LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供了LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用，属于生物技术领域。LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用，LamG5肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。实验证明，LamG5编码基因过表达显著升高细胞电阻水平，修复了因PFOS染毒所破坏的支持细胞间紧密连接功能，同时使细胞间连接紧密，修复了支持细胞的紧密连接结构；同时在LamG5过表达后，细胞内的骨架蛋白结构分布明显好于空质粒转染组，显示出的细胞骨架蛋白分布与空白对照组相似，这说明LamG5的过表达修复了支持细胞的细胞骨架蛋白结构。

【技术实现步骤摘要】
LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用
本专利技术属于生化
，具体涉及LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用。
技术介绍
全氟辛烷磺酸盐(perfluorooctanesulphonate，PFOS)是多种不同氟化有机物在环境中的降解产物。PFOS广泛存在于环境中，包括纺织品、纸张、皮革、日化产品等工业生产中，难于分解或降解。PFOS可在生物体内通过食物链发生富集。通过饮用水、食物等摄入机体内的PFOS很难被生物排出体外，最终富集于生物或人体的多种脏器中，其人体代谢半衰期达5年以上。大量研究显示，PFOS具有包括遗传毒性、神经毒性、发育毒性、生殖毒性等多种生物毒性，被认为是一种具有全身多脏器毒性的环境污染物。PFOS对雄性生殖功能具有破坏作用，包括诱导大鼠睾丸损伤，降低男性精子质量和睾酮水平等。层粘连蛋白-α2链(Lamininα2)是哺乳动物睾丸基膜的主要组成蛋白之一。层粘蛋白-α2在C末端一共有5个LamG结构域，LamG5位于层粘连蛋白型球状(LamG)结构域中最靠近C末端的结构域。现有技术中关于层粘连蛋白-α2的报道较多，例如LAMA2基因通过Hedgehog通路调控人间充质干细胞成骨分化的作用(朱原,2019年.)，再例如血层粘连蛋白与慢性肾功能不全相关的报道(万福俊,2001年.)。但是目前并没有关于LamG5与睾丸中支持细胞损伤有关的报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供LamG5肽的新用途，即LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用。本专利技术提供了LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用，所述LamG5肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。优选的，所述LamG5肽的编码序列的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。优选的，所述LamG5肽的编码序列以重组表达载体的形式存在；所述重组表达载体以pCI-neo为基础载体，所述LamG5肽的编码序列插入pCI-neo的XhoI/SalI多克隆位点处。优选的，所述重组表达载体的转染剂量为5～50μg/个睾丸。优选的，所述LamG5肽的编码序列的扩增引物对如SEQIDNO.3或SEQIDNO.4所示。优选的，所述睾丸中支持细胞损伤是由全氟辛烷磺酸盐引起的。优选的，所述睾丸中支持细胞损伤包括支持细胞间紧密连接功能破坏、支持细胞的紧密连接结构损伤和支持细胞的细胞骨架蛋白结构破坏。本专利技术提供的LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用，所述LamG5肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。将LamG5肽的编码基因转染至睾丸支持细胞中过表达，结果表明，转染了pCI-neo-LamG5质粒组的细胞电阻水平显著升高，并且持续至培养第七天。说明LamG5的过表达修复了因PFOS染毒所破坏的支持细胞间紧密连接功能。通过形态学观察，支持细胞PFOS染毒后，细胞-细胞间连接界面发生显著破坏，与空白对照组相比，空质粒转染组因PFOS染毒，使得细胞-细胞间连接界面呈现断续、皱缩和空洞等现象。说明支持细胞体外所形成的紧密连接结构受到了PFOS诱导的损伤。而LamG5过表达组的细胞-细胞间连接与空白对照组相似，细胞间连接紧密，没有明显的断续和皱缩等现象。结果说明LamG5的过表达修复了支持细胞的紧密连接结构。支持细胞PFOS染毒后，空质粒对照组的支持细胞骨架结构受到显著的破坏，例如Actin微丝结构由正常均匀笔直平行贯穿整个细胞质的结构变成交错蜷曲且显示出皱缩的分布；同时，Tubulin细胞骨架结构的由正常的自由舒展分布在整个细胞质的结构变成杂乱卷曲且更加聚集在细胞核周围的形态，在LamG5过表达后，细胞内的骨架蛋白结构分布明显好于空质粒转染组，显示出的细胞骨架蛋白分布与空白对照组相似，这说明LamG5的过表达修复了支持细胞的细胞骨架蛋白结构。附图说明图1为LamG5片段的PCR扩增电泳结果图；图2为pCI-neo-LamG5经哺乳动物体内过表达提取的质粒经双酶切得到的酶切产物电泳结果；图3为支持细胞体外紧密连接通透性电阻检测结果；图4为支持细胞体外紧密连接结构检测结果；图5为支持细胞体外细胞骨架蛋白Actin结构检测；图6为支持细胞体外细胞骨架蛋白Tubulin结构检测。具体实施方式本专利技术提供了LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用，所述LamG5肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示(VGLDLLVEFEFRTTRPTGVLLGVSSQKMDGMGIEMIDEKLMFHVDNGAGRFTAVYDAGSPGHMCDGRWHKVTAKKIKNRLELVVDGNQVDAQSPNAASTSADTNDPVFVGGFPDGLNQFGLTTNVRFRGCIRSLKLTKGTGKPLEVNFAKAL)。在本专利技术中，所述睾丸中支持细胞损伤优选包括支持细胞间紧密连接功能破坏、支持细胞的紧密连接结构损伤和支持细胞的细胞骨架蛋白结构破坏。所述睾丸中支持细胞损伤优选是由全氟辛烷磺酸盐(PFOS)引起的。例如，PFOS处理后，使支持细胞的电阻显著降低，使细胞-细胞间连接界面发生显著破坏，与空白对照组相比，空质粒转染组因PFOS染毒，使得细胞-细胞间连接界面呈现断续、皱缩和空洞等现象，还会造成Actin微丝结构由正常均匀笔直平行贯穿整个细胞质的结构变成交错蜷曲且显示出皱缩的分布；同时，Tubulin细胞骨架结构的由正常的自由舒展分布在整个细胞质的结构变成杂乱卷曲且更加聚集在细胞核周围的形态。在本专利技术中，所述LamG5肽通过在支持细胞中过表达发挥作用。所述LamG5肽的编码序列的核苷酸序列优选如SEQIDNO.2所示。所述LamG5肽的编码序列优选以重组表达载体的形式存在；所述重组表达载体优选以pCI-neo为基础载体，所述LamG5肽的编码序列优选插入pCI-neo的XhoI/SalI多克隆位点处。所述LamG5肽的编码序列的扩增引物对优选如SEQIDNO.3或SEQIDNO.4所示。所述LamG5肽的编码序列导入支持细胞中的方法优选转染。本专利技术对所述转染的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的转染方法即可。在本专利技术实施例中，所述转染采用转染试剂实现。所述重组表达载体的转染剂量优选为5～50μg/个睾丸，更优选15μg/个睾丸。在本专利技术中，LamG5的过表达使细胞电阻水平显著升高，修复了因PFOS染毒所破坏的支持细胞间紧密连接功能；LamG5过表达组的细胞-细胞间连接与空白对照组相似，细胞间连接紧密，没有明显的断续和皱缩等现象，说明LamG5的过表达修复了支持细胞的紧密连接结构；同时在LamG5过表达后，细胞内的骨架蛋白结构分布明显好于空质粒转染组，显示出的细胞骨架蛋白分布与空白对照组相似，这说明LamG5的过表达修复了支持细胞的细胞骨架蛋白结构。下面结合实施例对本专利技术提供的LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用进行详本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用，所述LamG5肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.LamG5肽在制备修复睾丸中支持细胞损伤的药物中的应用，所述LamG5肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述LamG5肽的编码序列的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述LamG5肽的编码序列以重组表达载体的形式存在；
所述重组表达载体以pCI-neo为基础载体，所述LamG5肽的编码序列插入pCI-neo的XhoI/SalI多克隆位点处。


4.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李林溪，郑泉恩，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院，温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33