基，所述疏水性残基包括V、L、I、M及其修饰形式和P及其修饰形式；
“X11”选自碱性氨基酸残基，所述碱性氨基酸残基包括R、K及其修饰形式。


5.根据权利要求4所述的组合物，其中“X1”至“X11”选自以下一个或多个的组合：
“X1”不存在或为R；
“X2”为R；
“X3”为K；
“X4”为E或R；
“X5”不存在或为W；
“X6”为F或R；
“X7”为R；
“X8”不存在或为P；
“X9”为K；
“X10”为V或P；以及
“X11”为K。


6.根据权利要求4或5所述的组合物，其中“Z1”由10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸残基组成。


7.根据权利要求4至6中任一项所述的组合物，其中“Z2”由10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸残基组成。


8.根据权利要求4至7中任一项所述的组合物，其中“Z1”和“Z2”中的氨基酸残基选自任何氨基酸残基。


9.根据权利要求4或5所述的组合物，其中“Z1”是由式XXVII表示的蛋白分子：
X12X13X14X15X16(XXVII)
其中
“X12”不存在或为保护部分；
“X13”不存在或选自P和碱性氨基酸残基，其中所述碱性氨基酸残基包括R、K及其修饰形式；
“X14”不存在或选自P和碱性氨基酸残基，其中所述碱性氨基酸残基包括R、K及其修饰形式；
“X15”不存在或选自P和碱性氨基酸残基，其中所述碱性氨基酸残基包括R、K及其修饰形式；
“X16”不存在或选自P和碱性氨基酸残基，其中所述碱性氨基酸残基包括R、K及其修饰形式。


10.根据权利要求4、5和9中任一项所述的组合物，其中“Z2”是由式XXVIII表示的蛋白分子：
X17X18X19X20(XXVIII)
其中：
“X17”不存在或选自任何氨基酸残基；
“X18”不存在或选自任何氨基酸残基；
“X19”不存在或选自任何氨基酸残基；
“X20”不存在或为保护部分。


11.根据权利要求4或5所述的组合物，其中“Z1”和“Z2”不存在。


12.根据权利要求4所述的组合物，其中式XXVI的蛋白分子包含SEQIDNO：4或5表示的氨基酸序列，由SEQIDNO：4或5表示的氨基酸序列组成，或基本上由SEQIDNO：4或5表示的氨基酸序列组成，所述SEQIDNO：4或5如下所示：
RKEIDPPFRPKVK[SEQIDNO：4]
RRKRIDWPPRRKPK[SEQIDNO：5]。


13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述PKC-θ抑制剂是PKC-θ酶活性的抑制剂。


14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中所述PD-1结合拮抗剂抑制PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。


15.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中所述PD-1结合拮抗剂是抗PD-1拮抗剂抗体。


16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述抗PD-1拮抗剂抗体选自尼武单抗、派姆单抗、兰博珠单抗和匹地珠单抗。


17.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中所述PD-1结合拮抗剂是免疫粘附素(例如，AMP-224)。


18.根据权利要求1至17中任一项所述的组合物，其进一步包含用于治疗或用于辅助治疗T细胞功能障碍性疾患的辅助剂(例如，化学治疗剂)。


19.根据权利要求1至18中任一项所述的组合物，其进一步包含药学上可接受的载体。


20.一种增强T细胞功能的方法，所述方法包括以下、由以下组成、或基本上由以下组成：使T细胞与PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂接触，从而增强T细胞功能。


21.根据权利要求20所述的方法，其中增强T细胞功能包括以下中的任一种或多种：增加细胞因子如IL-2、IFN-γ、TNF-α的产生，增加CD8+T细胞的活化，增加T细胞受体对衍生自MHCI类分子情况时的抗原的抗原或抗原肽的识别，增加对MHCI类分子所呈递的细胞的清除，以及增加对表达抗原的靶细胞的溶细胞杀伤。


22.根据权利要求20或21所述的方法，其中所述T细胞具有间充质表型。


23.根据权利要求20至22中任一项所述的方法，其中所述T细胞具有核PKC-θ的异常表达。


24.根据权利要求23所述的方法，其中所述T细胞表达核PKC-θ的水平高于在相同T细胞中TBET的表达水平，和/或所述T细胞表达核PKC-θ的水平高于在活化T细胞中的表达水平。


25.根据权利要求20至24中任一项所述的方法，其中所述T细胞是一种表现出T细胞疲惫或无反应性的T细胞。


26.根据权利要求25所述的方法，其中所述T细胞表达EOMES的水平高于TBET的水平和/或具有升高的PD-1表达。


27.根据权利要求20至26中任一项所述的方法，其中所述T细胞是CD8+T细胞。


28.一种增强表达PD-1的免疫效应细胞的免疫效应功能的方法，所述方法包括以下、由以下组成、或基本上由以下组成：使免疫效应细胞与PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂接触，从而增强免疫效应细胞的免疫效应功能。


29.根据权利要求28所述的方法，其中增强的免疫效应功能包括以下任何一种或多种：增加T细胞受体对衍生自MHCII类分子情况时的抗原的抗原或抗原肽的识别，增加细胞因子释放和/或CD8+淋巴细胞(CTL)和/或B细胞的活化，增加T细胞受体对衍生自MHCI类分子情况时的抗原的抗原或抗原肽的识别，增加对MHCI类分子所呈递的细胞的清除，即，所述细胞的特征在于通过I类MHC呈递抗原，例如通过凋亡或穿孔素介导的细胞裂解，增加细胞因子例如IL-2、IFN-γ、TNF-α的产生，以及增加对表达抗原的靶细胞的特异性溶细胞杀伤。适当地，免疫效应细胞具有核PKC-θ的异常表达。


30.根据权利要求29所述的方法，其中所述免疫效应细胞表达的核PKC-θ水平高于对照免疫效应细胞(例如，具有正常的或非受抑制的免疫效应功能的免疫效应细胞)的表达水平。


31.一种治疗受试者中T细胞功能障碍性疾患的方法，所述方法包括以下、由以下组成、或基本上由以下组成：向所述受试者同时施用有效量的PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂，以治疗T细胞功能障碍性疾患。


32.根据权利要求31所述的方法，其中以协同有效量施用PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂。


33.根据权利要求31或32所述的方法，其中所述T细胞功能障碍性疾患是T细胞的疾患或病症，其特征在于对抗原刺激的响应降低和/或通过PD-1的抑制性信号转导增加。


34.根据权利要求31至33中任一项所述的方法，其中所述T细胞功能障碍性疾患是其中T细胞分泌细胞因子、增殖或进行溶细胞活性的能力降低的疾患。


35.根据权利要求31至34中任一项所述的方法，其中对抗原刺激的响应降低导致对病原体或肿瘤的控制无效。


36.根据权利要求31至35中任一项所述的方法，其中所述T细胞功能障碍性疾患是其中T细胞无反应性的一种疾患。


37.根据权利要求31至36中任一项所述的方法，其中所述T细胞功能障碍性疾患选自未解决的急性感染、慢性感染和肿瘤免疫。


38.根据权利要求31至37中任一项所述的方法，其中所述T细胞功能障碍性疾患是癌症或感染，其包含具有间充质表型的T细胞(例如CD8+T细胞)。


39.根据权利要求31至38中任一项所述的方法，其中所述T细胞表达核PKC-θ的水平高于在相同T细胞中TBET的表达水平，和/或所述T细胞表达核PKC-θ的水平高于在活化T细胞中的表达水平。


40.根据权利要求31至39中任一项所述的方法，其中所述T细胞是一种表现出T细胞疲惫或无反应性的T细胞。


41.根据权利要求31至40中任一项所述的方法，其中所述T细胞表达EOMES的水平高于TBET的水平和/或具有升高的PD-1表达。


42.根据权利要求31至41中任一项所述的方法，其中所述T细胞是肿瘤浸润淋巴细胞。


43.根据权利要求31至41中任一项所述的方法，其中所述T细胞是循环淋巴细胞。


44.根据权利要求31至43中任一项所述的方法，其中所述癌症是皮肤癌(例如，黑色素瘤)、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、胰腺癌、子宫内膜癌、结肠癌、肾癌、食道癌、前列腺癌、结肠直肠癌、成胶质细胞瘤、神经母细胞瘤或肝细胞癌。


45.根据权利要求44所述的方法，其中所述癌症是转移性癌症。


46.根据权利要求45所述的方法，其中所述转移性癌症是转移性黑色素瘤或转移性肺癌。


47.根据权利要求31至43中任一项所述的方法，其进一步包括向受试者同时施用PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂、辅助剂(例如，化学治疗剂)或辅助疗法(例如，消融或细胞毒性疗法)，用于治疗或辅助治疗T细胞功能障碍性疾患。


48.一种治疗或延缓受试者中癌症进展的方法，所述方法包括以下、由以下组成、或基本上由以下组成：向所述受试者同时施用有效量的PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂，以治疗或延缓癌症的进展。


49.根据权利要求48所述的方法，其中所述受试者已被诊断患有癌症，其中在来自所述受试者的癌症的肿瘤样品中，T细胞表达核PKC-θ的水平高于在相同T细胞中TBET的表达水平，和/或所述T细胞表达核PKC-θ的水平高于在活化T细胞中的表达水平。


50.一种增强患有癌症的个体中免疫功能的方法(例如，免疫效应功能)，所述方法包括以下、由以下组成、或基本上由以下组成：向所述个体同时施用有效量的PKC-θ抑制剂和PD-1结合拮抗剂，以增强免疫功能。
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【专利技术属性】
技术研发人员：S·拉奥，
申请(专利权)人：艾比克斯治疗私人有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU