制导和导航控制蛋白及其制备和使用方法技术

本申请提供了制导和导航控制(GNC)蛋白。在一个实施方案中，制导和导航控制(GNC)蛋白包括T细胞活化受体的结合结构域、肿瘤相关抗原的结合结构域、免疫检查点受体的结合结构域和T细胞共刺激受体的结合结构域。肿瘤相关抗原的结合结构域不与T细胞共刺激受体的结合结构域相邻。在一个实施方案中，T细胞活化受体的结合结构域与肿瘤相关抗原(TAA)的结合结构域相邻。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制导和导航控制蛋白及其制备和使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2018年3月27日提交的美国临时专利申请第62/648880号和2018年3月27日提交的美国临时专利申请第62/648888号的权益，其全部公开内容明确地以引用方式并入本文。
本申请总体涉及具有针对免疫细胞和肿瘤细胞两者上的表面分子的多特异性结合活性的制导和导航控制(GuidanceandNavigationContral，GNC)蛋白的
，并且更具体地涉及制备和使用GNC蛋白。
技术介绍
癌细胞发展各种策略以逃避免疫系统。免疫逃逸的基础机制之一是免疫系统对癌细胞的识别降低。癌症特异性抗原呈递缺陷或缺乏会导致免疫耐受和癌症进展。在存在有效的免疫识别的情况下，肿瘤使用其他机制来避免被免疫系统消除。免疫活性肿瘤产生抑制微环境以下调免疫应答。多个参与者参与成形抑制性肿瘤微环境，包括肿瘤细胞、调节性T细胞、髓系衍生的抑制性细胞、基质细胞和其它细胞类型。免疫应答的抑制可以通过免疫抑制细胞因子的分泌或从局部环境中消除必需的存活因子以细胞接触非依赖性方式进行。细胞接触依赖性抑制依赖于在细胞表面上表达的分子，例如程序性死亡配体1(PD-L1)，T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)等[Dunn等人，2004，《免疫》(Immunity)，21(2)：137-48；Adachi&Tamada，2015，《癌症科学》(CancerSci.)，106(8):945-50]。随着人们继续更好地了解肿瘤逃避免疫系统识别的机制，最近出现了针对这些机制的新的治疗模式。2011年3月25日，美国食品和药物管理局(FDA)批准用于治疗不可切除的或转移性黑色素瘤的易普利姆玛注射剂(伊匹单抗(Yervoy)，Bristol-myerssquibb)。伊匹单抗与活化的T细胞上表达的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)结合并阻断CTLA-4与抗原呈递细胞上的CD80/86的相互作用，从而阻断通过CTLA-4递送到T细胞中的阴性或抑制性信号，导致抗原特异性T细胞的再活化，从而在许多患者中根除肿瘤。在2014年的几年后，FDA批准可瑞达(Keytruda)(Pembrolizumab，默沙东)和Opdivo(Nivolumab，Bristol-myerssquibb)用于治疗晚期黑色素瘤。这些单克隆抗体与在活化和/或耗尽的T细胞上表达的PD-1结合并阻断PD-1与在肿瘤上表达的PD-L1的相互作用，从而消除通过PD-1进入T细胞的抑制信号，导致抗原特异性T细胞的再活化，在许多患者中再次导致肿瘤的根除。此后，已经进行了另外的临床试验，将单一单克隆抗体Yervoy与单克隆抗体Yevroy和Opdivo的组合在晚期黑色素瘤的治疗中进行比较，其表明，联合使用抗体可以改善患者的总体生存期和无进展生存期。(Hodi等人，2016，《柳叶刀·肿瘤》(LancetOncol.)17(11):1558-1568，Hellman等人，2018，《癌细胞》(CancerCell)33(5)：853-861)。然而，由于许多临床试验已经显示使用对一种或多种免疫检查点分子特异的单克隆抗体治疗癌症患者有很大好处，数据显示，只有那些产生抗原特异性T细胞识别的新T细胞表位的高突变负荷的患者才会显示出临床反应(Snyder等人，2014，NEJM371:2189-2199)。具有低肿瘤突变负荷的那些患者通常不显示客观的临床反应(Snyder等人，2014，NEJM371：2189-2199，Hellman等人，2018，《癌细胞》(CancerCell)33(5):853-861)。近年来，其他研究小组已经开发了不需要抗原呈递细胞存在新表位呈递来激活T细胞的替代方法。一个实例是双特异性抗体的开发，其中对肿瘤相关抗原特异的抗体的结合结构域，例如CD19，与T细胞上对CD3特异的抗体结合结构域连接，从而产生双特异性T细胞接合器或咬合(BiTe)分子。2014年，FDA批准了一种称为Blinatumumab的双特异性抗体，用于治疗前体B细胞急性成淋巴细胞性白血病(PrecursorB-CellAcuteLymphoblasticLeukemia)。Blinatumumab将在白血病细胞上表达的对CD19特异的scFv与在T细胞上表达的对CD3特异性的scFv连接(Bejnjamin和Stein2016，TherAdvHematol7(3):142-146)。然而，尽管在患有复发性或难治性ALL的患者中初始应答率>50％，但许多患者对Blinatumumab治疗有抗性或用Blinatumumab成功治疗后复发。有证据表明对Blinatumumab耐药或Blinatumumab治疗后复发可归因于在肿瘤细胞上表达的免疫检查点抑制分子的表达，例如通过在活化的T细胞上表达的PD-1驱动抑制信号的PD-L1(Feucht等人，2016，Oncoarget7(47):76902-76919)。在一例对Blinatumab治疗耐药的患者中，进行了第二轮Blinatumab治疗，但添加了一种单克隆抗体pembrolizumab(Keytruda，Merck)，其特异性地与PD-1结合，并阻断了T细胞表达的PD-1与肿瘤细胞表达的PD-L1的相互作用，导致该患者骨髓中的肿瘤细胞显著应答和降低，从45％减少到不到5％(Feucht等人，2016，Oncoarget7(47):76902-76919)。这些结果表明将双特异性咬合(BiTe)分子与一种或多种单克隆抗体组合与任一单独药剂相比可以显著增加临床活性。尽管结果很有希望，但由于多项临床试验和招募有代表性的人群的困难，导致联合治疗的成本肯定很高。采用嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的过继细胞治疗是另一种有前景的用于治疗癌症的免疫疗法。CAR-T疗法的临床成功已经显示CD19阳性治疗难治性B细胞恶性肿瘤患者的持久完全缓解和生存期延长(Gill&June2015，ImmunolRev，263：68-89)。然而，与制造个性化和基因修饰的CAR-T免疫治疗相关的成本和复杂性已经将它们的生产和使用限制到用于治疗相对少量患者的专门中心。细胞因子释放综合征(CRS)，也称为细胞因子风暴是工程改造的CAR-T细胞输注后最显著的副作用(Bonifant等人，201，MolTherOncolytics.，3：16011)。在许多情况下，CRS的发作和严重程度似乎是特定个人事件。目前减轻CRS的选择主要集中在快速响应和管理护理上，因为在T细胞输注之前控制CRS的选择是有限的。虽然目前已确定了针对CD19阳性B细胞恶性肿瘤的CAR-T疗法的功效，但迄今尚未明确证实针对实体瘤的CAR-T疗法的功效。目前，许多临床试验正在进行中，以探索用于CAR-T疗法的多种实体瘤相关抗原(TAA)。目前认为实体瘤CAR-T疗法的主要障碍是T细胞向肿瘤内转运效率低、肿瘤微环境免疫抑制、抗原识别特异性不佳以及治疗相关不良事件缺乏控制(Li等人，2018，JHematolOncol.，11(1):本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制导和导航控制(GNC)蛋白，包括，/nT细胞活化受体的结合结构域，/n肿瘤相关抗原的结合结构域，/n免疫检查点受体的结合结构域，和/nT细胞共刺激受体的结合结构域，/n其中，所述肿瘤相关抗原的所述结合结构域不与所述T细胞共刺激受体的所述结合结构域相邻。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180327 US 62/648,888;20180327 US 62/648,8801.一种制导和导航控制(GNC)蛋白，包括，
T细胞活化受体的结合结构域，
肿瘤相关抗原的结合结构域，
免疫检查点受体的结合结构域，和
T细胞共刺激受体的结合结构域，
其中，所述肿瘤相关抗原的所述结合结构域不与所述T细胞共刺激受体的所述结合结构域相邻。


2.根据权利要求1所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中所述T细胞活化受体的所述结合结构域与所述肿瘤相关抗原(TAA)的所述结合结构域相邻。


3.根据权利要求1所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中T细胞活化受体包括CD3。


4.根据权利要求1所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中免疫检查点受体包括PD-L1、PD-1、TIGIT、TIM-3、LAG-3、CTLA4、BTLA、VISTA、PDL2、CD160、LOX-1、siglec-15、CD47或其组合。


5.根据权利要求1所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中T细胞共刺激受体包括4-1BB、CD28、OX40、GITR、CD40L、ICOS、Light、CD27、CD30或其组合。


6.根据权利要求1所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中肿瘤相关抗原包括ROR1、CD19、EGRFVIII、BCMA、CD20、CD33、CD123、CD22、CD30、CEA、HER2、EGFR、LMP1、LMP2A、间皮素、PSMA、EpCAM、glypican-3、gpA33、GD2、TROP2或其组合。


7.根据权利要求1所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中所述肿瘤相关抗原是肺癌细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞、结直肠癌细胞、肛门癌细胞、胰腺癌细胞、胆囊癌细胞、胆管癌细胞、头颈部癌细胞、鼻咽癌细胞、皮肤癌细胞、黑色素瘤细胞、卵巢癌细胞、前列腺癌细胞、尿道癌细胞、肺癌细胞、非小细胞肺癌细胞、小细胞肺癌细胞、脑瘤细胞、胶质瘤细胞、神经母细胞瘤细胞、食管癌细胞、胃癌细胞、肝癌细胞、肾癌细胞、膀胱癌细胞、宫颈癌细胞、子宫内膜癌细胞、甲状腺癌细胞、眼癌细胞、肉瘤细胞、骨癌细胞、白血病细胞、骨髓瘤细胞、淋巴瘤细胞或其组合上的受体。


8.根据权利要求1所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中所述蛋白是包括Fc结构域的三特异性抗体或四特异性抗体。


9.根据权利要求8所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中所述T细胞活化受体包括CD3，并且其中CD3的所述结合结构域通过肽接头与所述肿瘤相关(TAA)抗原的所述结合结构域连接以形成CD3-TAA对，其中所述肽接头具有不超过100个氨基酸的长度。


10.根据权利要求9所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中所述肽接头具有不超过20个氨基酸的长度。


11.根据权利要求9所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中所述肽接头具有不超过10个氨基酸的长度。


12.根据权利要求9所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中所述肽接头具有约2个氨基酸至约10个氨基酸的长度。


13.根据权利要求9所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中所述肿瘤相关抗原包括ROR1、CD19或EGRFVIII。


14.根据权利要求9所述的制导和导航控制(GNC)蛋白，其中所述IgGFc结构域间隔所述CD3-TAA对和所述免疫检查点受体的所述结合结构域。

【专利技术属性】
技术研发人员：朱义，欧勒·奥尔森，夏冬，大卫·耶利曼，卡特里娜·贝科娃，安妮玛丽·卢梭，比尔·布雷迪，布莱尔·伦肖，布莱恩·科瓦切维奇，梁玉，卡米拉·王，高泽人，黄辉，
申请(专利权)人：西雅图免疫公司，四川百利药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US