一种检测牛的配种时机的方法技术

本发明专利技术提供一种检测牛的配种时机的方法，包括：收集母牛在上次小便后1‑2小时再小便的尿液；将牛的促黄体生成素LH检测试纸插入步骤1）的尿液中5‑‑10秒，于15‑18分钟后，观察试纸中的质控线C与检测线T是否显色：质控线C未显色、检测线T显色，检测结果无效；质控线C显色，检测线T未显色，母牛的促黄体生成素LH水平低下；质控线C及检测线T都显色，与LH比色卡进行对比；LH≦10mIU/ml,母牛的卵细胞未成熟，不能配种；LH在10—25mIU/ml，母牛进入排卵期，每隔4小时重复步骤1）‑3）进行检测，直至LH达到45‑‑100mIU/m时，母牛的排卵时间在5‑‑10小时，可配种。

【技术实现步骤摘要】
一种检测牛的配种时机的方法
本专利技术涉及一种检测方法，尤其是一种检测牛的配种时机的方法，属于动物检测方法

技术介绍
目前，在牛的繁殖过程中，牛的配种或输精时机通常选择在母牛的自然发情期。在实际生产中主要通过试情，观察其行为，检查阴道及其分泌物，直肠检查触摸卵巢等，来判断母牛的排卵时间，指导自然配种或人工授精。通常在一个发情期输精1—2次，由于精子到达输卵管壶腹获能并最终具有受精能力，一般需要数小时，且在生殖道内存活时间较卵子保持受精能力的时间长，因此，会通过估计排卵前数小时进行第一次输精，第二次输精会在估计卵子受精能力丧失之前进行，但在实际生产过程中，上述时间就个体而言有差异，不易准确掌握，所以会固定时间，将两次输精的间隔时间固定在8—10小时，而牛的排卵发生在发情停止后4---16小时，个体差异性较大，需多次输精才能使母牛受孕，但多次输精也会导致母牛体内产生抗精子的抗体，致使后期形成不孕不育。母牛卵细胞的成熟与卵泡的破裂受促黄体生成素LH高峰的调节，于促黄体生成素LH高峰后20--24小时排卵，越靠近排卵时间进行配种或输精，牛的配种成功率就越高。
技术实现思路
鉴于上述牛的生理特征，本专利技术提供一种检测牛的配种时机的方法，以将牛的排卵时间准确预测在5—10小时内，从而提高牛单次配种的成功率。本专利技术通过下列技术方案完成：一种检测牛的配种时机的方法，其特征在于包括下列步骤：1）收集母牛在上次小便后1-2小时再小便的尿液1-10ml；2）将牛的促黄体生成素LH检测试纸插入步骤1）的尿液中5--10秒，取出，于15-18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T是否显色：3）显色结果如下：试纸质控线C未显色、检测线T显色，表明检测结果无效，需要重新检测；试纸质控线C显色，检测线T未显色，表明母牛的促黄体生成素LH水平低下，需要隔日再检测；试纸质控线C及检测线T都显色，用该显色与LH比色卡进行下列对比；31）当促黄体生成素LH≦10mIU/ml,表明母牛的促黄体生成素LH处于基础水平，卵细胞尚未成熟，不能配种；32）当促黄体生成素LH在10—25mIU/ml时，表明母牛开始进入排卵期，需要每隔4小时重复步骤1）-3）进行一次检测，每天检测三次，直至母牛的促黄体生成素LH达到45---100mIU/m时，表明母牛的促黄体生成素LH高峰到来，距离排卵时间5--10小时；4）根据步骤3）的检测结果，进行自然或人工配种。所述步骤4）的自然或人工配种时，公牛的精子进入到母牛体内的存活时间是：24-36小时。所述步骤2）牛的促黄体生成素LH检测试纸经过下列方法制备：21）按下列制备各组分：金溶液：将质量浓度为1%的氯金酸溶液2ml、质量浓度为1%的柠檬酸钠2ml，加入纯化水至100ml，加热至溶液呈现紫红色后，冷却至室温，得金溶液；封闭液：将0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul纯化水中，加入30ul碳酸钾溶液，混合均匀，得330ul封闭液；样本垫处理液：将0.605g三羧甲氨基甲烷、1.5g氯化钠完全溶解在100ml纯化水中，得样本垫处理液；胶体金结合物稀释液：将0.605g三羧甲氨基甲烷，0.2g聚乙烯吡咯烷酮，5g蔗糖，0.9g氯化钠，0.5g牛血清白蛋白，3ml牛血清，0.15ml吐温20，与100ml纯化水混合均匀，得胶体金结合物稀释液；LH包被液：将LHmAbCoating抗体100-200mg、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01MPBS缓冲液100ml中，混合均匀，得LH包被液；IgG包被液：将100-200mg牛的促黄体生成素单克隆α亚级抗体LHmAbCoating、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01MPBS缓冲液100ml中，混合均匀，得IgG包被液；22）在底板上划膜22A）将NC膜贴在PVC板上表面的中部，得底板；22B）按0.8μl/cm的量，以500mm/s的速度，将步骤21）的IgG包被液均匀地划在步骤22A）底板上的NC膜的上端作为质控线C，将LH包被液均匀地划在NC膜的下端作为检测线T，质控线C与检测线T相距6mm±1mm，质控线C距离NC膜上端8mm±1mm，检测线T距离NC膜下端7mm±1mm，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得划膜板；23）金垫制备23A）在100ml步骤21）的金溶液中加入1.2ml碳酸钾溶液、1.5-2mgLHmb2，搅拌40min，滴加330ul封闭液，搅拌10min，于4℃、12000r/min的条件下离心40min，直至上清液变为水，弃上清液，取余液5.3ml，加入40ml胶体金结合物稀释液混匀；23B）将40ml胶体金结合物稀释液均匀铺在1080cm2玻璃纤维素膜上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得金垫；24）样本垫制备24A）按30ml/张的量，将步骤21）的样本垫处理液均匀铺在玻璃纤维素膜上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得样本垫；25）贴板25A）将步骤23）的金垫贴于步骤22B）划膜板的NC膜下端，并使1-2mm的金垫后端搭在NC膜上；25B）将步骤24）的样本垫贴于步骤25A）的金垫前端上面，并使样本垫后端完全搭在金垫上，样本垫前端贴于PVC板前端；25C）将吸水垫贴于25B）的PVC板后端，并使1-2mm的吸水垫前端搭在NC膜后端；26）将步骤25C）贴板切割成3.0±0.5mm的试纸条，得牛的促黄体生成素LH检测试纸。本专利技术具有下列优点和效果：采用上述方案，可方便地在母牛发情期，提取其血清或尿液，用本专利技术提供的促黄体生成素LH检测试纸进行促黄体生成素LH的检测，通过检测母牛的促黄体生成素LH水平，与比色卡进行下列对比，可以将母牛的排卵时间准确预测在5—10小时内，而公牛的精子进入到母牛体内的存活时间是24-36小时，因此，可大大提高羊的配种成功率，且通过一次自然交配或人工输精，即可配种成功。从根本上解决了现有技术只能通过目测母牛是否发情，而进行自然交配或人工输精导致需通过多次配种或输精才能成功的弊端，节约了大量的人力、物力、财力、时间，提高羊的繁殖率。附图说明图1为LH检测试纸条的结构示意图；图2为LH比色卡图。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1牛的促黄体生成素LH检测试纸经过下列方法制备：1）按下列制备各组分：11）金溶液：将质量浓度为1%的氯金酸溶液2ml、质量浓度为1%的柠檬酸钠2ml，加入纯化水至100ml，加热至溶液呈现紫红色后，冷却至室温，得金溶液；12）封闭液：将0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul纯化水中，加入3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测牛的配种时机的方法，其特征在于包括下列步骤：/n1）收集母牛在上次小便后1-2小时再小便的尿液1-10ml；/n2）将牛的促黄体生成素LH检测试纸插入步骤1）的尿液中5--10秒，取出，于15-18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T是否显色：/n3）显色结果如下：/n试纸质控线C未显色、检测线T显色，表明检测结果无效，需要重新检测；/n试纸质控线C显色，检测线T未显色，表明母牛的促黄体生成素LH水平低下，需要隔日再检测；/n试纸质控线C及检测线T都显色，用该显色与LH比色卡进行下列对比；/n31）当促黄体生成素LH≦10mIU/ml,表明母牛的促黄体生成素LH处于基础水平，卵细胞尚未成熟，不能配种；/n32）当促黄体生成素LH在10—25mIU/ml时，表明母牛开始进入排卵期，需要每隔4小时重复步骤1）-3）进行一次检测，每天检测三次，直至母牛的促黄体生成素LH达到45---100mIU/m时，表明母牛的促黄体生成素LH高峰到来，距离排卵时间5--10小时；/n4）根据步骤3）的检测结果，进行自然或人工配种。/n所述步骤4）的自然或人工配种时，公牛的精子进入到母牛体内的存活时间是：24-36小时。/n...

【技术特征摘要】
1.一种检测牛的配种时机的方法，其特征在于包括下列步骤：
1）收集母牛在上次小便后1-2小时再小便的尿液1-10ml；
2）将牛的促黄体生成素LH检测试纸插入步骤1）的尿液中5--10秒，取出，于15-18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T是否显色：
3）显色结果如下：
试纸质控线C未显色、检测线T显色，表明检测结果无效，需要重新检测；
试纸质控线C显色，检测线T未显色，表明母牛的促黄体生成素LH水平低下，需要隔日再检测；
试纸质控线C及检测线T都显色，用该显色与LH比色卡进行下列对比；
31）当促黄体生成素LH≦10mIU/ml,表明母牛的促黄体生成素LH处于基础水平，卵细胞尚未成熟，不能配种；
32）当促黄体生成素LH在10—25mIU/ml时，表明母牛开始进入排卵期，需要每隔4小时重复步骤1）-3）进行一次检测，每天检测三次，直至母牛的促黄体生成素LH达到45---100mIU/m时，表明母牛的促黄体生成素LH高峰到来，距离排卵时间5--10小时；
4）根据步骤3）的检测结果，进行自然或人工配种。
所述步骤4）的自然或人工配种时，公牛的精子进入到母牛体内的存活时间是：24-36小时。


2.根据权利要求1所述的检测牛的配种时机的方法，其特征在于所述步骤2）牛的促黄体生成素LH检测试纸经过下列方法制备：
21）按下列制备各组分：
金溶液：将质量浓度为1%的氯金酸溶液2ml、质量浓度为1%的柠檬酸钠2ml，加入纯化水至100ml，加热至溶液呈现紫红色后，冷却至室温，得金溶液；
封闭液：将0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul纯化水中，加入30ul碳酸钾溶液，混合均匀，得330ul封闭液；
样本垫处理液：将0.605g三羧甲氨基甲烷、1.5g氯化钠完全溶解在100ml纯化水中，得样本垫处理液；
胶体金结合物稀释液：将0.605g三羧甲氨基甲烷，0.2g聚乙烯吡咯烷酮，5g蔗糖，0.9g氯化钠，0.5g牛血清白蛋白，3ml牛血清，0.15ml吐温20，与100ml纯化水混合均匀，得胶体金结合物稀释液；
LH包被液：将LHmAbCoating抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：金义达，
申请(专利权)人：昆明天沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53