产生用于调控免疫的肽、多肽或细胞的方法技术

本发明专利技术涉及基于NKT细胞的激活水平来确定肽表位选择性结合CD1a、CD1b和/或CD1c蛋白质的能力的方法，通过修饰所述表位或其侧翼区域来增加或减少所述肽表位与CD1a、CD1b和/或CD1c蛋白质的选择性结合的相应方法，通过这些方法可获得的相应的经修饰的表位和激活的NKT细胞或其部分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产生用于调控免疫的肽、多肽或细胞的方法
本专利技术涉及产生肽的方法(所述肽涵盖激活天然杀伤T(NKT)细胞的表位)及其在治疗其中引发先天性免疫应答是有利的病症中的用途，例如在肿瘤、感染性疾病、慢性自身免疫性疾病和炎性疾病、以及免疫衰老中。本专利技术还涉及产生肽或多肽的方法(所述肽或多肽已丧失其激活NKT细胞的能力)，用于在其中出于治疗目的必须给予同种异体抗原或将个体暴露于食物的情况下使用。进一步地，本专利技术涉及经修饰的肽，以抑制所述同种异体抗原的免疫原性。本专利技术还涉及经工程化以携带嵌合受体的细胞，用于肿瘤和自身免疫性疾病的治疗。
技术介绍
先天性免疫被认为是非特异性的，在意义上，它是通过特异于与外在或内在分子相关的模式的受体识别侵入剂而引发的。因此，病原体相关分子模式(PAMP)结合并激活受体如Toll样受体(TLR)，并且由例如氧化应激产生的分子结合并激活损伤相关分子模式(DAMP)。被归类为先天性免疫的一部分的NKT谱系的细胞实际上占据了先天性应答和适应性应答之间的中间位置，只要NKT细胞表达能够与表达充当限制性元件的MHC样CD1分子的抗原呈递细胞形成同源突触的抗原特异性受体(CD3)。NKT细胞识别与CD1分子结合的脂质或糖脂并被它们激活。这种激活的范例由NKT细胞表示，所述NKT细胞携带作为CD3受体一部分的不变α链，并且通过糖脂(α-gal-神经酰胺)的呈递来激活，所述糖脂经由与CD1分子(CD1d)结合来呈递，所述CD1d是CD1分子的不同组(第2组)的唯一组分。因此，关于NKT细胞的常规观点包括几乎完全不变的NKT(iNKT)或1型NKT细胞，这些细胞在由第2组CD1d分子呈递的上下文中被α-gal-神经酰胺激活(参见综述，例如Matsuda等人,CurrentOpinioninImmunology[免疫学新见]2008,20:358-368和Godfrey等人,NaturereviewsImmunology[免疫学自然综述]2010,11:197-206)。携带不同CD3α链的不太明确的2型NKT细胞也是有区别的，对于由第2组CD1d分子呈递的脂质或糖脂具有特异性。CD1分子的不同组(称为第1组CD1并且包括CD1a、CD1b、CD1c和CD1e分子)在人中表达，但在小鼠中不表达。CD1基因座编码在1号染色体上。这种第1组CD1分子参与细胞表面筛选，细胞内运输和在细胞表面呈递衍生自感染原或来自内源性来源的许多脂质或糖脂。其最好的实例是硫苷脂和衍生自感染结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)的细胞的产物(Felio等人,JournalofExperimentalMedicine[实验医学杂志],2009,206:2497-2509)。它们彼此之间并且与CD1d在其结构、分布、调控、细胞内运输、分子相互作用和功能方面大不相同。CD1e局限于细胞内环境，而CD1a、CD1b和CD1c在细胞表面表达，因此可直接与NKT谱系的细胞相互作用。在所有上述现有技术中，认为NKT细胞仅通过脂质或糖脂识别并被激活，而不是通过肽序列。然而，专利申请WO2012069568、WO2012069572、WO2012069575和WO2013174805描述了来自多种抗原的许多CD1d限制性肽表位，所述抗原既是内在的(例如GAD65)，也是外在的(例如来自病毒载体的那些)。这类表位可用于增加特异性NKT细胞的激活，特别是当结合到侧翼残基内的氧化还原酶基序时(WO2012069568)，或通过引入单个氨基酸残基突变来增加表位核心序列的结合(WO2012069572)。同样，专利申请WO2012069575描述了从治疗性蛋白质中消除CD1d限制性表位，以防止不希望的NKT细胞的激活，其中专利申请WO2013174805描述了降低通过给予凝血因子VIII来治疗甲型血友病所引发的NKT细胞的CD1d限制性激活的方法。如上述专利申请中所述的肽表位特异性NKT细胞受CD1d(其是第2组MHC样限制分子的代表)限制。在许多病理状况中，显著地是用于治疗肿瘤和细胞内病原体感染，仍存在巨大的未满足的医疗需求。尽管在肿瘤治疗方面取得了显著的进展，包括靶向检查点抑制剂和嵌合抗原受体(CAR)T细胞的治疗性抗体，但这些方法的功效仅限于少数患者，无法预测哪些患者会有应答。肿瘤微环境的复杂性、其多功能性、所涉及的细胞数量以及这种微环境中的一般免疫抑制条件使得有效且可预测的治疗远远达不到目标。肿瘤共有许多代谢异常，这可能构成用于疗法(其不会伤害其他组织)设计的适当和安全的目标。不幸地是，大多数肿瘤细胞下调分子的表面表达，包括主要组织相容性复合物(MHC)的那些，从而变得对适应性免疫应答不可见。此外，出现复杂的肿瘤内和肿瘤周围调节回路，所述调节回路中和免疫系统消除肿瘤细胞的尝试。细胞内病原体包括病毒性疾病、细菌、分枝杆菌和寄生虫。大多数这些病原体通过使MHC机制的组分、衔接蛋白或参与激活感染的细胞的途径转向，产生了中和特异性适应性应答的策略。因此，感染的细胞变得对参与适应性免疫应答的细胞不可见。然而，除了一些例外，例如1型和2型疱疹病毒，感染的细胞保持其在其表面与CD1分子结合呈递抗原的能力。实际上众所周知的是，例如，感染有结核分枝杆菌的巨噬细胞在其表面表达与CD1分子结合的脂质。在许多病理状况中，特别是在慢性自身免疫性疾病和慢性炎性疾病的治疗中，也存在巨大的未满足的医疗需求。与肿瘤或感染无关的慢性疾病包含自身免疫性成分和炎性成分。因此，组织炎症释放抗原，所述抗原由于在胸腺中缺乏生理暴露而没有获得耐受性，或者被炎症充分修饰以成为新的抗原。自身免疫性应答有助于炎症，从而产生维持疾病过程的积极反馈机制。这种错综的发病机制事实上限制了对非特异性措施的所有治疗性尝试，例如像，抑制免疫系统或限制细胞进入受影响器官的抗炎药物或治疗性抗体。如果可以鉴定起始抗原或与病理直接相关的抗原中的至少一种，那么开发抗原特异性方法是可行的，通过这种方法可以控制整个疾病过程。已经尝试抑制复杂的免疫应答。然而，在所有这些情况下，引发并维持自身免疫性病理应答的慢性自身抗原特异性炎性成分基本上不受影响。因此，在治疗慢性自身免疫性疾病(包括1型糖尿病、多发性硬化症、类风湿性关节炎、自身免疫性甲状腺炎和乳糜泻，仅举几例)中存在显著的未满足的医疗需求。引发具有调节特性的NKT细胞将表示减少炎症和自身免疫性应答的抗原特异性方法。在慢性哮喘和慢性阻塞性或非阻塞性肺疾病中，许多抗原触发并维持慢性炎症。过敏原，例如来自屋尘螨的那些，表示过敏性哮喘的主要原因之一。慢性感染(例如流感嗜血杆菌)或慢性阻塞性肺疾病中对弹性蛋白的免疫应答表示触发炎性反应的抗原的来源。通过引发具有调节特性的NKT细胞来减少炎症将表示减少炎症并因此减少局部组织破坏的方法。与内质网应激相关的病症很多，并且没有特异性治疗。除了慢性自身免疫性疾病、肿瘤或慢性细胞内感染外，导致细胞免疫衰老的机制也伴随着这种应激条件本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种确定肽表位选择性结合CD1a、CD1b和/或CD1c蛋白质的能力的方法，所述方法包括以下步骤：/na)提供在其表面表达CD1a、CD1b和/或CD1c的分离的细胞；/nb)选择性地将所述表位应用于所述分离的细胞；/nc)使NKT细胞与步骤b的可能呈递所述表位的细胞接触；/nd)以及测量所述NKT细胞的激活水平。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170414 EP 17166696.91.一种确定肽表位选择性结合CD1a、CD1b和/或CD1c蛋白质的能力的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供在其表面表达CD1a、CD1b和/或CD1c的分离的细胞；
b)选择性地将所述表位应用于所述分离的细胞；
c)使NKT细胞与步骤b的可能呈递所述表位的细胞接触；
d)以及测量所述NKT细胞的激活水平。


2.如权利要求1所述的方法，其中，所述表位来自分离的蛋白质或包含蛋白质或其片段的氨基酸序列的合成肽，所述蛋白质来自肿瘤、细胞内病原体、自身抗原、生物蛋白质、过敏原或引起慢性炎症的介质，和/或其中所述表位包含翻译后修饰的氨基酸，所述翻译后修饰的氨基酸的疏水性高于相应的未修饰的氨基酸。


3.一种通过如前述权利要求中任一项所述的方法可获得的肽，该肽用于针对癌症、针对细胞内病原体感染、针对自身免疫性疾病或针对过敏性疾病的疫苗接种。


4.一种增加表位结合CD1a、CD1b和/或CD1c蛋白质的能力的方法，所述方法包括以下步骤：
a)提供在其表面表达CD1a、CD1b和/或CD1c的分离的细胞；
b)特异性地将所述表位应用于所述分离的细胞；
c)使NKT细胞与步骤b的细胞接触；
d)测量所述NKT细胞的低激活或无激活；
e)通过添加选自由疏水性氨基酸，疏水性翻译后修饰的氨基酸残基组成的组的部分和/或缺失存在于所述表位中的非疏水性氨基酸来修饰所述表位，以生成经修饰的蛋白质；
f)特异性地将所述经修饰的表位应用于所述分离的细胞；
g)使NKT细胞与步骤f的可能呈递所述经修饰的表位的细胞接触；以及
h)选择经修饰的表位，所述经修饰的表位显示相比步骤d的测量，步骤g中的所述NKT细胞的激活增加。


5.如权利要求4所述的方法，其中，所述NKT细胞是CD8+或CD4-/CD8-，并且优选地其中所述表位衍生自癌细胞或衍生自感染细胞内病原体的细胞。


6.如权利要求4或5所述的方法，所述方法还包括在所述表位的一个或两个侧翼区域中添加棕榈酰-半胱氨酸部分、CD8特异性结合部分、TLR激动剂和/或在两个侧翼区域中添加半胱氨酸氨基酸或半胱氨酸基序的步骤。


7.一种通过如权利要求5或6所述的方法可获得的肽，所述肽用于针对癌症或细胞内病原体的治...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉恩玛丽圣雷米，
申请(专利权)人：伊姆耐特有限责任公司，
类型：发明
国别省市：卢森堡;LU