分离的T细胞受体和应用制造技术

本发明专利技术分离的T细胞受体和应用，所述分离的T细胞受体包括α链和β链中的至少一者，β链可变区的CDR3具有SEQ ID NO.7至10任一所示的序列，用此TCR修饰的免疫细胞具有显著的抗肿瘤效果。

【技术实现步骤摘要】
分离的T细胞受体和应用
本专利技术本专利技术属于细胞免疫学、基因工程领域，涉及一种分离的T细胞受体和应用。
技术介绍
T细胞相关免疫疗法在近期的癌症研究中大放异彩，“主力部队”是CAR-T和TCR-T这两种技术。相对于CAR-T细胞疗法，TCR-T疗法的关注度相对低些，但是这两种细胞疗法都属于利用患者自身的T淋巴细胞治疗癌症的前沿基因疗法。TCR-T疗法通过转导嵌合抗原受体或者TCRα/β异二聚体，来提高特异性识别肿瘤相关抗原(TumorAssociatedAntigen,TAA)的TCR(Tcellreceptor，T细胞抗原受体)的亲和力和战斗力，使T淋巴细胞能够重新高效的识别靶细胞。通过输注能够识别特异靶标的基因修饰T淋巴细胞，TCR-T疗法赋予免疫系统以新的非自然免疫活性。这种方法除了能像化疗和靶向治疗一样快速杀灭肿瘤外，还避免了疫苗和T淋巴细胞检查点疗法的延迟效应。目前已知，TCR的多肽链依据抗原结构和编码基因的不同，有α、β、γ和δ4种。TCR分子的4条多肽链可分为细胞外、跨膜和细胞质3部分，其中肽链氨基端在细胞外，羧基端在细胞内；氨基端肽链的氨基酸顺序变化较大，称为可变域；近膜端肽链的氨基酸顺序变化少，称为保守域。根据受控基因片段的不同，细胞外肽链又分为V(可变区)、D(高变区)、J(结合区)和C(恒定区)4个区域，其中α链由V、J和C基因节段编码，β链由V、D、J和C基因节段编码。细胞外肽链的可变域存在4个互补结合功能区(complementarydeterminingreligion，CDR)。V基因编码CDR1和CDR2，而CDR3是唯一非胚系编码的抗原特异性结合部位。TCR基因多态性主要由CDR3决定。到目前为止，TCR-T细胞免疫疗法已在部分实体肿瘤的治疗中取得了较好的疗效，但是仍存在受抗原限制、杀伤活性低等缺点，研究高效、低毒及可操控的TCR-T细胞免疫法在肿瘤治疗中具有理想的应用前景。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术提供一种的分离的T细胞受体以及与该受体相关的核酸、重组表达载体、T细胞。本专利技术还提供了用于治疗或预防肿瘤和/或癌症、或用于检测宿主的肿瘤和/或癌症的包含T细胞受体的药物组合物。本专利技术提供的T细胞受体及其相关的产品具有较好的杀伤效果。具体而言，本专利技术提供了如下内容：(1)一种分离的T细胞受体，包所述括α链和β链中的至少一者，β链可变区的CDR3具有SEQIDNO.7至10任一所示的序列。根据(1)所述的T细胞受体，所述T细胞受体的β链可变区的CDR1序列和CDR2序列分别具有如SEQIDNO.5和6所示的序列。作为一种优选的实施方式，所述T细胞受体的β链可变区具有SEQIDNO.11所示的氨基酸序列。作为另外一种优选的实施方式，所述T细胞受体的β链可变区具有SEQIDNO.12所示的氨基酸序列。作为作为另外一种优选的实施方式，所述T细胞受体的β链可变区具有SEQIDNO.13所示的氨基酸序列。作为作为另外一种优选的实施方式，所述T细胞受体的β链可变区具有SEQIDNO.14所示的氨基酸序列。根据(1)所述的T细胞受体，所述T细胞受体的α链可变区的CDR3具有SEQIDNO.3所示的序列。作为一种优选的实施方式，α链可变区的CDR1和CDR2具有SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的序列。(2)一种分离的分离的、编码T细胞受体的核酸，所述核酸编码(1)所述的T细胞受体，或α或β链，或可变结构域，或具有结合抗原能力的片段。作为一种优选的实施方式，本专利技术的核酸的核苷酸序列进行编码子优化以增加基因表达、蛋白翻译效率以及蛋白表达，从而增强TCR识别抗原的能力。编码子优化包括但不限于翻译启动区域的修饰、改变mRNA结构片段、以及使用编码同一氨基酸的不同密码子。在其它的实施方案中，可以对上述TCR编码核酸的序列进行突变，包括去除、插入和/或置换一个或多个氨基酸密码子，使得所表达的TCR识别抗原的功能不变或者增强。例如，在一个实施方案中，进行保守氨基酸置换，包括对上述TCRα链和/或β链的可变区中的一个氨基酸用结构和/或化学属性相似的另一个氨基酸进行置换。术语“相似的氨基酸”是指具有相似的极性、电负荷、可溶性、疏水性、亲水性等属性的氨基酸残基。突变后的TCR仍具有识别上述被靶细胞提呈的抗原多肽的生物活性。(3)一种重组表达载体，含有与启动子有效连接的、(2)中所述的核酸，和/或其互补序列。作为一种优选的实施方式，在所述重组表达载体中，本专利技术所述的DNA合适地与启动子、增强子、终止子和/或polyA信号序列有效连接。本专利技术的重组表达载体的上述作用元件的组合能够促进DNA的转录和翻译，并增强mRNA的稳定性。在一个实施方案中，重组表达载体上的α链和β链基因的表达可以由两个不同的启动子所驱动，启动子包括各种已知的类型，例如强表达的、弱表达的、可诱导的、组织特异性的、和分化特异性的启动子。启动子可以是病毒来源的或者非病毒来源的，例如CMV启动子、MSCV的LTR上的启动子、EF1-α启动子、和PGK-1启动子。两个启动子的驱动方向可以是同向也可以是反向的。在另一个实施方案中，重组表达载体上的α链和β链基因的表达可以由同一个启动子所驱动，例如编码单链嵌合T细胞受体的情况，α链的核苷酸序列和β链的核苷酸序列由Furin-F2A多肽编码序列相连接。在另一些实施方案中，重组表达载体除了包含α链和β链基因外，还可以包含其它功能分子的编码序列。一个实施方案包括表达自发荧光蛋白(如GFP或其它荧光蛋白)以用于体内追踪成像。另一个实施方案包括表达可诱导的自杀基因系统。本专利技术对表达载体没有特别的限制，但可以是能在包括哺乳动物细胞(例如，人、猴、兔、大鼠、仓鼠或小鼠细胞)、植物细胞、酵母细胞、昆虫细胞和细菌细胞(如大肠杆菌(E.coli))在内的真核或原核细胞内复制和/或表达多核苷酸的载体。较佳地，它可以是载体，包括至少一选择性标记，可操作地连接到合适的启动子，以致可以在宿主细胞内表达多核苷酸。例如，载体可以包括导入噬菌体、质粒、粘粒、微型染色体、病毒或反转录病毒载体的多核苷酸。(3)一种T细胞受体修饰的细胞，所述细胞的表面被(1)所述的T细胞受体修饰。作为优选的实施方式，所述细胞包括原始T细胞或其前体细胞，NKT细胞，或T细胞株。所述“T细胞受体修饰”中的“修饰”是指，通过基因转染使细胞表达有本专利技术所述的T细胞受体，即，所述T细胞受体通过跨膜区锚定在所修饰的细胞的细胞膜上，并具有识别抗原多肽的功能。(4)一种制备(3)所述的T细胞受体修饰的细胞的方法，包括以下步骤：1)提供细胞；2)提供(2)所述的核酸；3)将所述核酸转染入所述细胞中。作为一种可选择的实施方式，所述的细胞来自自体。作为另一种可选择的实施方式，所述的细胞来自自体。在本专利技术中，所述的细胞包括原始T细胞或其前体细胞、NKT细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的T细胞受体，包括α链和β链中的至少一者，其特征在于，β链可变区的CDR3具有SEQ ID NO.7至10任一所示的序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种分离的T细胞受体，包括α链和β链中的至少一者，其特征在于，β链可变区的CDR3具有SEQIDNO.7至10任一所示的序列。


2.根据权利要求1所述的T细胞受体，其特征在于，β链可变区的CDR1和CDR2分别具有如SEQIDNO.5和6所示的序列；优选的，β链可变区具有SEQIDNO.11至14任一所示的序列。


3.根据权利要求1所述的T细胞受体，其特征在于，α链可变区的CDR3具有SEQIDNO.3所示的序列；优选的，α链可变区的CDR1和CDR2具有SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的序列。


4.一种分离的、编码T细胞受体的核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1至3任一项所述的T细胞受体，或α或β链，或可变结构域，或具有结合抗原能力的片段。


5.一种重组表达载体，其特征在于，含有与启动子有效连接的、根据权利要求4中所述的核酸，和/或其互补序列。


6.一种T细胞受体修饰的细胞，其特征在于，该细胞的...

【专利技术属性】
技术研发人员：于川，李宜声，侯晨芳，
申请(专利权)人：深圳豪石生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44