一种五倍子有效部位的分离方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种五倍子有效部位的分离方法及其用途，该方法将五倍子药材粉碎过筛，回流提取，合并提取液，采用聚酰胺树脂为填料进行柱层析，以不同体积比的乙醇‑水溶液进行洗脱，收集洗脱液并减压浓缩，经液质联用测定，得到含二

【技术实现步骤摘要】
一种五倍子有效部位的分离方法及其用途
本专利技术涉及一种五倍子有效部位的分离方法及其用途。
技术介绍
溃疡性结肠炎(UC)是一种慢性非特异性炎症性肠病(IBD)，一般连续分布，累及结肠粘膜和粘膜下层；临床主要表现为持续性或反复性发作的腹泻、黏液脓血便伴腹痛、里急后重、体重减轻以及疲劳等症状。溃疡性结肠炎(UC)与多种致病因素有关，包括环境变化、一系列易感基因变异、肠道菌群和免疫反应失调。免疫损伤是发病的主要原因，作为一种自身免疫性疾病，溃疡性结肠炎(UC)主要是遗传易感的宿主对体内外正常刺激产生的异常免疫反应，患者的肠黏膜免疫通常被破坏，且可能出现免疫功能异常等肠外并发症。目前，非甾体类抗炎药(NSAID)、糖皮质激素、免疫抑制药物、生物制剂等治疗炎性疾病的方法已被广泛研究，但这些现有的治疗方法有其自身的局限性。五倍子是同翅目蚜虫科的角倍蚜或倍蛋蚜雌虫寄生在红麸杨、青麸杨、盐肤木等植物的叶子上而形成的虫瘿，最早记载于《开宝本草》。它主产于我国陕西、四川、贵州等地，主要成分为没食子酸和鞣质，其中没食子鞣质含量是50％-70％。在临床上多用于治疗肺虚肺热痰嗽、久泻久痢、盗汗、消渴、便血痔血、外伤出血等。唐建洲等人公开了一种五倍子提取物的制备方法及应用(中国专利201810166779.2)；聂少平等人发现了一种五倍子活性提取物的制备方法及在抑制幽门螺杆菌中的应用(中国专利：201510276758.2)；贺庆等人公开了一种五倍子有效组分及其制备方法与用途(中国专利：200710150159.1)。但有关五倍子有效部位的分离方法及其在溃疡性结肠炎治疗方面的应用未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种五倍子有效部位的分离方法及其用途，该方法将五倍子药材粉碎过筛，回流提取，合并提取液，采用聚酰胺树脂为填料进行柱层析，以不同体积比的乙醇-水溶液进行洗脱，并收集70％洗脱液，经液质联用测定，得到五倍子有效部位二-O-没食子酰基葡萄糖，三-O-没食子酰基葡萄糖，没食子酸乙酯，四-O-没食子酰基葡萄糖，双没食子酸乙酯。经药理研究表明：五倍子有效部位对溃疡性结肠炎小鼠有明显的治疗作用；可显著提高溃疡组织中超氧化物歧化酶(SOD)、降低丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的含量，并显著降低白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎症因子的表达。本专利技术所述的一种五倍子有效部位的分离方法，按下列步骤进行：a、选用同翅目蚜虫科的角倍蚜或倍蛋蚜雌虫寄生在红麸杨、青麸杨、盐肤木植物的叶子上形成的虫瘿作为五倍子药材；b、将五倍子药材粉碎，过60目筛，称取80g药材粉末，以240mL蒸馏水为溶剂回流提取3次，每次提取2.5h，合并提取液；c、将步骤b得到的提取液，以聚酰胺树脂为填料进行柱层析，以体积浓度10％，30％，70％的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70％的洗脱液并减压浓缩，经液质联用测定，得到含二-O-没食子酰基葡萄糖，三-O-没食子酰基葡萄糖，没食子酸乙酯，四-O-没食子酰基葡萄糖，双没食子酸乙酯的有效部位。所述方法获得的五倍子有效部位在制备治疗溃疡性结肠炎的药物中的用途。通过液质联用分析系统分析五倍子水提液中各成分，表1列出了各成分分析信息。表1五倍子各成分分析信息本专利技术所述的一种五倍子有效部位的分离方法及其用途，该方法选用的是同翅目蚜虫科的角倍蚜或倍蛋蚜雌虫寄生在红麸杨、青麸杨、盐肤木等植物的叶子上而形成的虫瘿作为五倍子药材；并采用聚酰胺树脂为填料分离出五倍子有效部位后用于治疗溃疡性结肠炎小鼠，结果表明五倍子有效部位具有防治炎症性肠病方面的成药潜力。为研究五倍子有效部位对溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用，采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建结肠炎模型，造模成功后用五倍子有效部位进行治疗，以小鼠体重、疾病活动指数评分(DAI)、脾重、结肠长度、粪便状态的变化作为评价指标，并检测小鼠结肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的含量以及白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子的表达，并对结肠组织进行HE染色。试验结果表明：五倍子有效部位给药组动物溃疡基本愈合，与模型动物相比较，五倍子有效部位给药动物组织中的超氧化物歧化酶(SOD)的含量显著增加(P<0.001)，丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的含量的含量显著降低(P<0.001)；给药组血清中白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子的表达水平降低(P<0.05)。本专利技术所述的一种五倍子有效部位的分离方法及其用途，将五倍子药材粉碎过筛，称取80g药材粉末，以240mL蒸馏水为溶剂回流提取3次，每次提取2.5h，合并提取液，以聚酰胺树脂为填料进行柱层析，以体积浓度10％，30％，70％的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70％的洗脱液并减压浓缩，经液质联用测定，得到五倍子有效部位二-O-没食子酰基葡萄糖，三-O-没食子酰基葡萄糖，没食子酸乙酯，四-O-没食子酰基葡萄糖，双没食子酸乙酯成分。经药理研究表明，五倍子有效部位对溃疡性结肠炎小鼠有明显的治疗作用；可显著提高溃疡组织中超氧化物歧化酶(SOD)的含量，降低丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的含量，并显著降低白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子的表达。附图说明图1为本专利技术五倍子有效部位的液相色谱图；图2为本专利技术五倍子有效部位对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠体重的影响及疾病活动指数评分(DAI)评分图，其中数据表示为平均值±S.D.###与对照组相比P<0.001；*与葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)组相比*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；a，空白组；b,模型组；c,阳性药组；d，五倍子有效部位给药组；图3为本专利技术五倍子有效部位对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠结肠长度、粪便状态及脾指数的影响图，其中数据表示为平均值±S.D.###与对照组相比P<0.001；*与葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)组相比*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；a为空白组；b为模型组；c为阳性药组；d为五倍子有效部位给药组；图4为本专利技术五倍子有效部位对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)含量的影响图，其中数据表示为平均值±S.D.###与对照组相比P<0.001；*与葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)组相比*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；a为空白组；b为模型组；c为阳性药组；d为五倍子有效部位给药组；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种五倍子有效部位的分离方法，其特征在于按下列步骤进行：/na、选用同翅目蚜虫科的角倍蚜或倍蛋蚜雌虫寄生在红麸杨、青麸杨、盐肤木植物的叶子上形成的虫瘿作为五倍子药材；/nb、将选用的五倍子药材粉碎，过60目筛，称取80g药材粉末，以240 mL蒸馏水为溶剂回流提取3次，每次提取2.5 h，合并提取液；/nc、将步骤b得到的提取液，以聚酰胺树脂为填料进行柱层析，以体积浓度10%，30%，70%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70%的洗脱液并减压浓缩，经液质联用测定，得到含二

【技术特征摘要】
1.一种五倍子有效部位的分离方法，其特征在于按下列步骤进行：
a、选用同翅目蚜虫科的角倍蚜或倍蛋蚜雌虫寄生在红麸杨、青麸杨、盐肤木植物的叶子上形成的虫瘿作为五倍子药材；
b、将选用的五倍子药材粉碎，过60目筛，称取80g药材粉末，以240mL蒸馏水为溶剂回流提取3次，每次提取2.5h，合并提取液；
c、将步骤b得到的提取液，以聚酰胺树...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩博，王忠英，刘永浩，杨文静，陈文，张华，田星，李晓娟，王钰莹，李鸿晔，田方圆，薛芮，刘芦荟，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65